牛血清α1的基本內(nèi)容

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牛血清α1－抗胰蛋白酶為一種糖蛋白，由肝細(xì)胞制造，分子量 5.6kD，體內(nèi)半衰 期 5.6d，在常規(guī)蛋白電泳上為α1－球蛋白的zui主要成分，其生物學(xué)作用在于抑 制胰蛋白酶、糜蛋白酶、透明質(zhì)酸酶、纖溶酶、彈力蛋白酶等，為一種廣譜蛋白 酶抑制劑。在本次實驗中發(fā)現(xiàn)：α1-AT 具有抑制胰蛋白酶活性的作用，且具有 明顯的電泳現(xiàn)象。 一． 鹽析法 1. 材料原理 實驗原理： 鹽析法是一種利用蛋白質(zhì)在高鹽溶液中溶解度不同而分 1.1 離的方法因此不同濃度的硫酸銨能將不同蛋白質(zhì)分離開來。 其原理 是：硫酸銨加入蛋白質(zhì)溶液中，使蛋白質(zhì)表面電荷被中和，水化膜 被破壞，使蛋白質(zhì)從溶液中析出。 1

.2 儀器與試劑：離心機(jī)、真空泵；飽和硫酸銨溶液、固體硫酸銨、牛血清 2. 實驗方法 1 ○.量取 15ml 牛血清，倒入一干凈燒杯中，緩慢加入硫酸銨溶液 15ml，加入 過程并不斷用玻璃棒攪拌，然后置于 4 攝氏度冰箱中放置 30min，并做好標(biāo) 記。 2 ○ .將上述所得溶液倒入離心管中，做好標(biāo)記，以 3000r/min 的速度離心 20min. 3 ○.離心后，將上清液倒入一干凈量筒中，得 24ml 上清液，然后倒入一干凈 燒杯中，并加入 4.2g 固體硫酸銨，邊加邊攪拌，做好標(biāo)記，在 4 攝氏度冰 箱中放置 30min。 4 ○.在布氏漏斗中方兩層濾紙，用燒杯中的液體將其潤濕，再將燒杯中剩余 的液體倒入漏斗中，于真空泵負(fù)壓抽濾至龜裂。 5 ○.刮下濾紙上的沉淀。 3. 實驗結(jié)果：此沉淀即為α1-AT 粗提蛋白組分。

4. 實驗討論：牛血清實驗過程中，為什么向蛋白質(zhì)溶液中加硫酸銨溶液，而不 能反過來添加？我覺得主要有兩點原因：○.硫酸銨溶液加入蛋白質(zhì)溶液 中，在溶液中作用的空間范圍大，更利于其破壞蛋白質(zhì)表面的水化膜， 2 使蛋白質(zhì)析出；○.硫酸銨溶液能再電離出氨根離子，使溶液呈酸性，飽 和硫酸銨溶液酸性較大，會使蛋白質(zhì)變性。ii）兩次析出沉淀過程中，為 什么*次使用硫酸銨溶液，第二次使用固體硫酸銨？由沉淀理論可知， 不同蛋白質(zhì)沉淀對硫酸銨濃度有