ELISA的實驗基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性，酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標本（測定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應。
    大致了解了ELISA的實驗原理之后，下面介紹下ELISA實驗中緩沖溶液等試劑的配置方法：
（1）　ELISA實驗包被緩沖液
（2）　ELISA實驗洗滌緩沖液
（3）　ELISA實驗稀釋液
（4）ELISA實驗終止液
（5）ELISA底物緩沖液
（6）ELISA實驗TMB（四甲基聯(lián)苯胺）使用液
（7）　ELISA實驗ABTS使用液
（8）ELISA實驗封閉液（ELISC）。

試劑

（1）　ELISA實驗包被緩沖液（PH9.6 0.05M碳酸鹽緩沖液）:
NaHCO3    1.59克
NaHCO3　 2.93克
加蒸餾水至1000ml

（2）　ELISA實驗洗滌緩沖液（PH7.4 PBS）：

 KH₂PO₄ 　　　　   　0.2克
Na₂HPO₄·12H₂O　　2.9克
NaCl　　　　　   　　8.0克
KCl　　　　　　　 　0.2克
Tween-20　0.05%　  0.5ml
加蒸餾水至1000ml

（3）　ELISA實驗稀釋液：

牛血清白蛋白（BSA） 0.1克
加洗滌緩沖液至100ml
或以羊血清、兔血清等血清與洗滌液配成5～10%使用。

（4）　ELISA實驗終止液（2M　H₂SO₄）：

蒸餾水178.3ml，逐滴加入濃硫酸（98%）21.7ml。

（5）　ELISA底物緩沖液（PH5.0磷酸棗檸檬酸）:

0.2M Na₂HPO₄（28.4克/L）              25.7ml
0.1M 檸檬酸（19.2克/L）　　　　　 24.3ml
加蒸餾水50ml。

（6）　ELISA實驗TMB（四甲基聯(lián)苯胺）使用液:

TMB（10mg/5ml無水乙醇）   0.5ml
底物緩沖液（PH5.5）　　　   10ml
0.75%H₂O₂                           32μl

（7）　ELISA實驗ABTS使用液:

ABTS　　　　　　　　0.5mg
底物緩沖液（PH5.5）　    1ml
3%H₂O₂                          2μl

（8）ELISA實驗封閉液（ELISC）：

牛血清白蛋白（BSA） 5克
加洗滌緩沖液至100ml。

需要特別注意的是封閉液中含有脫脂奶粉，不適合長期保存。

ELISA實驗過程中為了保證實驗結(jié)果的準確性，操作中加入的緩沖液和各組分一定要，將洗滌液加入酶標板中的時候防止加入的試劑混入另外一個酶標孔，嚴防交叉污染。