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重組蛋白溶解復(fù)溶緩沖液和載體蛋白2023/07/04

干粉形式的重組蛋白在常溫下能夠保持穩(wěn)定，大多數(shù)MCE重組蛋白以干粉形式發(fā)貨。凍干粉在使用前需進行溶解，這時候會?？吹揭晃荒吧质煜さ摹芭笥选薄d體蛋白。溶解教學：Step1:判斷實驗周期。短期實驗=7天，溶解材料：復(fù)溶緩沖液、載體蛋白。Step2:開蓋前離心。凍干粉在運輸過程中，會因為外力因素粘附于管壁或者管蓋上，在開蓋之前，先通過離心操作，將凍干粉收集于管底，避免損失和浪費。建議10,000-12,000rpm高速離心30s；若沒有高速離心機，3,000-3,500rpm離心5min。Ste

瓊脂糖的原理及實驗過程2023/07/03

實驗原理瓊脂糖凝膠電泳常用于分離、鑒定DNA、RNA分子混合物，以瓊脂凝膠作為支持物，利用DNA分子在電場中時的電荷效應(yīng)和分子篩效應(yīng)，達到分離混合物的目的。DNA分子在高于其等電點的溶液中帶負電，在電場中由陰極向陽極運動。在一定的電場強度下，忽略DNA分子攜帶的電荷，DNA分子的遷移速度取決于分子篩效應(yīng)，即分子本身的大小和構(gòu)型是主要的影響因素。DNA分子的遷移速度與相對分子量成反比。不同構(gòu)型的DNA分子的遷移速度不同。如環(huán)形DNA分子樣品，其中有三種構(gòu)型的分子：超螺旋分子（cccDNA）、開環(huán)分

胎牛血清的來源、成分及作用2023/06/29

胎牛血清是從胎牛血液中提取的血漿，在細胞培養(yǎng)、疫苗生產(chǎn)、生物技術(shù)等領(lǐng)域中被廣泛應(yīng)用。本文將從胎牛血清的來源、成分、作用等方面進行詳細闡述。一、胎牛血清的來源胎牛血清是從未出生的胎牛臍靜脈血中采集的血漿。由于胎牛臍靜脈血中的免疫球蛋白含量較低，因此較少會引起細胞毒性反應(yīng)。胎牛血清的采集需要在合適的時間進行，一般為胎牛在母牛子宮內(nèi)的第3-6個月采集。二、胎牛血清的成分胎牛血清主要有以下組分組成：1.蛋白質(zhì)：胎牛血清中含有大量的蛋白質(zhì)，其中包括白蛋白、球蛋白、免疫球蛋白等。2.生長因子：胎牛血清中含有

ELISA試劑盒的原理及用途2023/06/28

ELISA試劑盒在國內(nèi)有許多種叫法，例如：ELISA檢測試劑盒、ELISAKit、酶聯(lián)免疫試劑盒、酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒、酶聯(lián)免疫分析試劑盒、酶免試劑盒等，比較常見的叫法是ELISA檢測試劑盒、酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒等。ELISA試劑盒自從60-70年代問世以來，得到科研工作者的認可及推崇，在歐美及中國獲得很大的推廣，尤其是國內(nèi)生化領(lǐng)域的長足發(fā)展。Elisa生物試驗是一種敏感性高，特異性強，重復(fù)性好的實驗診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存，操作簡便，結(jié)果判斷較客觀等因素，已廣泛應(yīng)用在免疫學檢驗的各

PCR常見問題2023/06/26

1.無擴增條帶（1）酶失活或在反應(yīng)體系中未加入酶。TaqDNA聚合酶因保存或運輸不當而失活，往往通過更換新酶或用另一來源的酶以獲得滿意的結(jié)果。（2）模板含有雜質(zhì)。特別是對甲醛固定及石蠟包埋的組織常含甲酸，造成DNA脫嘌呤而影響PCR的結(jié)果。（3）變性溫度是否準確：PCR儀指示溫度與實際溫度是否相符，過高酶在前幾個循環(huán)就迅速失活；過低則模板變性。（4）反應(yīng)系統(tǒng)中污染了蛋白酶及核酸酶，應(yīng)在未加Taq酶以前，將反應(yīng)體系95℃加熱5-10分鐘。（5）引物變質(zhì)失效。人工合成的引物是否正確。是否純化，或因儲

DNA與RNA的復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、翻譯和逆轉(zhuǎn)錄2023/06/21

