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上海聯(lián)碩生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第17年
細(xì)胞因子ELISA試劑盒如何處理和保存?2021/10/19
一、血清標(biāo)本如是以無(wú)菌操作別離,則能夠在2~8℃下保存一周,如為有菌操作,則主張冰凍保存。樣本的長(zhǎng)時(shí)間保存,應(yīng)在-70℃以下。二、標(biāo)本在保存中如呈現(xiàn)細(xì)菌污染所形成的的混濁或絮狀物時(shí),應(yīng)離心沉淀后取上清檢測(cè)。三、要注意防止呈現(xiàn)嚴(yán)重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團(tuán),其有相似過(guò)氧化物的活性,因此,在以HRP為符號(hào)酶的ELISA測(cè)定中,如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高,則其就很容易在溫育過(guò)程中吸附于固相,然后與后面加入的HRP底物反響顯色。四、冰凍保存的血清標(biāo)本須注意防止因停電等形成的重復(fù)凍融。標(biāo)本的重復(fù)凍融
胎牛血清、小牛血清、新生牛血清之間的區(qū)別2021/10/08
1、采血時(shí)間不同胎牛血清(FetalBovineSerum)是在母牛懷孕5-8個(gè)月時(shí),通過(guò)胎牛心臟穿刺采血獲取的血清。新生牛血清(NewbornCalfSerum)是來(lái)自剛出生~出生后2周內(nèi)的新生牛靜脈取血。小牛血清(CalfSerum)采自出生后2周至1年內(nèi)的小牛靜脈取血。2、組份與比例不同兩者所含的促細(xì)胞生長(zhǎng)因子、促貼附因子、激素及其他活性物質(zhì)等組份與比例不同。胎牛血清尤其含有胚胎發(fā)育所必需的生長(zhǎng)因子。一些生長(zhǎng)因子到胎牛10個(gè)月時(shí)就消失了。3、用途與用法不同某些細(xì)胞必需胎牛血清才能生長(zhǎng),而有
ELISA實(shí)驗(yàn)技巧:ELISA試劑盒酶標(biāo)板在上面情況下失效?2021/09/30
ELISA試劑盒的保質(zhì)期一般都是在一年,如果保存得當(dāng)?shù)脑?huà),不會(huì)出現(xiàn)問(wèn)題的。但不要反復(fù)凍融。當(dāng)然如果是正常的DAS-ELISA檢測(cè)試劑盒等,應(yīng)該放在4℃左右冰箱保存。建議ELISA試劑盒解凍后一次用完。已開(kāi)封或者使用后,剩余試劑仍需按照試劑瓶標(biāo)簽所示的溫度保存,ELISA檢測(cè)試劑盒開(kāi)封后的酶標(biāo)板要加干燥劑后密封保存于-20℃,避免潮濕。但要注意的是,如果將ELISA試劑盒剛從冰箱里面拿出來(lái)就立即使用的話(huà),可能會(huì)影響,其直接的后果是對(duì)一些弱陽(yáng)性標(biāo)本的檢測(cè)出現(xiàn)假陰性。建議:先從冰箱中拿出來(lái),在室溫下放
酶標(biāo)板可分為那幾種?2021/09/27
