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PCR技術(shù)的操作原理？2025/01/08: 基本原理類似于DNA的天然復(fù)制過程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補(bǔ)的寡核苷酸引物。PCR由變性--退火--延伸三個(gè)基本反應(yīng)步驟構(gòu)成：①模板DNA的變性：模板DNA經(jīng)加熱至94℃左右一定時(shí)間后，使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結(jié)合，為下輪反應(yīng)做準(zhǔn)備；②模板DNA與引物的退火(復(fù)性)：模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后，溫度降至55℃左右，引物與模板DNA單鏈的互補(bǔ)序列配對(duì)結(jié)合；③引物的延伸：DNA模板--引物結(jié)合物在Taq酶的作用下，以dNTP為反應(yīng)原料，靶

細(xì)胞培養(yǎng)需要哪些環(huán)境因素?2024/12/25: 1．無菌環(huán)境無毒和無菌是體外培養(yǎng)細(xì)胞的首要條件。細(xì)胞在活體內(nèi)，解毒系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)可抵抗微生物或其他有害物質(zhì)的入侵，但細(xì)胞在體外培養(yǎng)的過程中，缺乏機(jī)體免疫系統(tǒng)的保護(hù)而喪失對(duì)微生物的防御能力和對(duì)有害物質(zhì)的解毒能力。為保證細(xì)胞能在體外環(huán)境中生長(zhǎng)繁殖，必須要確保無菌工作區(qū)域、良好的個(gè)人衛(wèi)生、無菌試劑和培養(yǎng)基以及無菌操作。常見的微生物污染有支原體、細(xì)菌、真菌。支原體無致死毒性，可與細(xì)胞長(zhǎng)期共存，對(duì)細(xì)胞有潛在影響，但體積小，不易鑒別，可借助于地衣紅或Hoechst33342染色來進(jìn)行檢測(cè)。細(xì)菌增殖快，在短時(shí)

酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)易錯(cuò)問題解答2024/12/16: 在操作酶聯(lián)免疫試劑盒實(shí)驗(yàn)時(shí)，有很多技術(shù)問題是比較常見且易錯(cuò)的，而就是這些問題困惑不少實(shí)驗(yàn)操作員。恒遠(yuǎn)生物根據(jù)技術(shù)部的問題處理總結(jié)，整理出了幾個(gè)比較常見的問題，跟著小編一起往下看吧：一、為什么必須設(shè)置復(fù)孔？為獲得更準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，強(qiáng)烈建議標(biāo)準(zhǔn)品及樣本進(jìn)行復(fù)孔檢測(cè)，因?yàn)閺?fù)孔檢測(cè)可以：計(jì)算平均值，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果更準(zhǔn)確；解決實(shí)驗(yàn)中誤操作造成的跳孔現(xiàn)象；計(jì)算CV值，對(duì)實(shí)驗(yàn)的操作和試劑盒的精密度進(jìn)行評(píng)估。二、重復(fù)性差怎么辦？1.樣品數(shù)量不一，加樣時(shí)間長(zhǎng)短不一。2.酶標(biāo)儀濾光片不對(duì)或輸入波長(zhǎng)不對(duì)。3.酶標(biāo)儀測(cè)定

恒遠(yuǎn)生物|HL-1 (小鼠心肌細(xì)胞)產(chǎn)品說明2024/12/10: 貨號(hào)：HYCC20114規(guī)格：T25形態(tài)特性：成纖維細(xì)胞樣生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)培養(yǎng)條件：MEM+10%FBS傳代方法：1：2傳代凍存條件：無血清細(xì)胞凍存液特別說明：本庫的細(xì)胞系（株）僅用于科研工作，未經(jīng)許可不得用于其他目的。使用者不得將本庫細(xì)胞系（株）轉(zhuǎn)讓給第三者。細(xì)胞培養(yǎng)常見問題解答1.培養(yǎng)基為什么一般都是偏紅色?因?yàn)榕囵B(yǎng)基加了酚紅來顯示顏色，指示pH范圍為6-8，顏色會(huì)由黃變?yōu)樽霞t。這是為了我們能更直觀觀察培養(yǎng)液的變化，如變黃，則代表偏酸，偏堿性了就顯示偏紫色。一般來說，細(xì)胞吸收營養(yǎng)后，變黃后

