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人誘導(dǎo)性一氧化氮合成酶(iNOS)免疫組化試劑盒說(shuō)明書(shū)

來(lái)源:上海繼錦化學(xué)科技有限公司   2014年03月18日 22:58  

保存方法:2-8℃保存。

有效期:一年。生產(chǎn)日期:見(jiàn)封口。

 

工作原理:

辣根過(guò)氧化物酶(HRP)的分子量(40000),它不會(huì)遮蓋抗原的結(jié)合部位,具有較高活性及特異性,可溶性佳,生成的產(chǎn)物不擴(kuò)散,可作用于多種底物,產(chǎn)生不同顏色且HRP穿透力強(qiáng),易進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。DAB H2O2存在的情況下,可以作為HRP的電子供體,產(chǎn)生褐色的不溶顆粒,可作為顯色的試劑。

 

試劑盒內(nèi)容:

 

名稱

規(guī)格

1

5%BSA

15mL

2

二抗

0.5 mL(未稀釋的)

3

SABC

15 mL

4

H2O 2

10 mL

5

DAB顯色液

10 mL

6

枸櫞酸鹽緩沖液

 

 

操作步驟

1、防脫片劑處理后的切片在二甲苯中脫蠟,然后系列酒精梯度入水,每次3~5 min。

2、0.01mol/L pH7.4 PBS洗滌3次,每次5 min 。

3、3%H 2 O 2 室溫孵育 5-10 分鐘,以消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶的活性。PBS洗滌2-3次,每次5 min;

4、0.01mol/L pH6.0檸檬酸緩沖液(氣管在80~88℃,其他組織92℃)復(fù)性20min,在溶液中冷卻至室溫。0.01 mol/L  pH7.4的PBS洗滌3次,每次5 min 。

5、加入封閉液,于濕盒中感作30min,甩去多余的封閉液。

6、滴加血清到切片上37℃孵育1小時(shí)左右或者4℃到第二天清晨, 0.01 mol/LpH7.4的PBS洗滌3次,每次5 min 。

7、滴加FITC或者HRP酶標(biāo)二抗,覆蓋切片,置濕盒中37℃閉光感作30min左右,取出后洗滌(方法同上)。

8、DAB顯色。

9、蘇木素輕度復(fù)染。脫水,透明,封片。顯微鏡觀察。

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