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上海恒遠技術重點講談ELISA實驗檢測方案2016/04/26

我公司成立至今七年之久，在前面的內容中我司為大家介紹了許多相關操作方法、操作技巧、經驗總結等，有愈多用戶反應從中學到了不少知識。在今天的內容中，上海恒遠生物為大家重點講談ELISA實驗檢測方案。一、雙抗體夾心法1.測抗原①將特異性抗體與固相載體聯(lián)結，形成固相抗體。洗滌除去未結合的抗體及雜質。②加受檢標本，保溫反應。標本中的抗原與固相抗體結合，形成固相抗原抗體復合物。洗滌除去其他未結合物質。③加酶標抗體，保溫反應。固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結合。*洗滌未結合的酶標抗體。此時固相載體上帶有的酶

ELISA試驗條件如何選擇？2016/04/19

1．固相載體的選擇載體的種類很多，其中包括纖維素、交聯(lián)右旋糖酐、葡萄球菌聚苯乙烯、聚丙烯酰胺等。從使用形式上可有凹孔平板、試管、珠粒等。聚苯乙烯凹孔板是應用zui廣泛的一種載體。聚苯乙烯塑料微量滴定板吸附蛋白的性能好，操作簡便、用量小，適于大批檢查。由于聚苯乙烯的工藝過程不夠穩(wěn)定,造成各批次差異較大。所以進行ELISA之前，必須進行篩選。檢查方法：⑴吸附性能的檢查：先加抗體包被，然后加入同一稀釋度的酶標抗體，zui后加底物、顯色、測OD值,求出總平均OD值,再求出每相鄰兩孔的OD平均值,此均值在

丙二醛“MDA”指標含量檢測操作方法2016/04/15

測試所需儀器設備：可見光分光光度計，可調到95℃左右的恒溫水浴箱（或者鋁鍋內放幾個去掉蓋子的易拉罐，將罐壁及底部穿數(shù)十個孔，以便水的進入，用來代替水浴箱）。離心機。一、旋渦混勻器混勻，試管口用保鮮薄膜扎緊，用針頭刺一小孔，95℃水浴（或用鍋開蓋煮沸40分鐘），取出后流水冷卻，然后3500～4000轉/分，離心10分鐘，取上清液，532nm處，1cm光徑，蒸餾水調零，測各管吸光度值。二、以a表示所取的樣品量，標準品量，無水乙醇的量、試劑一的量，四者均相等，例如樣品取0.1mL，則標準品、無水乙醇及

免疫組化實驗常見問題和解決方法2016/04/12

免疫組化實驗的不順心是否讓你很苦惱，來看看恒遠為你支招解決各種免疫組化的疑難雜癥！！染色過強原因解決方法抗體的濃度過高或抗體孵育時間過長降低抗體滴度（一般指濃縮性抗體）抗體孵育時間：室溫1小時或4℃過ye孵育溫度過高，孵育溫度超過37℃一般室溫20-28℃DAB顯色時間過長或DAB濃度過高顯色時間不能超過5-10分鐘，以顯微鏡下觀察為準非特異性背景染色原因解決方法操作過程中沖洗不充分每步沖洗3×5組織中含過氧化物酶未阻斷可再配置新鮮3%H2O2封閉，孵育時間延長組織中含內源性生物素正常非免疫動物

免疫球蛋白IgG的作用2016/04/06

免疫球蛋白(immunoglobulin)指具有抗體活性的動物蛋白。主要存在于血漿中，也見于其他體液、組織和一些分泌液中。人血漿內的免疫球蛋白大多數(shù)存在于丙種球蛋白(γ-球蛋白)中。免疫球蛋白可以分為IgG、IgA、IgM、IgD、IgE五類.本節(jié)內容主要為您詳細介紹IgG相關作用介紹。人體血清免疫球蛋白的主要成分是IgG，它占總的免疫球蛋白的70-75%，，分子量約15萬，含糖2～3%?？贵w分子是由兩對長短不同的多肽鏈所組成，四條鏈通過鏈間二硫鍵構成Y型基本結構（H2L2）。IgG分子由4條肽

抗體在這幾種情況下需采用不同方法保存2016/03/31

不同的抗體產品保存、運輸方法也是不同的，保存是否得當直接影響到抗體的實驗效果，選對了保存方法，大部分的抗體活性都可以維持數(shù)月甚至數(shù)年。今天上海恒遠為大家?guī)淼馁Y料下載內容是相關抗體的正確保存方法，抗體在這幾種情況下需采用不同方法保存：一、剛收到貨時需立即保存1.請務必在12000rpm離心1分鐘后再打開管蓋進行分裝和保存。注意：如果抗體體積小于50ul，請延長離心時間至5分鐘，以保證全部抗體均離心下來。2.絕大多數(shù)抗體保存在-20℃是*足夠了，沒有證據(jù)顯說明保存在-80℃會有更多好處。3.避免將