(一)DNA的復(fù)制：DNA的復(fù)制要保證DNA分子上所攜帶的遺傳信息不會發(fā)生變化。遺傳信息是靠DNA或RNA分子的脫氧核糖核苷酸鏈或核糖核苷酸鏈上核苷酸的排列順序來體現(xiàn)的。因此，保證復(fù)制時DNA分子上脫氧核糖核苷酸的排列順序不會發(fā)生變化是DNA復(fù)制的關(guān)鍵，而堿基互補配對原則保證了這個關(guān)鍵。——(核苷酸因五碳糖的不同分為兩大類，脫氧核糖核苷酸和核糖核苷酸；脫氧核糖核苷酸和核糖核苷酸因含氮堿基的不同各分為四類，脫氧核糖核苷酸分為腺嘌呤脫氧核糖核苷酸、鳥嘌呤脫氧核糖核苷酸、胞嘧啶脫氧核糖核苷酸、胸腺嘧啶

細胞免疫熒光的詳細操作步驟2023/06/20

免疫熒光技術(shù)（Immunofluorescencetechnique）又稱熒光抗體技術(shù)，是標記免疫技術(shù)中發(fā)展最早的一種。它是在免疫學、生物化學和顯微鏡技術(shù)的基礎(chǔ)上建立起來的一項技術(shù)。很早以來就有一些學者試圖將抗體分子與一些示蹤物質(zhì)結(jié)合，利用抗原抗體反應(yīng)進行組織或細胞內(nèi)抗原物質(zhì)的定位。1、取出細胞爬片放到35mm或60mm用過的細胞培養(yǎng)皿里，PBS洗三遍。注意有的時候作的細胞爬片可能比較小，因此夾取的時候要小心。2、4%多聚甲Q固定20分鐘，PBS洗三遍。3、0.2%TritonX100通透10分

基底膠的應(yīng)用及使用方法2023/06/19

基底膠是從富含胞外基質(zhì)蛋白的EHS小鼠腫瘤中提取出基底膜基質(zhì)，其主要成分有層粘連蛋白、Ⅳ型膠原、巢蛋白、肝素糖蛋白，還包含生長因子和基質(zhì)金屬蛋白酶等。在室溫條件下，基底膠聚合形成具有生物學活性的三維基質(zhì)，模擬體內(nèi)細胞基底膜的結(jié)構(gòu)、組成、物理特性和功能，有利于體外細胞的培養(yǎng)和分化，可用于對細胞形態(tài)、生化功能、遷移、侵染和基因表達等的研究。基底膠的使用方法：1、培養(yǎng)細胞時可無需稀釋直接包被，包被厚度可為0.5mm(薄層)或1.0mm(厚層)。Matrigel也可以在無血清培養(yǎng)基中稀釋后用于包被培養(yǎng)器

CCK-8 細胞增殖和細胞毒性實驗2023/06/16

該試劑中含有WST-8，在電子載體1-MethoxyPMS的作用下被細胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲臜產(chǎn)物（Formazandye）。生成的甲臜物的數(shù)量與活細胞的數(shù)量成正比。因此可利用這一特性直接進行細胞增殖和毒性分析。用途：廣泛用于藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗等。特點：對細胞毒性小，可以多次測定選取最佳測定時間；檢測迅速；靈敏度高。實驗步驟：1.種板數(shù)：根據(jù)你摸索的，或者查閱文獻確定你需要的種板濃度，根據(jù)種板濃度對細胞懸液進行稀釋，通常細胞增殖實驗每孔加入約10

凍存管內(nèi)旋和外旋有區(qū)別么？2023/06/15

凍存管內(nèi)旋蓋用于液氮凍存生物樣本，其管口的硅膠墊增強了凍存管的密封性，可以有效的放止液氮滲入;外旋式凍存管用于冰箱中凍存樣本，外旋蓋的螺紋蓋可以降低處理樣品時的污染概率凍存管內(nèi)旋蓋的特點：1、凍存管內(nèi)旋蓋為凍存樣品而設(shè)計，外旋蓋的螺紋蓋可以降低處理樣品時的污染幾率。2、內(nèi)旋冷凍管為液氮氣相中凍存樣品而設(shè)計，管口硅膠墊增強了冷凍管的密封性。3、管帽紋路易于旋轉(zhuǎn)蓋子。4、管帽與管身都采用相同批次和型號的PP原料生產(chǎn)，因此相同的膨脹系數(shù)確保了任何溫度下都能密封。5、大面積的標記區(qū)域方便書寫。6、管體極

