国产精品视频一区二区三区四,亚洲av美洲av综合av,99国内精品久久久久久久,欧美电影一区二区三区电影

產(chǎn)品推薦:氣相|液相|光譜|質(zhì)譜|電化學(xué)|元素分析|水分測定儀|樣品前處理|試驗機|培養(yǎng)箱


化工儀器網(wǎng)>技術(shù)中心>其他文章>正文

歡迎聯(lián)系我

有什么可以幫您? 在線咨詢

地高辛配基隨機標記DNA探針

來源:上海嶸崴達實業(yè)有限公司   2010年07月21日 11:39  

                                                        地高辛配基隨機標記DNA探針

1.標記DNA探針 每次標準的反應(yīng)可標記10ng至3?線性的DNA,也可標記更大量的DNA,但所有的成分和體積要相應(yīng)增加。

(1)DNA探針熱變性,煮沸10min,迅速冷卻于冰/乙醇中5min以上,待用。

(2)取Eppendorf管(1.5ml)置于冰上,加下列及試劑:

新鮮變性的DNA 1-3?

六聚核苷酸混合物 2?(管5)

dNTP標記用混合底物 2?(管6)

加無菌重蒸水至 19?

DNA聚合酶Ⅰ大片段(Klenow) 1?(管7)

(3)在37℃保溫至少60min,可到20h。

(4)煮沸5min,終止反應(yīng)。

(5)15000rpm離心30s,置于冰上待用。

2.預(yù)雜交 按100cm2膜用20~40ml預(yù)雜交溶液,預(yù)雜交時使溶液處于流動狀態(tài)。

預(yù)雜交液組成:5?SC

0.5%(W/V)封阻試劑(管11)

0.1%(W/V)N-十二烷酰肌氨酸鈉

0.02%(W/V)SDS

膜放入塑料袋,灌入預(yù)雜交液,排除氣體后密封,在65℃預(yù)雜交過夜。

3.雜交 按100cm2膜用2.5ml雜交液,雜交時偶爾搖動雜交袋,使里面的溶液重新分配。

雜交液組成: 50%甲酰胺(V/V)

5%(W/V)封阻試劑

5?SC

0.1(W/V)N-十二烷酰肌氨酸鈉

0.02%(W/V)SDS

新變性標記DNA(150ng/ml)

雜交液取代預(yù)雜交液,替換間膜不能干,成功地替換應(yīng)是膜與塑料袋間形成一層雜交液膜。于42℃雜交過夜(16~20h)。

4.洗膜 按100cm2膜用250ml洗膜液計算。

(1)在室溫下用2?SC/0.1%(W/V)SDS溶液漂洗,5min,2次。

(2)在65℃條件下用0.1?SC/0.1%SDS溶液漂洗,10min,2次。

(3)在室溫下用2?SC溶液漂洗1次。

5.免疫測定

(1)配制溶液

緩沖液1:Tris-HCl(100mmol/L);NaCl(150mmol/L)pH7.5(20℃)

緩沖液2:0.5%(W/V)封阻試劑(管11),配制于緩沖液1中(封阻試劑不會快速溶解,因此應(yīng)預(yù)早1h前配制此溶液,將試劑溶于50~70℃,此溶液保持混濁)。

緩沖液3:Tris-HCI(100mmol/L);NaCI(100mmol/L);MgCI2(500mmol/L)pH9.5(20℃)。

緩沖液4:Tris-HCl(10mmol/l);EDTA(1mmol/L);pH8.0(20℃)

顯色溶液:新鮮配制,在10ml緩沖液3中,加45?NBT溶液(管9)和35?X-磷酸鹽緩沖液(管10)。

2. 顯色過程

A.膜在緩沖液1中短暫洗滌(1min)。

B.在100ml緩沖2中保溫30min。

C.再用緩沖液1短暫洗滌。

免責(zé)聲明

  • 凡本網(wǎng)注明“來源:化工儀器網(wǎng)”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品,未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的,應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用,并注明“來源:化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者,本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
  • 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源(非化工儀器網(wǎng))的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點和對其真實性負責(zé),不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時,必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源,并自負版權(quán)等法律責(zé)任。
  • 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題,請在作品發(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
企業(yè)未開通此功能
詳詢客服 : 0571-87858618
筠连县| 元谋县| 太白县| 泰和县| 永新县| 新余市| 南开区| 沙坪坝区| 大渡口区| 永济市| 廉江市| 湟源县| 利津县| 盈江县| 二连浩特市| 鸡西市| 吉安县| 上思县| 措美县| 萨迦县| 九寨沟县| 临汾市| 页游| 河曲县| 桐柏县| 邵东县| 肥西县| 城步| 梅州市| 博爱县| 玉山县| 海门市| 巴林右旗| 原平市| 宜城市| 明星| 东阳市| 新竹市| 孝昌县| 谢通门县| 宁远县|