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蛋白分子量測定結(jié)果差異的溯源方法主要依賴于一系列標(biāo)準(zhǔn)化的程序和精確的技術(shù)手段，以確保測量結(jié)果的準(zhǔn)確性和可比性。以下是一些關(guān)鍵的溯源方法：
一、標(biāo)準(zhǔn)化測定方法
1.沉降法（超速離心法）：
-利用蛋白質(zhì)在高速離心時的沉降速度與蛋白質(zhì)顆粒大小成正比的關(guān)系，通過公式計算求出分子量。
-溯源：該方法的結(jié)果準(zhǔn)確性依賴于離心條件、樣品處理等因素的標(biāo)準(zhǔn)化。
2.凝膠過濾法（分子排阻層析法）：
-根據(jù)蛋白質(zhì)分子在凝膠微孔中的滲透能力不同，分子質(zhì)量大的蛋白質(zhì)先被洗脫下來，從而確定分子量。
-溯源：層析柱的材質(zhì)、凝膠的粒度、洗脫液的組成等均需標(biāo)準(zhǔn)化，以確保結(jié)果的可靠性。
3.SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳法：
-蛋白質(zhì)在SDS的作用下帶上相同的負(fù)電荷，在電場中的遷移速度取決于分子質(zhì)量的大小。
-溯源：電泳條件（如電壓、電流、電泳時間等）、凝膠濃度、樣品處理等均需嚴(yán)格控制，以保證結(jié)果的準(zhǔn)確性。
二、同位素稀釋質(zhì)譜法（IDMS）
-IDMS是物質(zhì)量的絕對分析方法之一。
-方法：在待測物中加入待測元素的濃縮同位素稀釋劑，通過測量混合物中同位素比值來計算待測元素的含量，進而推算出蛋白質(zhì)含量。
-溯源：IDMS方法的準(zhǔn)確性依賴于同位素稀釋劑的純度、質(zhì)譜儀的精度以及測量過程的標(biāo)準(zhǔn)化。該方法能夠減小測定中的基體效應(yīng)、等離子體源的變化和信號漂移等因素對測量準(zhǔn)確度的影響，測量結(jié)果可直接溯源到國際單位摩爾。
三、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的使用
-使用具有已知分子量的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進行校準(zhǔn)，可以確保測量結(jié)果的準(zhǔn)確性。
-例如，中國計量科學(xué)研究院研制的乙氨酰乙氨酰乙氨酸(GGG)、乙氨酰乙氨酰酪氨酰精氨酸(GGYR)、胰蛋白酶抑制劑、細(xì)胞色素C、牛血清白蛋白第五組分(BSA)等多肽和蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，這些標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的定值均采用先進的質(zhì)譜技術(shù)，并溯源到國際相對原子質(zhì)量的定義。
四、溯源性評估
-溯源性是指通過一條具有規(guī)定不確定度的不間斷的比較鏈，使測量結(jié)果或測量標(biāo)準(zhǔn)的值能夠與規(guī)定的參考標(biāo)準(zhǔn)聯(lián)系起來的特性。
-在蛋白分子量測定中，溯源性評估是確保測量結(jié)果有效性的關(guān)鍵步驟。這包括評估測量過程中所有可能影響結(jié)果的因素，并確保這些因素都在可控范圍內(nèi)。
五、減少差異的措施
-為了減少蛋白分子量測定結(jié)果的差異，還可以采取以下措施：
-優(yōu)化樣品處理流程，減少樣品損失和污染。
-使用高質(zhì)量的試劑和儀器，確保測量過程的穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性。
-加強實驗人員的培訓(xùn)，提高實驗操作的規(guī)范性和準(zhǔn)確性。
蛋白分子量測定結(jié)果差異的溯源方法主要包括標(biāo)準(zhǔn)化測定方法的使用、同位素稀釋質(zhì)譜法的應(yīng)用、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的使用、溯源性評估以及減少差異的措施等方面。這些方法的綜合運用可以確保分子量測定結(jié)果的準(zhǔn)確性和可比性。
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