細胞傳代操作步驟2023/06/14

一、貼壁細胞傳代（以一個T25瓶為例）1、吸出原培養(yǎng)液；2、加入2ml左右PBS，輕輕晃動培養(yǎng)瓶潤洗細胞，吸出PBS丟棄；3、加入1ml左右胰酶，輕輕晃動培養(yǎng)瓶使之浸潤所有細胞，放入培養(yǎng)箱消化；4、消化時間跟據(jù)細胞特性有所不同，顯微鏡下看到細胞塊中間的細胞明顯分離變圓，側(cè)立培養(yǎng)瓶細胞可以滑落時可終止消化，全程不要拍打培養(yǎng)瓶；5、加入3ml含血清的培養(yǎng)基終止消化，吹打細胞使之脫落并在液體里反復(fù)吹打使細胞，使之盡量呈單顆細胞的懸浮液，這時可以在顯微鏡看下；6、收集細胞懸液離心，1200rpm（約25

如何正確的使用封板膜？2023/06/12

1.將封板膜貼在板子上從自封袋中取出單張封板膜，然后重新封好自封袋，以保持其中的無酶環(huán)境。保持底襯面朝上，握住封板膜，沿著切線處慢慢撕下底襯。隨后，將封板膜粘性面的一端貼在板子上，掌握好距離和角度，避免后續(xù)貼歪。貼的過程中一端貼，另一端拉住。注意：一定要戴手套●如果使用單端標簽的封板膜，則將襯紙部分除去、然后將封板膜錨固到板上，使其密封在整個板上，然后繼續(xù)除去襯紙。這種方法可以消除封板膜產(chǎn)生的卷曲和回滾?！袢绻褂脙蓚€末端標簽的產(chǎn)品，請以連續(xù)平滑的方式剝離中心襯紙。緩慢剝離內(nèi)襯可以減少卷曲。注意

如何選擇包埋劑2023/06/07

包埋劑的分類一般用光學顯微鏡觀察的切片，用石蠟、火棉膠、碳蠟、明膠等作包埋劑；電子顯微鏡則使用環(huán)氧杯脂、聚苯乙/烯樹脂、異丁/烯樹脂及水溶性樹脂；硬組織包埋(骨、牙齒)則采用塑料包埋，甲酯甲基內(nèi)烯。*實際上包埋劑就是浸誘劑，浸透和包埋時用的是同一種物質(zhì)，只是用在不同的步驟上叫法不同而已。如用石蠟作浸透，那么同樣要用同樣的石蠟包埋。如何選擇合適的包埋劑包埋劑的作用組織對象有特定需求，選擇合適包埋劑可以提高包埋質(zhì)量，從而提高切片質(zhì)量。接下來，為大家簡單做了分類：石蠟：常見的包埋劑，是病理制片包埋劑，

蛋白胨的定義是什么2023/06/06

一、蛋白胨的定義蛋白胨是以富含蛋白質(zhì)的原料經(jīng)過蛋白酶分解后形成的富含多肽和氨基酸的混合物，能為微生物提供氨源、碳源、維生素、生長因子等營養(yǎng)物質(zhì)。根據(jù)制備蛋白胨的原料來源，可分為動物源蛋白胨(胰酪蛋白胨、牛骨胨、魚胨)、植物源蛋白胨(大豆胨、小麥胨)和微生物源蛋白胨(酵母蛋白胨)。胨一般是指介于氨基酸和蛋白質(zhì)之間、分子量500Da～3000Da的多肽。二、動物蛋白胨的分類詳解酪蛋白是哺乳動物包括母牛，羊和人奶中的主要蛋白質(zhì)。胰酪蛋白胨是一種優(yōu)質(zhì)蛋白胨，是采用胰酶消化酪蛋白后濃縮干燥而成的白色或淺黃

抗體純化方法及實驗步驟2023/05/31

1.鹽析法（飽和硫酸銨沉淀法）該純化方法是基于在待純化免疫血清中加入飽和硫酸銨溶液，由于抗體也是一種蛋白質(zhì)，其在水溶液中的溶解度是由其本身攜帶的親水基團數(shù)和電荷數(shù)決定的，當我們向抗血清中加入飽和硫酸銨溶液后，硫酸根離子和銨根離子與抗體競爭溶液中的水分子，因為硫酸根離子和銨根離子與抗體分子相比，具有更強的親水性，因此抗體分子表面的水化膜被破壞，同時其暴露出來的帶電基團被溶液中的鹽離子所中和進而導致其溶解度大大降低，依據(jù)此原理從而將其從抗血清中分離。2.正辛酸-飽和硫酸銨沉淀法該純化方法原理是：正辛

