国产精品视频一区二区三区四,亚洲av美洲av综合av,99国内精品久久久久久久,欧美电影一区二区三区电影

產(chǎn)品推薦:氣相|液相|光譜|質(zhì)譜|電化學(xué)|元素分析|水分測定儀|樣品前處理|試驗機|培養(yǎng)箱


化工儀器網(wǎng)>技術(shù)中心>其他文章>正文

歡迎聯(lián)系我

有什么可以幫您? 在線咨詢

原代組織細(xì)胞的解離

來源:上海索寶生物科技有限公司   2010年01月18日 10:45  

原代組織細(xì)胞的解離
從原代組織上獲取單個細(xì)胞懸液的常用方法是利用酶的解聚作
用。盡量縮短用酶處理細(xì)胞的時間,以獲得高的存活率。按下
面的方法解聚整個組織,以獲得大量細(xì)胞。
胰酶
1.先去除無關(guān)組織,然后用滅菌的解剖刀或剪刀將組織切成  
 3-4mm大小碎塊。通過在不含鈣鎂的平衡鹽溶液進行重懸來清 
洗組織碎塊。待組織碎塊沉降后去掉上清液。重復(fù)清洗2-3次。
2.將裝有組織碎塊的容器置于冰上,去掉所有上清液。在不含鈣
鎂的平衡鹽溶液中加入0.25%胰酶(每100mg組織大約需要
1ml 胰酶)。
3.在4℃ 下孵育6-18小時,使低活性的胰酶盡量滲入組織。
4.緩慢倒掉胰酶。在37℃ 下將殘余的胰酶與組織碎塊共同孵育 
 20-30分鐘。
5.向組織碎塊加入溫?zé)岬?培養(yǎng)基,并輕輕地吹吸以分散組 
 織。如果使用無血清培養(yǎng)基。還應(yīng)加入大豆胰酶抑制劑。
6. 用滅菌的不銹鋼網(wǎng)(100-200μm)過濾細(xì)胞懸浮液,直至所有
組織*散開。計算細(xì)胞個數(shù),然后接種細(xì)胞進行培養(yǎng)。
膠原酶
1.用滅菌的解剖刀或剪刀將組織切成3-4mm大小碎塊。用Hanks平衡
鹽溶液(HBSS)將組織碎塊清洗數(shù)次。
2.加入膠原酶(50-200單位/ml膠原酶HBSS)。
3.在37℃ 下孵育4-18小時。加入3mM CaCl2 可以提高解離效率。
4.用滅菌的不銹鋼網(wǎng)或尼龍網(wǎng)過濾細(xì)胞懸浮液,將離散的細(xì)胞和
組織片段與大塊的組織碎片分離。如需進一步解離,可向組織片
段中加入新鮮的膠原酶。
5.通過離心HBSS清洗細(xì)胞懸浮液數(shù)次。
6.用培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。計算細(xì)胞個數(shù),然后接種細(xì)胞進行培養(yǎng)。
分散酶
1.用滅菌的解剖刀或剪刀將組織切成3-4mm大小碎塊。用不含鈣
鎂離子的平衡鹽溶液清洗組織碎塊數(shù)次。
2.加入分散酶(0.6-2.4單位/ml分散酶不含鈣鎂的平衡鹽溶液)。
3.在37℃下孵育20分鐘至數(shù)小時。
4.用滅菌的不銹鋼網(wǎng)或尼友網(wǎng)過濾細(xì)胞懸浮液,將離散的細(xì)胞和
 組織片段與大塊的組織碎片分離。如需進一步解離,可向組織片
 段中加入新鮮分散酶。
5.通過離心平衡鹽溶液清洗細(xì)胞懸浮液數(shù)次。
6.用培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。計算細(xì)胞個數(shù),然后接種細(xì)胞進行培養(yǎng)。

免責(zé)聲明

  • 凡本網(wǎng)注明“來源:化工儀器網(wǎng)”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品,未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的,應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用,并注明“來源:化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者,本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
  • 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源(非化工儀器網(wǎng))的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點和對其真實性負(fù)責(zé),不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時,必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源,并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
  • 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題,請在作品發(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
企業(yè)未開通此功能
詳詢客服 : 0571-87858618
大石桥市| 和政县| 五大连池市| 手游| 县级市| 海伦市| 崇州市| 东兰县| 大足县| 岳普湖县| 南郑县| 南澳县| 浮梁县| 体育| 双牌县| 岫岩| 黄石市| 清水河县| 盈江县| 抚顺县| 壤塘县| 山西省| 莲花县| 青海省| 曲阜市| 大厂| 曲沃县| 长海县| 抚州市| 珠海市| 富宁县| 天峨县| 县级市| 景谷| 博乐市| 桂阳县| 北安市| 四子王旗| 伊宁市| 洛扎县| 阳城县|