一、背景

胰蛋白胨膽鹽瓊脂是一種常用于大腸桿菌的膜過(guò)濾法選擇性培養(yǎng)（ISO標(biāo)準(zhǔn)）的培養(yǎng)基。胰蛋白胨膽鹽瓊脂的成分包括：蛋白胨，氯化鈉，膽鹽，瓊脂和pH緩沖液（pH值為9.0±0.1）。

二、胰蛋白胨膽鹽瓊脂操作步驟

1、按國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、SN標(biāo)準(zhǔn)、FDA標(biāo)準(zhǔn)或其它方法制備樣品液；

2、稱取36.5g的本品加熱溶解于1000ml蒸餾水中，然后分裝，在121℃的高壓滅菌器中滅菌15分鐘，之后便可備用。；

3、用3mm接種環(huán)取待測(cè)液體，劃線接種到胰蛋白胨膽鹽瓊脂培養(yǎng)基上，做2個(gè)平板；

4、37℃培養(yǎng)18-24h，大腸埃希氏菌菌顯無(wú)色菌落，產(chǎn)氣腸桿菌和陰溝腸桿菌顯黃色或無(wú)色。

三、胰蛋白胨膽鹽瓊脂注意事項(xiàng)

1、使用瓊脂糖需要加溫，請(qǐng)做好必要的防護(hù)措施，避免燙傷。

2、強(qiáng)烈建議您不要將瓊脂糖粉末直接倒入沸水中，這樣做會(huì)引起爆沸，濺出，致使?jié)舛认陆担€會(huì)造成結(jié)塊而融化困難。正確的做法是稱量一定量瓊脂糖至三角瓶中，根據(jù)配制濃度加入一定量的緩沖液(與電泳緩沖液一致)，加蓋硅膠塞（防止溫度差別造成表面結(jié)膜），微波或其他方式加熱至沸騰2分鐘左右，戴手套小心取出，搖勻，使之溶解。

3、必須保證瓊脂糖溶解，否則造成電泳條帶不清，保證溶解的前提下，盡量縮短加熱時(shí)間

4、室溫凝固后，即可使用。如不立即使用請(qǐng)用保鮮膜封好，4℃冷藏，可保存5天。

四、應(yīng)用

胰蛋白胨膽鹽瓊脂可以用于比色法快速檢測(cè)食品中大腸菌群的研究：

大腸菌群是食品檢驗(yàn)中的指標(biāo)之一。大腸菌群是指在37℃環(huán)境下能發(fā)酵乳糖，產(chǎn)酸產(chǎn)氣的一群需氧或兼性厭氧的革蘭氏陰性無(wú)芽胞桿菌。目前普遍采用的大腸菌群的檢測(cè)方法為多管發(fā)酵法。雖然傳統(tǒng)的多管發(fā)酵法檢測(cè)大腸菌群數(shù)具有準(zhǔn)確、可靠等優(yōu)點(diǎn)，但是在食品和水質(zhì)的監(jiān)測(cè)過(guò)程中，或在檢測(cè)樣品多和檢測(cè)時(shí)間緊的情況下，由于其檢測(cè)時(shí)間較長(zhǎng)，已越來(lái)越不能滿足實(shí)際監(jiān)測(cè)的需要了。

利用大腸菌群的培養(yǎng)共性，對(duì)基于顏色特征識(shí)別的大腸菌群的快速計(jì)數(shù)法進(jìn)行研究。

主要研究?jī)?nèi)容和成果如下：

1、對(duì)比色法檢測(cè)大腸菌群的顯色培養(yǎng)基配方進(jìn)行設(shè)計(jì)，確定了以胰蛋白胨膽鹽瓊脂為基礎(chǔ)，通過(guò)添加營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、酸堿指示劑、抑菌劑、表面活性劑等組分進(jìn)行優(yōu)化，篩選出顯色培養(yǎng)基的配方為：LST4.56g、溴甲酚紫0.03g、1.5%乳糖溶液0.1mL(培養(yǎng)40min后加入)、吐溫0.2%，100mL無(wú)菌水。同時(shí)設(shè)計(jì)半固體瓊脂培養(yǎng)基，通過(guò)對(duì)比不同瓊脂含量對(duì)汽包的截留情況，確定了瓊脂含量0.8%時(shí)觀察菌體產(chǎn)氣，確保判斷大腸菌群陽(yáng)性結(jié)果的準(zhǔn)確性。

2、對(duì)大腸菌群數(shù)目與培養(yǎng)液顏色之間的關(guān)系進(jìn)行研究，通過(guò)測(cè)量經(jīng)大腸菌群發(fā)酵產(chǎn)酸后培養(yǎng)基的顏色信息，采用線性或非線性擬合方法建立大腸菌群數(shù)目與培養(yǎng)基顏色信息之間的模型，最終確定BP神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)模型能夠得到理想的預(yù)測(cè)結(jié)果，并建立了大腸菌群數(shù)目與顏色對(duì)應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)比色板，適用于食品現(xiàn)場(chǎng)安全監(jiān)察檢測(cè)。

3、對(duì)固體類食品、生活飲用水大腸菌群快速檢測(cè)方法進(jìn)行研究，最終提供了的比色法定量檢測(cè)技術(shù)與檢測(cè)結(jié)果如下：

(1)檢測(cè)技術(shù)：在無(wú)菌條件下準(zhǔn)確稱取25g固體樣品，放入到裝有50mL無(wú)菌生理鹽水的錐形瓶中，置于搖床上160r/min振蕩2min，混勻樣品，用中速定量濾紙過(guò)濾樣品勻液，再用50mL無(wú)菌生理鹽水沖洗濾紙上殘留的物質(zhì)，收集濾液。無(wú)菌操作吸取6mL菌液通過(guò)濾膜進(jìn)行濃縮，使菌體在過(guò)濾器中分布均勻，然后將微量移液管貼近濾膜吸取20μL菌液。準(zhǔn)確稱取4.56g月桂基磺酸鹽胰蛋白胨培養(yǎng)基于100mL蒸餾水中，加熱溶解，加入0.03g溴甲酚紫指示劑和2%的吐溫試劑，振蕩搖勻后以棉塞封口，放入滅菌鍋中121℃溫度下滅菌20min。取出置于無(wú)菌工作臺(tái)上，待溶液冷卻至37℃時(shí)調(diào)節(jié)pH值6.99。用無(wú)菌微量移液器吸取1mL培養(yǎng)基放入1.5mL離心管中，加入濃縮后的待檢液20μL，37℃恒溫箱中培養(yǎng)120min。培養(yǎng)40min后取出置于工作臺(tái)上，加入1.5%的乳糖溶液100μL，蓋緊離心管的蓋子，置于恒溫箱中繼續(xù)培養(yǎng)。培養(yǎng)120min后，取出離心管，觀察發(fā)酵液的顏色，對(duì)照大腸菌群數(shù)-顏色標(biāo)準(zhǔn)比色版讀取大腸菌群數(shù)目的估計(jì)值。

(2)檢測(cè)結(jié)果：該法在120min內(nèi)即可得到檢測(cè)結(jié)果，且比色法快速檢測(cè)大腸菌群結(jié)果與國(guó)標(biāo)法檢測(cè)結(jié)果的比值為1.21，二者無(wú)明顯差別，但國(guó)標(biāo)法檢測(cè)需72h，該法能明顯縮短檢測(cè)時(shí)間，具有一定的靈敏性和真實(shí)性。

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