ELISA預(yù)實(shí)驗(yàn)完整攻略2024/11/27: ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）預(yù)實(shí)驗(yàn)是開展正式實(shí)驗(yàn)前不可少的環(huán)節(jié)，主要用于摸索合適的實(shí)驗(yàn)條件及確定實(shí)驗(yàn)的可行性。以下是ELISA預(yù)實(shí)驗(yàn)的開展過程，一起來看看吧！一、預(yù)實(shí)驗(yàn)的目的確定實(shí)驗(yàn)條件：如抗原或抗體的濃度、酶的種類和濃度、洗滌液的濃度和pH值等，以確保實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和可靠性。確定實(shí)驗(yàn)范圍：包括最佳反應(yīng)時(shí)間和濃度范圍，以確保在正式實(shí)驗(yàn)中獲得最佳的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)方法：確保實(shí)驗(yàn)方法的準(zhǔn)確性和可靠性。減少實(shí)驗(yàn)誤差：提高實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性和可重復(fù)性。二、預(yù)實(shí)驗(yàn)的方法1.實(shí)驗(yàn)樣本的選擇：預(yù)實(shí)驗(yàn)一般通過測(cè)定少

人甘油三酯(TG)ELISA試劑盒產(chǎn)品說明更新2024/11/20: 檢測(cè)范圍：16μmol/L-700μmol/L使用目的：本試劑盒用于測(cè)定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中甘油三酯(TG)含量。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人甘油三酯(TG)水平。用純化的人甘油三酯(TG)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入甘油三酯(TG)，再與HRP標(biāo)記的甘油三酯(TG)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的甘油三酯(TG)呈正相

ELISA試劑盒白介素類實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)2024/11/12: ELISA試劑盒白介素類檢測(cè)的樣本是有多種類型的，如血清、血漿、尿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清或組織勻漿液等，不同類型的檢測(cè)樣本前期的處理辦法是不一樣的。實(shí)驗(yàn)樣本的處理可謂是ELISA實(shí)驗(yàn)的要害進(jìn)程之一，所以科研朋友一定要多加留心。一、濃縮由于凈化進(jìn)程中引入的溶劑，可能會(huì)下降待測(cè)組分的濃度或許不適宜直接分析，需求去除悉數(shù)有機(jī)溶劑。即試劑盒前處理進(jìn)程中把樣本在60℃氮?dú)庀麓蹈桑儆脧?fù)溶液溶解單調(diào)殘留物。濃縮辦法：氮?dú)獯蹈沙s、壓縮空氣吹干除雜。二、均質(zhì)①組織樣本：肉、肝食品類切細(xì)，用絞肉機(jī)反復(fù)絞碎，混合均勻。

關(guān)于干擾素（IFN）家族2024/11/08: 干擾素(IFNs)是宿主細(xì)胞在響應(yīng)病原體(如病毒、細(xì)菌、寄生蟲或者腫瘤細(xì)胞)時(shí)合成和釋放的一組信號(hào)蛋白。在通常情況下，病毒感染的細(xì)胞會(huì)釋放干擾素，使周圍的細(xì)胞提高其抗病毒防御能力。基于受體類型，人類干擾素可分為3大類型：I型干擾素，包括IFN-α、IFN-β、IFN-ε、IFN-κ和IFN-ω，II型干擾素(在人類中稱為IFN-γ)和III型干擾素。干擾素(IFNs)是宿主細(xì)胞在響應(yīng)病原體(如病毒、細(xì)菌、寄生蟲或者腫瘤細(xì)胞)時(shí)合成和釋放的一組信號(hào)蛋白。在通常情況下，病毒感染的細(xì)胞會(huì)釋放干擾素，使