酶標(biāo)板(ELISAPLATE)在酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(EnzymeLinkedImmunosorbentAssay,ELISA)中,參與免疫學(xué)反應(yīng)的抗原、抗體、標(biāo)記抗體或抗原的純度、濃度和比例;緩沖液種類(lèi)、濃度和離子強(qiáng)度、pH值和反應(yīng)溫度、時(shí)間等條件起著關(guān)鍵作用。一、高結(jié)合力酶標(biāo)板酶標(biāo)板經(jīng)表面處理后蛋白結(jié)合能力大大増強(qiáng),可達(dá)300-400ng1gG/cm2,主要結(jié)合的蛋白分子量10kD。使用該類(lèi)酶標(biāo)板可提高敏感性,并可相對(duì)減少包被蛋白的濃度和用量,不足之處為較易產(chǎn)生非特異性反應(yīng)??乖蚩贵w包被后,以
吐溫的用途有哪4種?2021/09/26
吐溫(或聚山梨酯)為非離子型表面活性劑,有異臭,溫暖而微苦,系一系列聚氧乙xi去水山梨醇的部分脂肪酸酯。廣泛用作乳化劑和油類(lèi)物質(zhì)的增溶劑。聚山梨酯通常被認(rèn)為是無(wú)毒、無(wú)刺激性的材料。據(jù)WHO的評(píng)估,按總聚山梨酯計(jì)算,日攝入量可高到25mg/kg體重。用途:1.生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中乳化蛋白,在使用時(shí),Tween和同類(lèi)型的TritonX-1OO(聚乙二醇辛基苯基醚)非離子型去污劑不破壞蛋白的結(jié)構(gòu),可減少對(duì)蛋白質(zhì)之間原有的相互作用的破壞。離子型去污劑如SDS則破壞蛋白的結(jié)構(gòu)。2.在生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中作封閉劑,封閉劑應(yīng)
葡萄糖苷酶的催化機(jī)理、作用及應(yīng)用2021/09/22
葡萄糖苷酶是糖苷水解酶大家族中的一大類(lèi)酶,主要功能為水解葡萄糖苷鍵,釋放出葡萄糖作為產(chǎn)物,是生物體糖代謝途徑中*的一類(lèi)酶。一、主要催化機(jī)理:1、保留型酶的“兩步法”機(jī)制:大多數(shù)葡萄糖苷酶都是保留型葡萄糖苷酶,其催化機(jī)理通常都遵循“兩步法”機(jī)制。第一步:作為親核基團(tuán)的羧基負(fù)離子親核進(jìn)攻糖苷鍵上的異頭碳,同時(shí)作為廣義酸堿對(duì)的另一個(gè)催化羧基上的氫與糖苷鍵上的氧原子形成氫鍵,第一次形成含氧碳正離子樣過(guò)渡態(tài)(Oxocarbenium-liketransitionstate)。經(jīng)過(guò)鍵的形成有斷裂,糖基分子的
胰蛋白酶的作用有哪些?2021/09/18
胰蛋白酶Trypsin(Parenzyme)為蛋白酶的一種,EC3.4.4.4,是從牛、羊、豬的胰臟提取的一種絲氨酸蛋白水解酶。在脊椎動(dòng)物中,作為消化酶而起作用。在胰臟是胰蛋白酶的前體胰蛋白酶原被合成后,作為胰液的成分而分泌,受腸激酶,或胰蛋白酶的限制分解成為活化胰蛋白酶,是肽鏈內(nèi)切酶,它能把多肽鏈中賴(lài)氨酸和精氨酸殘基中的羧基側(cè)切斷。它不僅起消化酶的作用,而且還能限制分解糜蛋白酶原、羧肽酶原、磷脂酶原等其它酶的前體,起活化作用。是特異性*的蛋白酶,在決定蛋白質(zhì)的氨基酸排列中,它成為*的工具。胰蛋
透析袋的透析類(lèi)型有哪些?2021/09/15
透析袋通常是由半透膜制成的袋狀容器。在生物大分子的制備過(guò)程中,除去鹽、少量有機(jī)溶劑、生物小分子雜質(zhì)和濃縮樣品時(shí)都要用到透析的技術(shù)-透析袋。自ThomasGraham1861年發(fā)明透析方法至今已有一百多年。透析已成為生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室常用的分離純化技術(shù)之一。在生物大分子的制備過(guò)程中,除鹽、除少量有機(jī)溶劑、除去生物小分子雜質(zhì)和濃縮樣品等都要用到透析的技術(shù)。透析只需要使用專(zhuān)用的半透膜即可完成。通常是將半透膜制成袋狀,將生物大分子樣品溶液置入袋內(nèi),將此透析袋浸入水或緩沖液中,樣品溶液中的大分子量的生物大分子