什么是DNA瓊脂糖凝膠電泳？2023/05/29

1、什么是電泳？電泳是一種利用電流根據(jù)DNA、RNA或蛋白質(zhì)的物理特性（如大小和電荷）來分離它們的技術(shù)。2、什么是瓊脂糖凝膠電泳？瓊脂糖凝膠電泳是一種電泳形式，用于根據(jù)核酸（DNA或RNA）片段的大小進行分離。當施加電流時，帶負電的DNA/RNA通過瓊脂糖凝膠的孔隙向凝膠帶正電的一端遷移，較小的片段遷移較快。由此產(chǎn)生的條帶可以用紫外線（UV）光來觀察。然而，RNA往往會形成二級結(jié)構(gòu)，而且有時同一個片段會有多個不同的種類，這會影響其遷移的方式。因此，觀察到的條帶并不總是代表它們的真實尺寸，圖像也很

如何保證血清活性？2023/05/25

常規(guī)儲存首先，剛到貨的血清，趁著它還凍手，趕緊放進-20℃冰箱中，避免反復(fù)凍融。如何解凍：放4℃過夜直接在4℃冰箱里過夜融化的方法，雖然很多人在這么用，但還是有一些潛在的風險的。我們都知道，在血清這種混合物中，融化速度：蛋白質(zhì)等干物質(zhì)水這類溶劑，所以蛋白質(zhì)會溶解析出，而水還是結(jié)成冰的狀態(tài)，導致瓶子中間會出現(xiàn)一根透明的冰柱，而周圍則會呈現(xiàn)上黃下紅的分層渾濁液的狀態(tài)，在使用過程中很容易引起沉淀、混合不均勻、局部濃度過高等問題，影響細胞生長。更重要的一點是，血清中珍貴的生長因子等活性物質(zhì)，它們在解凍過

無血清培養(yǎng)基的應(yīng)用2023/05/24

目前在大規(guī)模動物細胞的培養(yǎng)中已經(jīng)普遍適用于無血清培養(yǎng)基。在疫苗生長、單抗和各種生物活性蛋白等生物制品的應(yīng)用領(lǐng)域中，優(yōu)化無血清培養(yǎng)基的成分可使不同的細胞在最有利于細胞生長和表達目的產(chǎn)物的環(huán)境中維持高密度培養(yǎng)，降低生產(chǎn)成本。在人類細胞培養(yǎng)中，應(yīng)用無血清培養(yǎng)基還能有選擇性地控制及避免成纖維細胞的過度生長。在無血清培養(yǎng)條件下，某些細胞的生長量和抗體的產(chǎn)量甚至較有血清時高出數(shù)倍。應(yīng)用：(1)研究細胞的分化條件：無血清培養(yǎng)基其組成可以是確知的化學物質(zhì)，因而可根據(jù)研究的需要增減具有重要生物活性物質(zhì)的種類和數(shù)量

什么是脂質(zhì)組學？2023/05/22

脂類是生物體中最重要的物質(zhì)之一，其在生物結(jié)構(gòu)、能量儲存、信號轉(zhuǎn)導等方面發(fā)揮著不可替代的作用。截至2018年1月，在LIPIDMAPS數(shù)據(jù)庫中已列出了40,000多種脂質(zhì)，之后這個數(shù)量還會不斷上升，因此對這些脂質(zhì)進行系統(tǒng)研究是非常有必要的。脂質(zhì)組學是系統(tǒng)研究脂質(zhì)組的一門獨立學科，作為大規(guī)模定性和定量研究脂類化合物并了解它們在不同生理、病理條件下的功能和變化的方法學,能準確全面地提供生物樣品在不同生理條件下的全脂信息譜圖。由于脂類代謝是動植物的代謝中的第一大類，隨著近年來脂質(zhì)組學迅猛發(fā)展,科學家們將

合格的ELISA試劑盒需具備的條件2023/05/18

可以根ELISA試劑盒據(jù)以下幾個方面參閱●查驗技師應(yīng)具有從事實驗室操作的基本素質(zhì)和實踐經(jīng)驗。能熟練操作實驗儀器、器械，具有必定總結(jié)和剖析疑問的才干，對ELISA試劑盒實驗中呈現(xiàn)的意外狀況能及時妥善解決?！襁\用校對過的微量移液器，排除天然差錯。移液器準確與否對定量查看尤為主要?！褡屑氶喿x說明書嚴格依照說明書請求進行規(guī)范化操作。不一樣批號的試劑不可混用。值得改善的地方，重復(fù)實驗斷定建立后才干改善。●留意ELISA試劑盒保存期，過保存期的試劑不能運用?！裨u估試劑的實用性：試劑的安穩(wěn)與否，對準確率的凹凸