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研域(上海)化學(xué)試劑有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第18年
血清對(duì)細(xì)胞的作用2023/05/23
血清對(duì)于在傳統(tǒng)培養(yǎng)基配方中生長(zhǎng)和增殖的大多數(shù)細(xì)胞系來(lái)說(shuō)是需要的,因?yàn)榇蠖鄶?shù)單獨(dú)的培養(yǎng)基并不能提供細(xì)胞生長(zhǎng)所需要的全部營(yíng)養(yǎng)。血清是非常復(fù)雜的混合物,成分多樣,對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)具有促進(jìn)作用。1.提供基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),如氨基酸、維生素、無(wú)機(jī)物、脂類(lèi)物質(zhì)、核酸衍生物等,是細(xì)胞生長(zhǎng)必須的物質(zhì)。2.提供激素和各種生長(zhǎng)因子,如胰島素、腎上腺皮質(zhì)激素(氫化可的松、地塞米松)、類(lèi)固醇激素(雌二醇、睪酮、孕酮)、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、表皮生長(zhǎng)因子、血小板生長(zhǎng)因子等。3.提供結(jié)合蛋白,可攜帶重要的低分子量物質(zhì),如白蛋白攜帶維生素
細(xì)胞培養(yǎng)的小技巧2023/05/16
細(xì)胞培養(yǎng)的小技巧1.切記,細(xì)胞培養(yǎng)基的儲(chǔ)存條件是2-8攝氏度。如果細(xì)胞培養(yǎng)基不小心被凍,您應(yīng)該融化培養(yǎng)基并觀察是否有沉淀產(chǎn)生。如果沒(méi)有沉淀產(chǎn)生,培養(yǎng)基可以正常使用,如果出現(xiàn)沉淀,只能丟棄這些培養(yǎng)基。2.貯存在冰箱中的瓶口已開(kāi)的培養(yǎng)基,可能在放置幾天后顏色變紫。這主要是由于在暴露到周?chē)腃O2水平時(shí),碳酸氫納導(dǎo)致了pH值的上升。您可以在使用前松開(kāi)瓶口,在CO2培養(yǎng)箱孵育培養(yǎng)基10-15分鐘,來(lái)校正溶液的pH值(確定松開(kāi)瓶口以保證氣體交換)。3.當(dāng)在無(wú)血清培養(yǎng)基中添加抗生素時(shí),降低至少在有血清培養(yǎng)基
試劑盒的準(zhǔn)備、樣品收集、處理及保存方法2023/05/09
一.樣品收集及保存方法1、血清-----操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激,使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。2、血漿----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測(cè),1000×g離心30分鐘去除顆粒。3、細(xì)胞上清液--1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。4、組織勻漿---將組織加入適量生理鹽水搗碎,1000×g離心10分鐘,取上清液。5、保存----如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-80℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血
血清的主要成分2023/04/27
血清,指血液凝固后,在血漿中除去纖維蛋白原及某些凝血因子后分離出的淡透明液體或指纖維蛋白原已被除去的血漿。其主要作用是提供基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、提供激素和各種生長(zhǎng)因子、提供結(jié)合蛋白、提供促接觸和生長(zhǎng)因子使細(xì)胞貼壁免受機(jī)械損傷、對(duì)培養(yǎng)中的細(xì)胞起到某些保護(hù)作用。血清是由血漿去除纖維蛋白原而形成的一種很復(fù)雜的混合物,其組成成份雖大部分已知,但還有一部分尚不清楚,且血清組成及含量常隨供血?jiǎng)游锏男詣e、年齡、生理?xiàng)l件和營(yíng)養(yǎng)條件不同而異。血清是血漿中不含纖維蛋白原的膠狀液體,具有維持血液的正常粘度、酸堿度、滲透壓等作