細(xì)胞培養(yǎng)的具體步驟和要求以及注意事項(xiàng)2021/09/13
一、細(xì)胞復(fù)蘇將凍存細(xì)胞從液氮中取出后,在37℃水浴鍋內(nèi)不斷搖動(dòng)促進(jìn)其融化。移人15ml離心管中,加入10ml預(yù)熱的DMEM*培養(yǎng)基,輕輕吹勻,離心,2000rpmX2min,棄上清液。加入10mlDMEM培養(yǎng)基清洗,棄上清液。加入10mlDMEM*培養(yǎng)基,輕輕吹打,接種于10cm盤(pán)中,在含5%CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。二、細(xì)胞傳代細(xì)胞密度達(dá)到80%~90%時(shí).去培養(yǎng)基,10mlPBS清洗2次。加入3ml含0.25%EDTA的胰蛋白酶,放人細(xì)胞培養(yǎng)箱3min。加人1mlDMEM*培養(yǎng)基終止胰酶消化
PBS緩沖液和Hanks緩沖液的區(qū)別2021/09/10
PBS:磷酸緩沖鹽溶液——具有pH緩沖作用的等滲鹽溶液。PBS溶液又稱(chēng)磷酸鹽緩沖溶液,一般選擇K2HPO4和KH2PO4配制,因?yàn)殁c鹽溶解的較慢。根據(jù)不同pH的溶液,稱(chēng)量不同質(zhì)量的磷酸鹽,也可以用pH計(jì)調(diào)溶液的pH。PBS一般用作支持電解質(zhì)。其配置方法如下:采用去離子水、KH2PO4和Na2HPO4·2H2O配制PBS溶液,按以下步驟進(jìn)行:(1)配制1/15mol/LKH2PO4,即每升水中溶解9.078克KH2PO4;(2)配制1/15mol/LNa2HPO4·2H2O,即每升水中溶解11.8
移液器的使用方法和注意事項(xiàng)2021/09/07
一、方法/步驟:1、首先設(shè)定移液體積:從大量程調(diào)節(jié)至小量程為正常調(diào)節(jié)方法,逆時(shí)針旋轉(zhuǎn)刻度即可;從小量程調(diào)節(jié)至大量程時(shí),應(yīng)先調(diào)至超過(guò)設(shè)定體積刻度,再回調(diào)至設(shè)定體積,這樣可以保證移液器的精確度。2、接著裝配移液槍頭:將移液槍垂直插入槍頭中,稍微用力左右微微轉(zhuǎn)動(dòng)就可以使其緊密結(jié)合。3、然后進(jìn)行垂直吸液:吸頭j端浸入液面3mm以下,吸液前槍頭先在液體中預(yù)潤(rùn)洗2~3次確保移液的精度和準(zhǔn)度,以防有較大誤差。4、然后放液吸液:放液時(shí)如果量很小則應(yīng)吸頭j端可靠容器內(nèi)壁。一定要慢吸慢放,以防突然松開(kāi)溶液吸入過(guò)快而
納米二氧化硅的應(yīng)用2021/08/24
納米二氧化硅(英文名稱(chēng)nano-silicondioxide)是一種無(wú)機(jī)化工材料,俗稱(chēng)白炭黑。納米二氧化硅的物化性質(zhì):1.外觀(guān)為為無(wú)定形白色粉末,粒子尺寸范圍在1~100納米,微結(jié)構(gòu)為球形,呈絮狀和網(wǎng)狀的準(zhǔn)顆粒結(jié)構(gòu)。2.不能溶于水和酸(氫氟酸除外)及有機(jī)溶劑,能溶于堿及氫氟酸。3.屬于非金屬酸性氧化物,與金屬氧化物在高溫下生成硅酸鹽,除氫氟酸外不與其他酸反應(yīng),與強(qiáng)堿反應(yīng)生成鹽,能與氫氟酸反應(yīng)生成氟硅酸,納米二氧化硅的應(yīng)用:納米二氧化硅的用途分非常廣泛,一般添加重量在0.5-2%,個(gè)別產(chǎn)品體系可到