胎牛血清培養(yǎng)如何防止黑點(diǎn)生成2024/10/28: 近期有客戶向我們咨詢胎牛血清細(xì)胞培養(yǎng)中黑點(diǎn)如何防止生成？對(duì)此我司技術(shù)專員給出了詳細(xì)了解釋，為防止客戶由于操作方面而使黑點(diǎn)生成的辦法。因此定要做好以下幾點(diǎn)。方可使細(xì)胞培養(yǎng)順利。1.盡可能地減少血清凍融次數(shù)。2.培養(yǎng)基無需37℃水浴。3.培養(yǎng)基保持zuiPH值7.0-7.2。4.嚴(yán)格控制配制培養(yǎng)基的水質(zhì)，容器定期刷洗。5.掌握細(xì)胞傳代的zui時(shí)機(jī)，細(xì)胞切勿生長(zhǎng)過老。一、化凍將血清從-20度冰箱中取出，室溫（或浸于自來水中）化凍（約需要30分鐘至2小時(shí)，也可放于4度冰箱化凍過夜；化凍后若不馬上滅活，可

ELISA實(shí)驗(yàn)如何準(zhǔn)確的稀釋樣本？2024/10/23: 一個(gè)準(zhǔn)確的ELISA檢測(cè)實(shí)驗(yàn)，必須包含三大要素：性能可靠的試劑盒、造模成功并準(zhǔn)確采集的樣本、可控環(huán)境且嚴(yán)謹(jǐn)實(shí)驗(yàn)操作，三者缺一不可。在操作過程中，經(jīng)常遇到樣本稀釋問題，需要進(jìn)行樣本稀釋。一、在ELISA實(shí)驗(yàn)過程中，超過試劑盒檢測(cè)范圍的，樣本值高的可能情況1、樣本中待測(cè)物含量過高。一些高豐度蛋白來說，比如免疫球蛋白、脂聯(lián)素、C肽、載脂蛋白等，在樣本中本身含量就很高，有的達(dá)到mg/mL濃度。2、一些受誘導(dǎo)表達(dá)的細(xì)胞上清中，大量表達(dá)，比如小鼠細(xì)胞誘導(dǎo)后，大量表達(dá)腫瘤壞死因子α（TNFα），小鼠胰島細(xì)胞受

質(zhì)粒轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)操作步驟2024/10/15: 1.基本原理將質(zhì)粒DNA導(dǎo)入細(xì)菌的過程稱為轉(zhuǎn)化（Transformation）。此感受態(tài)細(xì)菌細(xì)胞在CaCl2低滲溶液中膨脹為球狀。質(zhì)粒DNA與CaCl2形成抗DNase羥基-磷酸鈣復(fù)合物黏附于細(xì)菌表面，經(jīng)42℃短時(shí)間熱沖擊處理，促進(jìn)細(xì)胞吸收DNA復(fù)合物。在豐富培養(yǎng)基上生長(zhǎng)數(shù)小時(shí)后，球狀細(xì)胞復(fù)原并分裂增殖。被轉(zhuǎn)化的細(xì)菌中，外源基因得到表達(dá)。在選擇性培養(yǎng)平板上，可選出所需的轉(zhuǎn)化子（即含有質(zhì)粒DNA的細(xì)菌）。鈣處理的感受態(tài)細(xì)胞，一般每微克DNA能獲得105～106個(gè)轉(zhuǎn)化子。除化學(xué)方法轉(zhuǎn)化細(xì)菌外，還有電

酶標(biāo)板整體背景高該如何處理？2024/10/10: 近日，有客戶咨詢公司的業(yè)務(wù)員，ELISA實(shí)驗(yàn)中標(biāo)板整體背景高有什么好的處理方式嗎？下面就請(qǐng)我司技術(shù)專員為您答疑！1.結(jié)合反應(yīng)太強(qiáng)或時(shí)間過長(zhǎng)：檢查底物的稀釋，使用建議的稀釋度。當(dāng)酶標(biāo)板顯色足夠進(jìn)行吸光度讀取時(shí)立即用終止液終止反應(yīng);2.底物溶液或終止液不是新配制：使用新配制的底物溶液。終止液應(yīng)該是清亮的(如果它變黃，這是被污染的標(biāo)志，需要重新配制);3.沒有終止反應(yīng)：如果底物反應(yīng)沒有被終止，顏色會(huì)繼續(xù)變化;4.酶標(biāo)板在酶標(biāo)儀讀板前放置時(shí)間過長(zhǎng)：顏色會(huì)繼續(xù)變化(盡管加了終止液，依然會(huì)以很慢的速度變化)

