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人抗呼吸道合胞病毒抗體ELISA試劑盒顯色重要性及樣品處理
人抗呼吸道合胞病毒抗體ELISA試劑盒顯色的重要性
顯色是ELISA中的zui后一步溫育反應(yīng)，此時(shí)酶催化無(wú)色的底物有色的產(chǎn)物。反應(yīng)的溫度和時(shí)間仍是影響顯色的因素。在一定時(shí)間內(nèi)，陰性孔可保持無(wú)色，而陽(yáng)性孔則隨時(shí)間的延長(zhǎng)而呈色加強(qiáng)。適當(dāng)提高溫度有助于加速顯色進(jìn)行。在定量測(cè)定中，加入底物后的反應(yīng)溫度和時(shí)間應(yīng)按規(guī)定力求準(zhǔn)確。定性測(cè)定的顯色可在室溫進(jìn)行，時(shí)間一般不需要嚴(yán)格控制，有時(shí)可根據(jù)陽(yáng)性對(duì)照孔和陰性對(duì)照孔的顯色情況適當(dāng)縮短或延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間，及時(shí)判斷。
OPD底物顯色一般在室外溫或37℃反應(yīng)20-30分鐘后即不再加深，再延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間，可使本底值增高。OPD底物液受光照會(huì)自行變色，顯色反應(yīng)應(yīng)避光進(jìn)行，顯色反應(yīng)結(jié)束時(shí)加入終止液終止反應(yīng)。OPD產(chǎn)物用酸終止后，顯色由橙黃色轉(zhuǎn)向棕黃色。
TMB受光照的影響不大，可在室溫中置于操作臺(tái)上，邊反應(yīng)觀察結(jié)果。但為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定性，宜在規(guī)定的適當(dāng)時(shí)間閱讀結(jié)果。TMB經(jīng)HRP作用后，約40分鐘顯色達(dá)，隨即逐漸減弱，至2小時(shí)后即可*消退至無(wú)色。TMB的終止液有多種，疊氮鈉和SDS等酶抑制劑均可使反應(yīng)終止。這類(lèi)終止劑尚能使藍(lán)色維持較長(zhǎng)時(shí)間（12-24小時(shí)）不褪，是目視判斷的良好終止劑。此外，各類(lèi)酸性終止液則會(huì)使藍(lán)色轉(zhuǎn)變成黃色，此時(shí)可用特定的波長(zhǎng)（450nm）測(cè)讀吸光值。
人抗呼吸道合胞病毒抗體ELISA試劑盒檢測(cè)中樣品的處理
1．細(xì)胞培養(yǎng)物上清：
細(xì)胞培養(yǎng)物于室溫1000g，離心10分鐘后收集上清，并將標(biāo)本保存于-20℃，且應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2．血清：
標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜后于1000g，4℃離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)?biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3．血漿：
可用EDTA或肝素作為抗凝劑標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2-8℃,1000g離心15分鐘，或?qū)?biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
4．尿液：
無(wú)菌收集取初尿，離心除去沉淀物，即可用于檢測(cè)，要長(zhǎng)期保存尿樣，可以加入0.05％的NaN3在4-8℃保存，或加入尿樣冰凍保護(hù)液放入-20℃冰箱長(zhǎng)期保存。
5．組織勻漿：
將組織標(biāo)本先用PBS洗滌，除去多余血液，勻漿化后放在PBS于-20℃放置過(guò)夜，再經(jīng)過(guò)二次反復(fù)凍融破膜，5000g，4℃離心5分鐘，取上清即可檢測(cè)。
注：取樣和樣品處理過(guò)程中，防止有毒物質(zhì)對(duì)操作人員的危害，要采取相應(yīng)的保護(hù)措施。
1．細(xì)胞培養(yǎng)物上清：
細(xì)胞培養(yǎng)物于室溫1000g，離心10分鐘后收集上清，并將標(biāo)本保存于-20℃，且應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2．血清：
標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜后于1000g，4℃離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)?biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3．血漿：
可用EDTA或肝素作為抗凝劑標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2-8℃,1000g離心15分鐘，或?qū)?biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
4．尿液：
無(wú)菌收集取初尿，離心除去沉淀物，即可用于檢測(cè)，要長(zhǎng)期保存尿樣，可以加入0.05％的NaN3在4-8℃保存，或加入尿樣冰凍保護(hù)液放入-20℃冰箱長(zhǎng)期保存。
5．組織勻漿：
將組織標(biāo)本先用PBS洗滌，除去多余血液，勻漿化后放在PBS于-20℃放置過(guò)夜，再經(jīng)過(guò)二次反復(fù)凍融破膜，5000g，4℃離心5分鐘，取上清即可檢測(cè)。
注：取樣和樣品處理過(guò)程中，防止有毒物質(zhì)對(duì)操作人員的危害，要采取相應(yīng)的保護(hù)措施。
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