細(xì)胞轉(zhuǎn)染的方法及常用步驟2021/08/23
一、方法1、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法陽(yáng)離子脂質(zhì)體表面帶正電荷,能與核酸的磷酸根通過(guò)靜電作用,將DNA分子包裹入內(nèi),形成DNA脂復(fù)合物,也能被表面帶負(fù)電的細(xì)胞膜吸附,再通過(guò)融合或細(xì)胞內(nèi)吞進(jìn)入細(xì)胞。脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染適用于把DNA轉(zhuǎn)染入懸浮或貼壁培養(yǎng)細(xì)胞中,是目前實(shí)驗(yàn)室方便的轉(zhuǎn)染方法之一,其轉(zhuǎn)染率較高,優(yōu)于磷酸鈣法。由于脂質(zhì)體對(duì)細(xì)胞有一定的毒性,所以轉(zhuǎn)染時(shí)間一般不超過(guò)24小時(shí)。常用細(xì)胞類(lèi)型:cos-7、BHK、NIH3T3、Hela等。2、電穿孔轉(zhuǎn)染法電流能夠可逆地?fù)舸┘?xì)胞膜形成瞬時(shí)的水通路或膜上小孔促使DNA分子進(jìn)入
六偏磷酸鈉的性質(zhì)和應(yīng)用2021/08/19
六偏磷酸鈉為NA2O/P2O5分子比近1的玻璃狀磷酸鹽,過(guò)去稱(chēng)為"格蘭漢姆"鹽。于1832年由格蘭漢姆發(fā)現(xiàn),他將磷酸二氫鈉加熱脫水而得的鹽,在其熔點(diǎn)(625℃)下加熱,并使熔融物迅速冷卻,而制得有吸濕性的格蘭漢姆鹽。六偏磷酸鈉的性質(zhì):摩爾質(zhì)量:611.77g·mol-1外觀(guān):白色、無(wú)臭、結(jié)晶粉末密度:2.484g/cm3熔點(diǎn):616°C(分解)沸點(diǎn):1500°C溶解度(水):易溶溶解度(有機(jī)溶劑):不溶吸濕性:強(qiáng),在溫水、酸或堿溶液中易水解為正磷酸鹽。其他性質(zhì):熔點(diǎn)616℃(分解),相對(duì)密度2.
Tris-HCl緩沖液有哪些優(yōu)缺點(diǎn)?2021/08/18
優(yōu)點(diǎn):①因?yàn)門(mén)ris堿的堿性較強(qiáng),所以可以只用這一種緩沖體系配制pH范圍由酸性到堿性的大范圍pH值的緩沖液;②對(duì)生物化學(xué)過(guò)程干擾很小,不與鈣、鎂離子及重金屬離子發(fā)生沉淀。缺點(diǎn):①緩沖液的pH值受溶液濃度影響較大,緩沖液稀釋十倍,pH值的變化大于0.1;②溫度效應(yīng)大,溫度變化對(duì)緩沖液pH值的影響很大,即:△pKa/℃=-0.031,例如:4℃時(shí)緩沖液的pH=8.4,則37℃時(shí)的pH=7.4,所以一定要在使用溫度下進(jìn)行配制,室溫下配制的Tris-HCl緩沖液不能用于0℃~4℃。③易吸收空氣中的CO2
如何合成芝麻酚?2021/08/17
芝麻酚,又名3,4-亞甲二氧基苯酚,是芝麻油的重要的香氣成分,也是芝麻油重要的品質(zhì)穩(wěn)定劑。芝麻酚的用途:芝麻酚具有非常強(qiáng)的抗氧化能力,常用于食品、醫(yī)藥的抗氧化劑,同時(shí)它更是合成抗高血壓藥物、心血管藥物的重要的起始原料,同時(shí)也是農(nóng)藥胡椒基丁基醚的原料。芝麻酚在國(guó)際上非常緊俏,尤其是藥物合成領(lǐng)域的需求量很大。芝麻酚的合成方法:芝麻酚的合成技術(shù)主要有三條:其一是從芝麻油中提取,其二是有胡椒胺出發(fā)進(jìn)行全合成,其三是從洋茉莉醛出發(fā)的半合成路線(xiàn)。從芝麻油中提取芝麻酚,溶劑耗量大,成本較高,不適合工業(yè)化生產(chǎn);
