堿性磷酸酶是廣泛分布于人體肝臟、骨骼、腸、腎和胎盤等組織經(jīng)肝臟向膽外排出的一種酶，是免疫診斷試劑中常用的生物標(biāo)志物，也是重要的治療靶點(diǎn)。檢測(cè)堿性磷酸酶可用于肝臟功能異常，骨質(zhì)疏松和糖尿病等疾病的診斷。常見的堿性磷酸酶底物有PNPP、BCIP/NBT組合。

PNPP：中文名稱為對(duì)硝基苯磷酸二鈉,廣泛用作ELisa檢測(cè)堿性磷酸酶的底物。原理是，堿性溶液中無(wú)色的對(duì)硝基苯磷酸二鈉（PNPP）可被堿性磷酸酶催化分解出磷酸?；?，磷酸?；c受體物結(jié)合，生成游離的對(duì)硝基苯酚，對(duì)硝基苯酚在堿性溶液中轉(zhuǎn)變?yōu)轷浇Y(jié)構(gòu)，呈現(xiàn)較深的黃色，即水溶性黃色產(chǎn)物。在波長(zhǎng)405nm處檢測(cè)吸光度增高速率，則可檢測(cè)堿性磷酸酶。

對(duì)硝基苯磷酸二鈉（PNPP）還用于農(nóng)藥殘留檢測(cè)、古文物膠原蛋白檢測(cè)等，也是醫(yī)藥、農(nóng)藥合成領(lǐng)域的重要化工中間體。 

BCIP/NBT：是堿性磷酸酶的發(fā)光底物組合，其原理是在堿性磷酸酯酶的催化下，BCIP會(huì)被水解產(chǎn)生強(qiáng)反應(yīng)性的產(chǎn)物，該產(chǎn)物會(huì)和NBT發(fā)生反應(yīng)，形成不溶性的深藍(lán)色至藍(lán)紫色的產(chǎn)物，具有強(qiáng)特征性，易于捕捉分析，從而達(dá)到標(biāo)記作用。

BCIP，又稱對(duì)甲苯氨藍(lán)，除作為堿性磷酸酶化學(xué)組織底物應(yīng)用于生化研究、醫(yī)藥領(lǐng)域外，還用于食品安全檢測(cè)中。 

NBT，即氯化硝基四氮唑藍(lán)，在免疫印跡實(shí)驗(yàn)中檢測(cè)堿性磷酸酶底物是其最常見的應(yīng)用。此外，氯化硝基四氮唑蘭（NBT）還作為脫氫酶和其它過氧化酶的底物，用于測(cè)定葡萄糖-6-磷酸脫氫酶、乳酸脫氫酶、超氧化物歧化酶等。