決定ELISA實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵-洗滌2023/04/20
很多人做ELISA實(shí)驗(yàn),覺(jué)得真簡(jiǎn)單,無(wú)非就是加樣,保溫,洗滌等操作步驟。可是實(shí)驗(yàn)結(jié)果經(jīng)常不盡人意。今天小編就給大家總結(jié)一下ELISA實(shí)驗(yàn)洗滌要點(diǎn),掌握這些,實(shí)驗(yàn)Soeasy!洗滌在ELISA過(guò)程中不是反應(yīng)聚,但卻是決定實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵。洗滌的目的是洗去反應(yīng)液中沒(méi)有與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì)以及在反應(yīng)過(guò)程中非特異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。聚苯乙烯待塑料對(duì)蛋白質(zhì)的吸附作用是普遍性的。因此在ELISA測(cè)定的反應(yīng)過(guò)程中應(yīng)盡量避免非特異性吸附,而在洗滌時(shí)又應(yīng)把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來(lái)。在標(biāo)本和結(jié)
elisa試劑盒的實(shí)驗(yàn)操作的注意事項(xiàng)2023/04/13
實(shí)驗(yàn)操作控制:1、嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。操作前將試劑在室溫下平衡30~60min。2、加樣后及時(shí)放人孵箱。標(biāo)本較多時(shí),要分批操作。按說(shuō)明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間,防止孵育時(shí)間人為延長(zhǎng),導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周?chē)?,難以清洗。3、封板溫育時(shí),各孔一定要封嚴(yán),防止陽(yáng)性標(biāo)本的液體蒸發(fā),產(chǎn)生周邊現(xiàn)象從而導(dǎo)致“花板”的出現(xiàn)。4、用洗板機(jī)洗板時(shí),保證洗液注滿(mǎn)各孔,洗板針暢通,洗完板后*在吸水紙上輕輕拍干:還要防止針口有纖維蛋白或異物,這些異物在洗板的過(guò)程中易產(chǎn)生拖帶現(xiàn)象而導(dǎo)致“花板”的出現(xiàn)。5、合理安
ELISA檢測(cè)方法的三大特點(diǎn)2023/04/06
ELISA檢測(cè)是一種免疫檢測(cè)方法,通常用于測(cè)量生物樣品中的抗體或抗原,包括蛋白質(zhì)或糖蛋白。像其他免疫檢測(cè)法一樣,它們依靠抗體與目標(biāo)的結(jié)合來(lái)促進(jìn)檢測(cè)。通常情況下,ELISA檢測(cè)是在96孔板中進(jìn)行的,這種形式使其適合于一次篩選許多樣品。血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、細(xì)胞裂解液、唾液、組織裂解液和尿液都是用于這些檢測(cè)的常見(jiàn)樣品類(lèi)型,但理論上大多數(shù)液體樣品類(lèi)型都可以使用。上海研域主要供應(yīng)各種elisa試劑盒,對(duì)于有關(guān)ELISA實(shí)驗(yàn)試劑的溫度與條件還需要按照說(shuō)明書(shū)來(lái)進(jìn)行。下面是研域生物技術(shù)為大家介紹ELIS
酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)操作步驟2023/03/30
ELISA檢測(cè)系統(tǒng)可謂是免疫學(xué)反應(yīng)應(yīng)用到科研生產(chǎn)中為廣泛為靈敏的技術(shù)手段。下面小編簡(jiǎn)單介紹一下酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)操作步驟。詳細(xì)步驟如下:1.用靶蛋白(稀釋于50mM碳酸鹽緩沖液PH9.0)包被反應(yīng)板。濃度應(yīng)該做滴度來(lái)獲得。但對(duì)于純化的抗原在1μg/ml濃度,每孔50μl一般情況下足夠。用薄膜覆蓋4oC孵育過(guò)夜。2.移去抗原溶液。加入封閉液200μl/孔(PBScontaining1%BSAand0.02%azide)以封閉非特異蛋白的結(jié)合。室溫下卵育1–2小時(shí),或4oC過(guò)夜。3.移去封