ELISA試劑盒靈敏度低?2024/09/26: 近日，有客戶在做完實(shí)驗(yàn)后，反映陽性對(duì)照、質(zhì)控在內(nèi)的所有板孔顏色均較淡。這是什么原因造成的？我司技術(shù)整理后給出如下解析，邀您來看看！容易造成的原因有：1.試劑盒必須在有效期內(nèi)使用，超過有效期的產(chǎn)品可能會(huì)產(chǎn)生很弱的信號(hào)；2.試劑盒沒有按規(guī)定進(jìn)行保存，受高溫影響；3.試劑、樣品用前未平衡至室溫；4.加入試劑的體積和時(shí)間有誤，移液器計(jì)量不準(zhǔn)，吸嘴內(nèi)水分太多或不清潔；5.洗板及加樣過程中，酶標(biāo)受污染失活而失去催化顯色劑顯色的能力；6.孵育時(shí)間及孵育溫度未達(dá)到要求，反應(yīng)板放入培養(yǎng)箱時(shí)注意溫度并及時(shí)調(diào)整；7.

ELISA實(shí)驗(yàn)之“溫育”2024/09/10: ELISA（酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定）中的溫育是一個(gè)至關(guān)重要的步驟，它直接影響到抗原與抗體在固相表面的結(jié)合效率，進(jìn)而影響整個(gè)實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和可靠性。以下是關(guān)于ELISA溫育的詳細(xì)解釋：一、溫育的定義與重要性溫育是ELISA測(cè)定中抗原與抗體在固相表面結(jié)合反應(yīng)的過程，這一過程需要在一定的溫度條件下進(jìn)行一定的時(shí)間，以確保抗原與抗體能夠充分結(jié)合。溫育是ELISA測(cè)定中影響測(cè)定成敗最為關(guān)鍵的一個(gè)因素。二、溫育的溫度與時(shí)間1.常用溫度：ELISA溫育常采用的溫度有43℃、37℃、室溫和4℃（冰箱溫度）等。其中，37℃

質(zhì)粒轉(zhuǎn)化的操作步驟你知道嗎2024/09/05: 1.基本原理將質(zhì)粒DNA導(dǎo)入細(xì)菌的過程稱為轉(zhuǎn)化（Transformation）。此感受態(tài)細(xì)菌細(xì)胞在CaCl2低滲溶液中膨脹為球狀（感受態(tài)細(xì)菌的制備，見前）。質(zhì)粒DNA與CaCl2形成抗DNase羥基-磷酸鈣復(fù)合物黏附于細(xì)菌表面，經(jīng)42℃短時(shí)間熱沖擊處理，促進(jìn)細(xì)胞吸收DNA復(fù)合物。在豐富培養(yǎng)基上生長(zhǎng)數(shù)小時(shí)后，球狀細(xì)胞復(fù)原并分裂增殖。被轉(zhuǎn)化的細(xì)菌中，外源基因得到表達(dá)。在選擇性培養(yǎng)平板上，可選出所需的轉(zhuǎn)化子（即含有質(zhì)粒DNA的細(xì)菌）。鈣處理的感受態(tài)細(xì)胞，一般每微克DNA能獲得105～106個(gè)轉(zhuǎn)化子。除

ELISA試劑盒變質(zhì)原因,您知道多少?2024/08/21: ELISA試劑盒變質(zhì)是ELISA實(shí)驗(yàn)中比較常見的問題，那么，ELISA試劑盒變質(zhì)是因?yàn)槭裁茨兀渴鞘裁从绊懥薊LISA試劑盒質(zhì)保？一旦變質(zhì)會(huì)有什么影響呢？恒遠(yuǎn)生物為大家詳細(xì)分析下。一、方法學(xué)的影響ELISA測(cè)定模式包括以下幾種：雙抗體夾心法、間接法、雙抗原夾心法、IgM抗體捕捉法、競(jìng)爭(zhēng)抑制法，其中競(jìng)爭(zhēng)抑制法(HBeAb,HBcAb等采用)因受操作時(shí)差所引起的不gong平競(jìng)爭(zhēng)等因素的影響，結(jié)果重復(fù)性較差，質(zhì)量較難控制。二、試劑因素不同批次的ELISA試劑在制作過程中很難保證質(zhì)量一致，即使是通過批批檢

