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S100B蛋白酶免ELISA試劑盒
德國(guó)DRG*，貨號(hào)：EIA5169
德國(guó)DRG中國(guó)*代理商“深圳科潤(rùn)達(dá)生物工程有限公司”竭誠(chéng)為您服務(wù)
預(yù)期用途
此試劑盒用于人血清和血漿中S100B濃度的檢測(cè)，僅用于實(shí)驗(yàn)室
實(shí)驗(yàn)原理
此試劑盒基于兩抗體與S100B結(jié)合，一個(gè)抗體固定在包被板上，另外一個(gè)則被HRP標(biāo)記。試驗(yàn)基于兩步法，每次洗板后，結(jié)合的和游離的就會(huì)分離，底物液TMB加入，會(huì)發(fā)生顏色變化，終止液加入終止反應(yīng)，吸收值檢測(cè)。樣品中的S100B的濃度計(jì)算可從標(biāo)準(zhǔn)品著手。顏色強(qiáng)度與樣品中的S100B的濃度成正比
試劑盒組成
1. S100B標(biāo)準(zhǔn)品，6支，凍干粉，STD0-STD5
2. 質(zhì)控品，2支，凍干粉，陰性質(zhì)控和陽(yáng)性質(zhì)控
3. 酶聯(lián)物緩沖液，1支，20ml，Tris緩沖液，BSA10g/L,0.05%吐溫
4. 酶聯(lián)物，1支，1ml，HRP標(biāo)記的抗S100B
5. 試驗(yàn)緩沖液，1支，12ml，Tris緩沖液，BSA10g/L，穩(wěn)定劑
6. 包被板，可拆，包被有抗S100B
7. TMB底物液，1支，15ml，H2O2-TMB 0.25g/L，避免皮膚接觸
8. 終止液，1支，15ml，0.15mol/L硫酸，避免皮膚接觸
9. 洗滌濃縮液，50X，1支，20ml，NaCl 45g/L,吐溫20 55g/L
實(shí)驗(yàn)所需但試劑盒未提供
1. 去離子水
2. 自動(dòng)移液器
3. 酶標(biāo)儀
注意：所有試劑應(yīng)保存在黑暗處2-8℃，微孔板平衡至室溫方可打開(kāi)包裝，使用完后立即密封，不要移去未用板條的粘合條
注意事項(xiàng)
1. 試劑內(nèi)含有硫柳汞防腐劑
2. 配制和吸取試劑時(shí)應(yīng)按zui高度要求操作
3. 所有試劑都有各自的批號(hào)，不要混用不同批次內(nèi)的物質(zhì)
4. S100B的檢測(cè)范圍為10-5000pg/ml
5. 標(biāo)準(zhǔn)品的具體濃度見(jiàn)瓶上標(biāo)簽
6. 不要使用嚴(yán)重溶血樣品
7. 避免底物液暴露在陽(yáng)光，金屬或氧化劑下
操作步驟
樣品準(zhǔn)備
S100B檢測(cè)可使用人血清或血漿，不要使用溶血樣品，樣品可在2-8℃下保存1天，更長(zhǎng)的保質(zhì)期的話可放置在-20℃，避免反復(fù)凍融，不要將樣品放置在室溫下的時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，樣品濃度高于5ng/ml時(shí)，應(yīng)用試驗(yàn)緩沖液進(jìn)一步稀釋
標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品的準(zhǔn)備
用1ml的去離子水配制標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品，可保存于2-8℃下4周，-20℃6個(gè)月，建議分裝保存于-20℃。標(biāo)準(zhǔn)品濃度見(jiàn)標(biāo)簽。避免反復(fù)凍融和長(zhǎng)時(shí)間暴露在室溫下
酶聯(lián)物的準(zhǔn)備
使用前2小時(shí)準(zhǔn)備
50ul的酶聯(lián)物+1.0ml的酶聯(lián)緩沖液（稀釋的酶聯(lián)物的量與試驗(yàn)樣本量成正比），混合5min，避免氣泡產(chǎn)生，室溫下（22-28℃）可保存3小時(shí)
洗滌液準(zhǔn)備
10ml的洗滌濃縮液+490ml的去離子水；不同的體積但保持同一稀釋比例；室溫下（22-28℃）可保存至標(biāo)簽上所示的有效期
實(shí)驗(yàn)步驟
建議做雙份檢測(cè)，包括標(biāo)準(zhǔn)品，質(zhì)控品和樣品，還有一個(gè)空白對(duì)照孔
| 試劑 | 標(biāo)準(zhǔn)品 | 樣品/質(zhì)控 | 空白對(duì)照 |
| 標(biāo)準(zhǔn)品S0-S5 質(zhì)控 | 50ul | | |
| 樣品/質(zhì)控 | | 50ul | |
| 試驗(yàn)緩沖液 | 50ul | 50ul | |
| 室溫下孵育2小時(shí)，棄去孵育液，每孔加300ul的洗滌液洗板6次 | |||
| 稀釋的酶聯(lián)物 | 100ul | 100ul | |
| 室溫下孵育1小時(shí)，棄去孵育液，每孔加300ul的洗滌液洗板6次 | |||
| TMB底物液 | 100ul | 100ul | 100ul |
| 黑暗處，室溫下孵育30min | |||
| 終止液 | 100ul | 100ul | 100ul |
| 輕輕搖動(dòng)微孔板，酶標(biāo)儀上讀數(shù)（450nm） | |||
結(jié)果計(jì)算
1. 計(jì)算每一標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的平均OD值
2. 以標(biāo)準(zhǔn)品吸收值和濃度繪制一zui合適的標(biāo)準(zhǔn)曲線（三次回歸或四參數(shù)）
3. 從標(biāo)準(zhǔn)曲線上可直接讀取樣品濃度
本譯文僅供參考，詳情請(qǐng)以原文為準(zhǔn)。
中國(guó)*總代理：深圳市科潤(rùn)達(dá)生物工程有限公司
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