ELISA的基本原理有三條:
(1)抗原或抗體能以物理性地吸附于固相載體表面,可能是蛋白和聚苯乙烯表面間的疏水性部分相互吸附,并保持其免疫學(xué)活性;
(2)抗原或抗體可通過共價(jià)鍵與酶連接形成酶結(jié)合物,而此種酶結(jié)合物仍能保持其免疫學(xué)和酶學(xué)活性;
(3)酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后,可根據(jù)加入底物的顏色反應(yīng)來判定是否有免疫反應(yīng)的存在,而且顏色反應(yīng)的深淺是與標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比例的,因此,可以按底物顯色的程度顯示試驗(yàn)結(jié)果。
由于ELISA法一方面是建立在抗原與抗體免疫學(xué)反應(yīng)的基礎(chǔ)上,因而,具有特異性。而另一方面又由于酶標(biāo)記抗原或抗體是酶分子與抗原或抗體分子的結(jié)合物,它可以催化底物分子發(fā)生反應(yīng),產(chǎn)生放大作用,正因?yàn)榇朔N放大作用而使本法具有很高的敏感性。因此,ELISA法是一種既敏感又特異的方法。常用的ELISA有以下兩個(gè)方面。
ELISA應(yīng)用的范圍很廣,而且正在不斷地?cái)U(kuò)大,原則上ELISA可用于檢測(cè)一切抗原、抗體及半抗原,可以直接定量測(cè)定體液中的可溶性抗原。酶免疫試驗(yàn)(EIA)結(jié)合光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡可進(jìn)行抗原定位與結(jié)構(gòu)的研究,用酶標(biāo)記抗原或抗體結(jié)合免疫擴(kuò)散及免疫電泳可提高試驗(yàn)的敏感性。
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