ELISA試劑盒發(fā)展表現(xiàn)2023/03/23
ELISA試劑盒自從60-70年代問(wèn)世以來(lái),得到科研工作者的認(rèn)可及推崇,在歐美及中國(guó)獲得很大的推廣,尤其是國(guó)內(nèi)生化領(lǐng)域的長(zhǎng)足發(fā)展。近年來(lái),EIA技術(shù)取得了顯著的發(fā)展,主要表現(xiàn)在以下方面:1.繼單克隆抗體后的第三代抗體基因工程抗體的應(yīng)用,明顯地提高了檢測(cè)的特異性,基本消除了抗原、抗體間的非特異xingjiao叉反應(yīng),保證了分析的準(zhǔn)確性。2.分析方式的改進(jìn)與多樣化提高了試驗(yàn)的敏感性(1)除早期的競(jìng)爭(zhēng)法,間接法外,又發(fā)展了雙抗原夾心法測(cè)抗體,偶聯(lián)酶標(biāo)記法測(cè)抗原,橋聯(lián)酶免疫分析,酶放大免疫分析技術(shù)等。(
ELISA的移液和洗滌技術(shù)2023/03/16
免疫檢測(cè)法的精確性表現(xiàn)為單次實(shí)驗(yàn)孔間(批內(nèi))的重復(fù)性和多次實(shí)驗(yàn)之間(批間)的重復(fù)性。CV值高則表明精確度低,通常由以下兩個(gè)原因造成:移液技術(shù)和洗滌技術(shù)。移液技術(shù)1.移液時(shí),槍頭應(yīng)對(duì)準(zhǔn)孔中央,避免接觸孔壁及底部。2.移液后輕輕晃動(dòng)混勻試劑。3.如果您的樣品具有黏性,請(qǐng)預(yù)先潤(rùn)洗槍頭以消除表面張力的影響。吸液時(shí)等待片刻使體積平衡后再取出。4.移液不充分或移液體積不均,說(shuō)明移液器需要校正。必要時(shí)請(qǐng)檢查移液器并重新校正。5.加樣時(shí),不同的試劑標(biāo)準(zhǔn)品和樣本間都要確保更換槍頭,避免交叉污染。6.確保使用合適的
ELISA產(chǎn)品相關(guān)要素2023/03/08
小伙伴們?yōu)镋LISA實(shí)驗(yàn)選購(gòu)試劑盒時(shí),是不是有很多問(wèn)號(hào)?選什么物種?什么指標(biāo)?什么檢測(cè)限?怎樣的精密度,稀釋線(xiàn)性,特異性是優(yōu)秀的?今天小編整理了ELISA產(chǎn)品相關(guān)要素,助您五分鐘掌握如何選到適合自己實(shí)驗(yàn)的試劑盒。ELISA產(chǎn)品選擇要素1、根據(jù)實(shí)驗(yàn)物種及待檢樣品性質(zhì)來(lái)選擇種屬:人、小鼠、大鼠、雞、牛、猴等;樣本類(lèi)型:血清、血漿、組織培養(yǎng)上清、組織或細(xì)胞裂解物。2、根據(jù)樣品中檢測(cè)物水平選擇寬動(dòng)力學(xué)檢測(cè)范圍:對(duì)樣品種待測(cè)物水平?jīng)]有任何參考數(shù)據(jù);高靈敏度試劑盒:待檢物含量很低。3、根據(jù)樣本可獲得性來(lái)選擇
ELISA試劑常見(jiàn)類(lèi)型-雙抗夾心法,你要的都在這里!2023/02/24
ELISA是以體外抗原抗體反應(yīng)為基礎(chǔ),將抗原抗體特異性反應(yīng)與酶的高效催化作用相結(jié)合的一種檢測(cè)方法,靈敏度可達(dá)皮克(pg/mL)水平。它是目前商業(yè)應(yīng)用為成熟的免疫分析方法之一,在醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)、臨床診斷、生物制藥方面的運(yùn)用也極為廣泛。目前,常見(jiàn)的ELISA類(lèi)型有四種:雙抗夾心法、直接法、間接法和競(jìng)爭(zhēng)法。其中,雙抗夾心法是為常用的一種,分雙抗體夾心和雙抗原夾心。研域?qū)⒁噪p抗體夾心法為例,和大家分享相關(guān)知識(shí)~實(shí)驗(yàn)原理雙抗體夾心法,其基本原理是將定量的包被抗體以物理吸附的方法固定于微孔板表面,然后加入待檢標(biāo)本
ELISA試劑新品免疫,腫瘤,心血管病相關(guān)指標(biāo)又雙叒增加啦!2023/02/16
1、指標(biāo)簡(jiǎn)述顆粒酶B是絲氨酸蛋白酶顆粒酶家族的一員,專(zhuān)門(mén)存在于細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)和自然殺傷細(xì)胞(NK)的顆粒中。顆粒酶B利用Caspase3、Caspase8和Bid等底物在顆粒介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡中發(fā)揮重要作用。作為人類(lèi)基因組中確定的五種顆粒酶(A、B、H、K和M)之一,顆粒酶B(32kDa)的生物學(xué)功能及其在健康和疾病方面的用途得到了研究。GranzymeB的蛋白酶活性受到SerpinB9/蛋白酶抑制劑9的嚴(yán)格控制。人類(lèi)GranzymeB的氨基酸序列分別與犬類(lèi)、大鼠和小鼠相同,分別為71