血清滅活相關(guān)問題解答2024/08/14: 1、問：加到培養(yǎng)基中的血清必須滅活嗎？答：不是必須的，看做什么實(shí)驗(yàn)了。2、問：四季青胎牛血清滅活是56℃30分鐘嗎？答：如果用于培養(yǎng)大多數(shù)的腫瘤細(xì)胞，血清一般是不需要滅活的，這樣可以有效保存血清中的生長(zhǎng)因子。但是如果用于培養(yǎng)一些表面具有補(bǔ)體受體的細(xì)胞，如內(nèi)皮細(xì)胞，血清是需要滅活，一般是56℃，30min。3、問：我要做滋養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)，胎牛血清要滅活嗎？答：進(jìn)口的一般都已滅活，國產(chǎn)的不一定，最好還是滅活一下再用較安全。4、問：我用病毒上清轉(zhuǎn)染細(xì)胞，培養(yǎng)用的血清需要滅活嗎？因?yàn)檠逯锌赡苡行┭a(bǔ)體和抗體

2024人免疫球蛋白A2(IgA2)ELISA試劑盒產(chǎn)品說明2024/08/06: 保存條件及有效期1．試劑盒保存：；2-8℃。2．有效期：6個(gè)月檢測(cè)范圍：0.04μg/ml-2.5μg/ml使用目的：本試劑盒用于測(cè)定人血清,血漿及相關(guān)液體樣本中免疫球蛋白A2(IgA2)含量。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測(cè)定標(biāo)本中人免疫球蛋白A2(IgA2)水平。用純化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被的微孔中依次加入免疫球蛋白A2(IgA2)，再與HRP標(biāo)記的抗原結(jié)合，形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗原復(fù)合物，經(jīng)過洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成

技術(shù)專欄:關(guān)于流式細(xì)胞術(shù)（FCM）2024/07/15: FCM是利用流式細(xì)胞儀對(duì)處在快速直線流動(dòng)狀態(tài)中的單列細(xì)胞或生物顆粒進(jìn)行逐個(gè)、多參數(shù)、快速的定性、定量分析或分析技術(shù)。然而，在FCM的實(shí)際應(yīng)用過程中，要想得到高質(zhì)量的流式數(shù)據(jù)卻并非易事?，F(xiàn)就FCM實(shí)驗(yàn)中的常見問題進(jìn)行分析，希望能幫助相關(guān)實(shí)驗(yàn)人員提高實(shí)驗(yàn)成功率。一、怎么選擇合適的對(duì)照？1）同型對(duì)照：使用同型抗體做平行實(shí)驗(yàn)，主要目的是消除抗體與樣本的非特異性結(jié)合。2）陰性細(xì)胞對(duì)照：使用已知的不表達(dá)目標(biāo)抗原的細(xì)胞做平行實(shí)驗(yàn)，主要目的是消除抗體的非特異性結(jié)合。3）二抗對(duì)照：第二抗體多為熒光標(biāo)記的多抗，非特

科研筆記丨補(bǔ)體知多少？2024/07/10: 補(bǔ)體（Complement，C）是存在于正常人和動(dòng)物血清與組織液中的一組經(jīng)活化后具有酶活性的蛋白質(zhì)。補(bǔ)體系統(tǒng)主要有三條激活途徑：經(jīng)典途徑(CP)、凝集素途徑(LP)、旁路途徑(AP)。這些途徑依賴不同的起始分子激活，但最后殊途同歸，產(chǎn)生相同的終端效應(yīng)分子：過敏性毒素(C4a/C3a/C5a)、膜攻擊復(fù)合物(MAC)和調(diào)理素(如C3b)。補(bǔ)體系統(tǒng)在防御病原體和維持宿主穩(wěn)態(tài)中起著關(guān)鍵作用。一、補(bǔ)體系統(tǒng)的命名補(bǔ)體(complement)：新鮮血清中存在一種不耐熱的成分，該種成分可輔助抗體對(duì)相應(yīng)菌細(xì)胞產(chǎn)

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