中國農業(yè)大學徐老師咨詢我司豬相關病毒檢測試劑盒技術問題2016/03/30

本月初，中國農業(yè)大學徐老師在我司訂購了豬五個指標定性elisa試劑盒。分別為：豬藍耳病毒（PRRS）、圓環(huán)病毒抗體（PCVAb）)、豬瘟（CSF）、輪狀病毒抗體（RVAb）、傳染性胃腸炎病毒抗體（TGEVAb）ELISA試劑盒。上個星期老師自己完成了檢測實驗，準備近期開始發(fā)布論文。客戶遇到技術問題我司*時間解答，徐老師問：包被的抗原都是全病毒嗎，還是截斷表達的蛋白？對此問題我司技術詳細答復問題如下：豬藍耳病毒（PRRS）elisa試劑盒：選定蛋白為GP5豬圓環(huán)病毒抗體（PCVAb）elisa試劑

恒遠小鼠ELISA試劑盒全面解析，讓您實驗無憂2016/03/24

恒遠小鼠ELISA試劑盒全面解析，讓您實驗無憂一個的試驗不僅有堅固的理論也要實踐。理論是實踐的基礎，實踐是理論的運用。但終究選用什么，要依據(jù)試驗詳細來實踐。在做ELISA試劑盒試驗時，包被原的性質很重要，蛋白濃度，是否降解，這關系到你做出的抗體可不可以被其識別，所以保留抗原很重要。而封鎖就是讓大量不相關的蛋白質充填這些曠地空閑，從而排斥ELISA后的步驟中干擾物質的再吸附。因此包被原的特殊性也可能采用中性的緩沖溶液來包。1.供應給客戶的進口ELISA試劑盒為，絕不弄虛作假，且滿足用戶提出的技術協(xié)

對ELISA試劑盒血清標本的保存建議2016/03/23

我公司ELISA試劑盒產品吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相載體，適用血清、血漿、組織勻漿液、細胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標本類型。其中，血清是zui常見的檢測標本之一，根據(jù)上海恒遠生物技術員對ELISA試劑盒血清標本的保存建議有以下幾點：1.樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細菌污染，一則細菌的生長，其所分泌的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白產生分解作用；二則一些細菌的內源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會對用相應酶作標記的測定方法產生非特異性干擾。2.血清標本如是以無菌操作分離，則可以

ELISA實驗：溫育的溫度和方式有哪些2016/03/16

ELISA實驗操作過程中：溫育的溫度和方式有哪些以及注意事項，上海恒遠生物給你全面的解答。溫育的溫度：育常采用的溫度有43、37℃、室溫或4℃等。37℃是實驗室中常用的溫育溫度，也是大多數(shù)抗原抗體結合的zui適反應溫度?？乖贵w反應一般在37℃經1～2h產物的可達，為加速反應，可在一定范圍內提高反應的溫度并在反應過程中連續(xù)振蕩來增加抗原抗體接觸的概率。抗原抗體反應在4℃更為*，形成的產物更多、更穩(wěn)定，但因所需時間太長，在ELISA檢測中一般不予采用。溫育的方式：溫育方式常采用溫箱法、微波輻射法和

影響ELISA結果準確性的外在因素2016/03/14

目前，ELISA方法已被廣泛應用于各種抗原和抗體測定。在臨床檢驗及科研實驗中除正常反應外，有時?？梢姷揭恍╁e誤結果。雖然ELISA測定中影響因素較多，其中包括在操作中有一定的技術要求，除此之外，外在因素更是影響甚大。本周一，我司技術部劉老師為廣大科研新手詳細整理了影響ELISA結果正確性的外在因素。影響ELISA結果正確性的外在因素主要有：標本的采集、貯存等不當所致。如標本溶血、標本被細菌污染、標本貯存過久、標本凝集不全和采血管中添加物等影響。（1）標本溶血：由于各種人為原因引起的標本溶血，均可

謹記這六條，簡單做好ELISA試劑盒實驗2016/03/10

做出好的ELISA實驗需要做好全面的準備，而引起ELISA測定錯誤結果的原因主要有標本、試劑、操作這三方面。上海恒遠技術專員根據(jù)經驗為大家總結出實驗注意，謹記這六條，簡單做好ELISA實驗！1試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。2實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。3使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。4洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。5加入試劑的順序應一致，以保證所有反應

恒遠分享防止樣本溶血的采血方法2016/03/07

3月4日，一周上班的zui后一天。來自中國藥科大學的董老師兔子IL-6，TNF-a及caspase-3三個指標的ELISA試劑盒，老師準備做40只家兔實驗。每只兔子做兩個樣本，即前后做對照。需要采兔血，同時反映采血分離血清經常有溶血現(xiàn)象，血清紅紅的，怎樣才能解決這個問題？很遠提供建議：可以采用耳靜脈取血法。切開耳靜脈時要十分小心，否則會將其割斷，無法再取。如果采血量比較大的話可以使用大白兔心臟穿刺采血的方法。具體如下：先尋找兔子心尖部（也就是尋找心臟搏動zui明顯的地方），然后用75%酒精消毒兔