胎牛血清和小牛血清的區(qū)別2021/08/13
小牛血清和胎牛血清的區(qū)別:1、來(lái)源不同:(1)小牛血清取自出生10-30天的小牛,出生三月齡小牛動(dòng)脈采血分離血清。(2)胎牛血清是在屠宰懷孕母牛的時(shí)候,通過(guò)心臟穿刺采血獲取的胎牛的血清。2、品質(zhì)不同:(1)小牛血清品質(zhì)不如胎牛血清。(2)胎牛血清是p質(zhì)z高的,因?yàn)樘ヅ_€未接觸外界,血清中所含的抗體、補(bǔ)體等對(duì)細(xì)胞有害的成分最少。3、用途與用法不同:(1)小牛血清而有些細(xì)胞只需小牛血清即可。(2)胎牛血清某些細(xì)胞必需胎牛血清才能生長(zhǎng)。4、外觀(guān)不同:(1)小牛血清外觀(guān)黃色澄清,微溶血,有異物稍粘稠液體
關(guān)于地塞米松的藥理作用2021/08/10
地塞米松又名氟美松、氟甲強(qiáng)地松龍、德沙美松,是糖皮質(zhì)類(lèi)激素。它于于1957年第一次合成,并列名于世界衛(wèi)生組織基本藥物標(biāo)準(zhǔn)清單之中,為基礎(chǔ)公衛(wèi)體系需備藥物之一。地塞米松的理化特征:化學(xué)名:(11β16α)-9-Fluoro-11,17,21-trihydroxy-16-methylpregna-1,4-diene-3,20-dioneCAS號(hào):50-02-2分子式:C22H29FO5分子量:392.5溶解度:ethanol:1mg/mL地塞米松的藥理作用:抗炎作用:本產(chǎn)品可減輕和防止組織對(duì)炎癥的反
蛋白酶K助力您的生化研究2021/08/09
什么是蛋白酶K?蛋白酶K(ProteinaseK)是一種非特異性、枯草桿菌蛋白酶相關(guān)的絲氨酸蛋白酶,基因序列來(lái)源于白色念球菌白色念球菌(Tritirachiumalbumlimber),具有很高的比活性。用于mRNA和DNA與蛋白質(zhì)的分離。它有什么作用?蛋白酶K在原位雜交技術(shù)中通常用于雜交前的處理,它具有消化包圍靶DNA蛋白質(zhì)的作用,以增加探針與靶核酸結(jié)合的機(jī)會(huì)提高雜交信號(hào)。但蛋白酶K的濃度過(guò)高、消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或孵育溫度過(guò)高時(shí)都會(huì)對(duì)細(xì)胞的結(jié)構(gòu)有一定的破壞,導(dǎo)致組織切片的脫落細(xì)胞核的消失,從而影響雜
氫氧化鈉的定義和主要用途2021/08/05
氫氧化鈉,化學(xué)式為NaOH,俗稱(chēng)燒堿、火堿、苛性鈉,溶解時(shí)散發(fā)出氨味,為一種具有很強(qiáng)腐蝕性的強(qiáng)堿,一般為片狀或顆粒形態(tài),易溶于水(溶于水時(shí)放熱)并形成堿性溶液,另有潮解性,易吸取空氣中的水蒸氣(潮解)和二氧化碳(變質(zhì))。NaOH是化學(xué)實(shí)驗(yàn)室其中一種需要準(zhǔn)備的化學(xué)品,亦為常見(jiàn)的化工品之一。純品是無(wú)色透明的晶體。密度2.130g/cm3。熔點(diǎn)318.4℃。沸點(diǎn)1390℃。工業(yè)品含有少量的氯化鈉和碳酸鈉,是白色不透明的晶體。有塊狀,片狀,粒狀等。氫氧化鈉在水處理中可作為堿性清洗劑,溶于乙醇和甘油;不溶
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