RNA轉(zhuǎn)錄物能通過瓊脂糖變性膠電泳檢測其探針完整性。標記效果可通過抗DIG堿性磷酸酶直接檢測，有兩種方法可以選擇。
 
方法一、用標準DIG測試條比較鑒定
 
使用測試條鑒定包括兩個步驟：首先，將轉(zhuǎn)錄標記的RNA稀釋成一系列的濃度，并點樣到空白測試條上（對照測試條已用一系列濃度點樣）；其次，將點樣的備測試條與對照測試條一起進行免疫、顯色反應，然后根據(jù)對照測試條計算備測樣品的濃度。
 
1.  將轉(zhuǎn)錄反應物稀釋成濃度約為1 μg/ml，即取前述轉(zhuǎn)錄標記物1 μl 加入99 μl RNA稀釋緩沖液，如果轉(zhuǎn)錄標記反應正常其濃度應大約為1 μg/ml。
2.  取5支Eppendorf管，按A、B、C、D、E順序編號，將1 μg/ml 濃度的RNA標記物按下列方式稀釋成一系列濃度：
 
編號    RNA標記物稀釋方法    RNA終濃度
A    1 μg/mlRNA 10 μl＋RNA稀釋緩沖液23 μl    300 pg/μl
B    1 μg/mlRNA 5 μl + RNA稀釋緩沖液45 μl    100 pg/μl
C    A 5 μl + RNA稀釋緩沖液45 μl    30 pg/μl
D    B 5 μl + RNA稀釋緩沖液45 μl    10 pg/μl
E    C5 μl + RNA稀釋緩沖液45 μl    3 pg/μl
 
3.  將空白測試條置于一聚酯膜上，以每一濃度1 μl 的量在測試條上點樣，在聚酯膜上做好點樣濃度標記，切勿直接在測試條上做任何記號，切勿用手接觸測試條。
4.  室溫干燥約2 min，同時制備測試溶液。
5.  在2ml封閉液中加入1 μl Anti-DIG-AP。
6.  顯色底物溶液：在2 m l檢測緩沖液中加入9 μl NBT溶液和7 μl BCIP溶液。
7.  準備5個樣品池（2.5 ~ 5 ml 容量），1~6順序編號，依次加入2 ml 以下溶液。
（1）封閉液；
（2）抗體溶液（第5項）；
（3）③④⑤洗膜緩沖液；
（4）檢測緩沖液；
（5）顯色底物溶液（第6項）。
8．將樣品測試條和對照測試條按下列順序在上述準備的溶液中浸漬處理，兩步驟直接讓多余的溶液滴在吸水紙上。
（1）封閉， 2 min。
（2）抗體結(jié)合， 3 min。
（3）封閉，1 min。
（4）洗膜，1 min。
（5）平衡，1 min。
（6）顯色反應（黑暗），5~30 min。
9．顯色反應30 min，即停止反應（延長顯色反應時間，會增加背景而影響結(jié)果比較），用水漂洗測試條，將其置于3 MM Whatman濾紙上空氣干燥，然后在光下檢測。
 
結(jié)果評估
顯色反應進行5~10 min時，對照測試條中300 pg 濃度的樣點即會出現(xiàn)顏色，30 min時3 pg 的樣點也可見顏色，隨即停止顏色反應。漂洗后比較對照與待測樣品顏色，根據(jù)對照濃度與待測樣品的稀釋濃度計算標記物的數(shù)量。如果標記物濃度低于10~30 pg 則不適宜采用這一快速檢測方法。
 
方法二、用DIG標記的RNA對照比較檢測
 
1.  將DIG標記的對照RNA先稀釋成20 ng/μl（5 μl 對照RNA加入20 μl DEPC-H2O），取5支Eppendorf管以A、B、C、D、E、F順序編號，將對照按下列比例稀釋成一系列濃度：
 
編號    對照RNA稀釋方法     終濃度
A    20 ng/μl RNA 2 μl＋RNA稀釋緩沖液38 μl    1 ng/μl
B    A 5 μl＋RNA稀釋緩沖液45 μl    100 pg/μl
C    B 5 μl＋RNA稀釋緩沖液45 μl     10 pg/μl
D    C 5 μl＋RNA稀釋緩沖液45 μl     1 pg/μl
E    D 5 μl＋RNA稀釋緩沖液45 μl     0.1 pg/μl
F    E 5 μl＋RNA稀釋緩沖液45 μl    0.01 pg/μl
2.  按照同樣的方法將待測的DIG－RNA也稀釋成一系列濃度，編號用1、2、3、4、5、6以便于與對照區(qū)別。
3.  取一片尼龍膜，按照前述方法一的方法點樣，*排點對照，第二排點待測樣，不必從濃度A開始，只需點C~F濃度進行檢測。
4.  用UV交聯(lián)方法或尼龍膜也可采用120℃烘膜30 min 的方法使RNA固定于膜上，再用洗膜緩沖液洗膜幾秒種。
5.  將膜置于封閉液中，室溫下封閉30 min。
6.  準備抗體溶液：用封閉液按1∶5000的比例稀釋Anti-DIG-AP。
7.  將膜置于抗體溶液中，室溫下保持30 min，注意抗體溶液必須沒過膜。
8.  室溫下用洗膜緩沖液洗膜2次，每次15 min。
9.  再將膜置于檢測緩沖液中2 min。
10.  在10 ml 檢測緩沖液中加入45 μl NBT和35 μl BCIP配制成顯色底物溶液（現(xiàn)配現(xiàn)用）。
11.  除去檢測緩沖液，加入顯色底物溶液，在黑暗下顯色大約16小時（一般幾分鐘即可見開始顯色），注意在顯色過程中，切勿振蕩樣品盤。
12.  當顏色沉淀充分后，停止顯色反應，用TE緩沖液或無菌水洗膜5 min。
13.  比較對照和樣品的顏色測算濃度。