研域生物就流式細(xì)胞詳細(xì)介紹2023/02/08
流式細(xì)胞術(shù)在過(guò)去30年里得到迅速發(fā)展,在免疫學(xué)、分子生物學(xué)、細(xì)菌學(xué)、病毒學(xué)、癌癥生物學(xué)和傳染病學(xué)等領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。比如,流式細(xì)胞術(shù)對(duì)研究免疫系統(tǒng)狀態(tài)及其對(duì)傳染病和癌癥的反應(yīng)非常重要,它可以表征來(lái)自血液和骨髓的混合細(xì)胞群,以及由淋巴結(jié)、脾、粘膜組織、實(shí)體腫瘤等固體組織分解成的單個(gè)細(xì)胞。除了分析細(xì)胞外,流式細(xì)胞術(shù)另一個(gè)主要應(yīng)用是對(duì)細(xì)胞進(jìn)行分選,以滿(mǎn)足使用者進(jìn)一步的分析需求。本文將主要以細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)和分子生物學(xué)為例,介紹流式細(xì)胞術(shù)在實(shí)際中的應(yīng)用。細(xì)胞生物學(xué)與免疫學(xué)免疫分型:免疫分型在流式細(xì)胞術(shù)
研域生物ELISA試劑通關(guān)樣本篇血清血漿2023/02/02
血清和血漿的區(qū)別血清:血液凝固析出的淡透明液體。如將血液自血管內(nèi)抽出,放入試管中,不加抗凝劑,則凝血反應(yīng)被激活,血液迅速凝固,形成膠凍。其周?chē)龀鲋该饕后w即為血清,也可于凝血后經(jīng)離心取得。血漿:相當(dāng)于結(jié)締組織的細(xì)胞間質(zhì)。是血液的重要組成分,呈淡液體(因含有膽紅素)。血漿的化學(xué)成分中,水分占90~92%,溶質(zhì)以血漿蛋白為主。血漿蛋白是多種蛋白質(zhì)的總稱(chēng),用鹽析法可將其分為白蛋白、球蛋白和纖維蛋白原三類(lèi)。血清與血漿從表面上看似乎沒(méi)有什么不同,但其內(nèi)在的主要區(qū)別是血清中不含纖維蛋白原,是未經(jīng)抗凝處
關(guān)于ELISA試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果應(yīng)具備的三條件2023/01/11
1、標(biāo)本因素血清標(biāo)本可按常規(guī)方法采集,應(yīng)留意避免溶血,紅細(xì)胞溶解時(shí)會(huì)開(kāi)釋出具有過(guò)氧化物酶活性的物質(zhì),以HRP為標(biāo)記的ELISA測(cè)定中,溶血標(biāo)本可能會(huì)增加非特異性顯色。如在冰箱中保留過(guò)久,其中的可發(fā)生聚合,在間接法ELISA中可使本底加深。本文將敘述板式ELISA各個(gè)操縱步驟的留意要點(diǎn),珠式、管式及磁性球ELSIA,國(guó)外試劑均與特殊儀器配合應(yīng)用,嚴(yán)格遵照劃定操縱,必能得出正確的結(jié)果。加樣時(shí)應(yīng)將所加物加在LEISA板孔的底部,避免加在孔壁上部,并留意不可濺出,不可產(chǎn)氣憤泡。有此測(cè)定需用稀的血清,可在
你知道細(xì)胞凍存液的配方嗎2023/01/09
假如要想做到那樣的目地,那么就需要體細(xì)胞冷凍液,這類(lèi)東西如何配備呢?下邊就來(lái)實(shí)際的了解一下,細(xì)胞凍存液的秘方是啥?細(xì)胞凍存液的配方是什么?(一)細(xì)胞凍存1.配置含10%DMSO或凡士林、10~20%小牛血清的凍存細(xì)胞培養(yǎng)液;2.取對(duì)數(shù)成長(zhǎng)期的體細(xì)胞,除去舊細(xì)胞培養(yǎng)液,用PBS清理。3.除去PBS,添加適量蛋白酶(遮蓋細(xì)胞培養(yǎng)皿表層)把單面生長(zhǎng)發(fā)育的體細(xì)胞消化吸收出來(lái);4.抽濾1000rpm,5min;5.除去蛋白酶,添加適量配置好的凍存細(xì)胞培養(yǎng)液,用塑料吸管輕輕地吹打使體細(xì)胞勻稱(chēng),記數(shù),調(diào)整凍存
ELISA試劑盒酶標(biāo)板在什么情況下失效2023/01/03