ELISA實驗洗滌重點之洗滌液的選擇2016/03/02

在前面的資訊講解中，上海恒遠生物為大家著重分析過ELISA試劑盒的洗滌步驟、方法、技巧等相關內容。我們知道洗滌在ELISA過程中雖不是一個反應步驟，但卻也決定著實驗的成敗，ELSIA就是靠洗滌來達到分離游離的和結合的酶標記物的目的。今天我們一起來看看上海恒遠為您帶來的資訊，ELISA實驗洗滌重點之洗滌液的選擇：1.某一項目的洗液建議使用該試劑盒內的洗液；2.同一ELISA試劑盒洗液用完了，建議采用同一批號的洗液；3.同一批號的洗液也用完了，建議采用同一項目的試劑洗液；4.同一項目的洗液用完了，建

ELISA試劑盒冷凍后直接使用有影響2016/02/24

科研試劑的保存存在一定的特殊性，很多客戶將ELISA試劑盒冷凍保存后擔心會有影響。上海恒遠生物公司建議大家將試劑盒解凍后一次用完。我們知道，一般來的試劑盒保質期在半年到一年，切不可反復凍融。ELISA試劑盒冷凍后直接使用有影響，對一些弱陽性標本的檢測出現(xiàn)假陰性。正確的操作方法是：先從冰箱中拿出來，在室溫下放置20分鐘以上后，再進行測定，以使試劑盒在ELISA檢測試劑盒使用前與室溫平衡。這樣做的目的，主要是為了在后面的溫育反應步驟中，能使反應微孔內的溫度能較快地達到所要求的高度，以滿足測定要求。上

ELISA試劑盒實驗的標準曲線和測定的重復性差是何原因2016/02/18

ELISA試劑盒實驗的標準曲線和測定的重復性差，這是什么原因造成的？答：試驗的標準曲線和測定的重復性差，這是典型的由測定操作引起的問題，常見原因如下：a)可能原因：加樣本及試劑量不準；孔間不一致；解決方法：校正移液器，吸嘴要配套，裝吸嘴時要緊密。重復某一樣品時，加樣時間盡可能與*次接近；重復測定標本，操作條件、人員等應盡可能與上次保持一致，以排除這些因素造成的不一致的可能性；樣品稀釋前應充分混勻。b)可能原因：加樣過快，孔間發(fā)生污染；解決方法：重復測定標本，操作條件、人員等應盡可能與上次保持一致

上海恒遠簡述ELISA檢測試劑盒的歷史與原理2016/01/25

上海恒遠簡述ELISA檢測試劑盒的歷史與原理ELISA檢測試劑盒歷史概述：1971年Engvall和Perlmann發(fā)表了酶聯(lián)免疫吸附劑測定（enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）用于IgG定量測定的文章，使得1966年開始用于抗原定位的酶標抗體技術發(fā)展成液體標本中微量物質的測定方法。ELISA檢測試劑盒原理：應用雙抗體夾心法測定標本中待測物質水平。用純化的待測物質抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入待測物質，再與HRP標記的待測物質抗體結

ELISA試劑盒實驗過程中遇到的問題和解決方案2016/01/21

*、ELISA試劑盒血清如何避免沉淀物的產生？1.解凍血清時，請按照所建議的逐步解凍法。2.解凍血清時，請隨時將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生3.請勿將血清置于37。C太久。若在37攝氏度放置太久，血清會變得混濁。4.血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無須做此步驟。5.若必須做血清的熱滅活，請遵守56攝氏度，30分鐘的原則，并且隨時搖晃均勻。第二、ELISA加樣時如何防錯？1.用一張寫滿字的紙，字越多越好，比如報紙，墊在下面，這樣，加過標本的小孔看過去下面的字會變

上海恒遠試劑盒售后解析ELISA測定結果2016/01/18

今早，我公司吳收到由沈陽農業(yè)大學朱老師發(fā)來的會話。朱老師在2015年連續(xù)購買了6次ELISA試劑盒，上周，朱老師我司技術說想要試試自己配的試劑盒，看看檢測效果。在朱老師給吳的會話中表示：“我的這個檢測結果不理想，不知道是哪里出了問題。幫我看下是什么原因可以嗎？”我公司試劑盒售后客服吳說可以，并為朱老師安排技術解析Elisa測定結果。朱老師的主要問題是：我自己合成8個氨基酸的抗原短肽，和BSA耦連后免疫動物，1個月后用ELISA測定血清中針對抗原短肽的抗體滴度，具體步驟：用碳酸緩沖液溶解抗原短肽后

判定ELISA試劑盒實驗結果常用方法2016/01/11

ELISA法實驗現(xiàn)已普遍運用于科研領域，其實驗原理：用純化的抗體包被微孔板，制成固相載體，往包被抗C3抗體的微孔中依次加入標本或標準品、生物素化的抗C3抗體、HRP標記的親和素，經過*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的C3呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，計算樣品濃度。當我們將實驗的一切都準備好并且即將完畢時，要如何去判定ELISA試劑盒實驗結果呢？這里給您總結出了三個方法，分別是定量測定