流式細胞儀血小板分析

流式細胞儀血小板分析應用范圍

通過分析信號傳遞、細胞骨架結構、顆粒釋放、糖蛋白構形、膜磷脂、與抗凝因子的結合和微粒形成，分析血小板活化，血小板對刺激物的反應性
通過分析受激后表面結合蛋白觸發(fā)凝血鏈式反應和表面糖蛋白缺陷檢測，分析血小板止血功能的獲得性和遺傳性缺陷
結合血小板大小，檢測血小板RNA含量，分析血小板成熟度，計數(shù)網(wǎng)織血小板
發(fā)現(xiàn)血小板抗體，做定性和定量分析
血小板分析的臨床應用

血小板活化導致的血栓前綜合癥：如糖尿病、非免疫性血小板活化
血管缺陷導致的血小板活化：如動脈粥樣硬化、急性心肌梗塞、血管成型術、心臟移植
血小板糖蛋白的基因缺失，或血小板存儲缺陷導致的出血性疾病
骨髓異常增生或骨髓發(fā)育不良、腎衰末期、血小板輸血或藥物副作用引起的血小板止血功能障礙
血小板相關的抗凝治療的診斷監(jiān)測
由特發(fā)性血小板減少或藥物引發(fā)的血小板減少、惡性腫瘤骨髓轉移導致的血小板生成減少
免疫性血小板減少、先兆子癇或膿毒癥造成的血小板生成增加；生長因子治療的骨髓反應狀況監(jiān)測
自身免疫和同種免疫造成的血小板減少癥
流式細胞儀檢測全血中血小板功能狀態(tài)

全血中血小板更接近生理狀態(tài)
操作簡便，減少由于操作造成的血小板狀態(tài)改變（如血小板活化試驗）
同時檢測血小板的多個標志物，結合FSC和SSC，評估多個參數(shù)，進行定量分析
多采用血小板特異抗體CD41或CD61畫門，找出血小板，避免雜質碎片的干擾
檢測血小板亞群靈敏度高
用血量少
無放射性污染
全血樣本的制備

1．抽取抗凝全血：檢測血小板功能時，應使用標準化的抽血規(guī)程；做血小板活化試驗時，應盡量減少人為造成的血小板活化

2．Falcon管中加取全血和適量直標熒光抗體，充分混勻，室溫避光處反應，通常放置15分鐘

3．1%多聚甲醛固定樣本

4．上機檢測

質控標本

陰性對照（Isotype Control）：非特異熒光的強弱取決于抗體濃度、單克隆熒光抗體特異性和純度，應與試驗管抗體相對應。在多色分析時，同型對照應與其它抗體同時使用，以避免補償造成的誤差
血小板體外活化試驗：使用正常人活化標本作為陽性質控；使用正常人未活化標本作為陰性質控
血小板自身抗體檢測：使用含有已知血小板抗體的血清與血小板孵育，作為陽性質控；使用不含血小板抗體的血清與血小板孵育，作為陰性質控
血小板表面抗原缺失：如巨血小板癥血小板表面CD42a/CD42b缺失，血小板無力癥血小板表面gpIIb/IIIa，即CD41/CD61缺失或異常。使用正常人標本做陽性對照，抗體的同型對照做陰性對照