ELISA試劑盒的保質(zhì)期一般都是在一年,如果保存得當(dāng)?shù)脑?huà),不會(huì)出現(xiàn)問(wèn)題的。但不要反復(fù)凍融。當(dāng)然如果是正常的DAS-ELISA檢測(cè)試劑盒等,應(yīng)該放在4℃左右冰箱保存。建議ELISA試劑盒解凍后一次用完。已開(kāi)封或者使用后,剩余試劑仍需按照試劑瓶標(biāo)簽所示的溫度保存,ELISA檢測(cè)試劑盒開(kāi)封后的酶標(biāo)板要加干燥劑后密封保存于-20℃,避免潮濕。但要注意的是,如果將ELISA試劑盒剛從冰箱里面拿出來(lái)就立即使用的話(huà),可能會(huì)影響,其直接的后果是對(duì)一些弱陽(yáng)性標(biāo)本的檢測(cè)出現(xiàn)假陰性。建議:先從冰箱中拿出來(lái),在室溫下放
標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)常見(jiàn)解答問(wèn)題2022/12/28
1、問(wèn):標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的用途和應(yīng)用范圍答:藥品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)不能作為藥物或醫(yī)療器械而施用于人或動(dòng)物。我所分發(fā)的藥品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)主要用于法定藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的相關(guān)項(xiàng)目的檢測(cè)用,詳細(xì)內(nèi)容請(qǐng)見(jiàn)使用說(shuō)明書(shū)。2、問(wèn):有效期答:除了說(shuō)明書(shū)上注明有效期的品種外,藥品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)一般沒(méi)有像藥品一樣設(shè)置有效期。在規(guī)定的儲(chǔ)存和使用條件下,我所定期進(jìn)行特性量值的穩(wěn)定性核查,若發(fā)現(xiàn)影響使用將及時(shí)公布相關(guān)信息。3、問(wèn):儲(chǔ)存答:標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)一般應(yīng)密閉、避光保存,對(duì)有特殊儲(chǔ)存要求(如低溫、避光等)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),說(shuō)明書(shū)上均有說(shuō)明,今后標(biāo)簽上也將注明。建議
淺談降低elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)的誤差概率2022/12/22
做實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)誤差在所難免,不過(guò)我們做好了相關(guān)事項(xiàng)的話(huà)還是可以降低這種概率的。那如何降低elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)的誤差概率呢?一、檢驗(yàn)技師。應(yīng)具備從事實(shí)驗(yàn)室操作的基本素質(zhì)和實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)。能熟練操作實(shí)驗(yàn)儀器、器械,具有一定總結(jié)和分析問(wèn)題的能力,對(duì)實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的意外情況能及時(shí)妥善解決。二、使用校對(duì)過(guò)的微量移液器,排除自然誤差。移液器準(zhǔn)確與否對(duì)定量檢測(cè)尤為重要。三、仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)。嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行規(guī)范化操作。ELISA試劑盒不同批號(hào)的試劑不可混用。值得改進(jìn)的地方,反復(fù)試驗(yàn)確定成立后才能改進(jìn)。四、洗滌干凈。洗板
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