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上海寶葉生物科技有限公司
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酶聯(lián)法檢測血吸蟲抗體2012/10/10
[檢測方法]ELISA法[方法學(xué)原理]將血吸蟲可溶性抗原與固相載體聯(lián)結(jié)形成固相抗原，加待檢血清，如血清中有特異性抗體則與固相抗原相結(jié)合，形成固相抗原抗體復(fù)合物；再加HRP標(biāo)羊抗人IgG抗體，形成固相抗原—抗體—羊抗人IgG酶標(biāo)記抗體復(fù)合物，在此基礎(chǔ)上加酶底物顯色，顏色深度與抗體含量成正比。[標(biāo)本準(zhǔn)備]不抗凝靜脈血2ml[試劑]1．日本分體血吸蟲可溶性抗原2．HRP標(biāo)記羊抗人IgG3．0．05mmol／LpH9．6碳酸鹽緩沖液4．稀釋液和洗滌液5．酶底物液6．2mol／LH2504溶液7．正常人（
間接熒光抗體染色法檢測瘧疾2012/10/10
瘧疾（malaria）是瘧原蟲經(jīng)按蚊叮咬傳播的傳染病，臨床上以間歇性寒戰(zhàn)、高熱、大汗和脾大、貧血等為特征，惡性瘧疾能引起兇險發(fā)作。常見檢測方法為間接熒光抗體染色法檢測瘧原蟲抗體。[檢測方法][方法學(xué)原理]抗原片上加患者血清，若血清中含有瘧原蟲抗體，即可與抗原結(jié)合成相應(yīng)的抗原抗體復(fù)合物，此復(fù)合物再與熒光標(biāo)記抗人IgG抗體結(jié)合，zui后通過熒光顯微鏡觀察熒光反應(yīng)。[試劑]1．0．01mol／LpH7．6PBS2．熒光標(biāo)記抗人IgG抗體3．陰性對照、陽性對照血清4．抗原片[檢測步驟]1．用鉛筆將抗原片
利用玻璃微珠裂解酵母細(xì)胞2012/10/08
裂解酵母菌的方法是將玻璃微珠和菌細(xì)胞一起渦旋振蕩進(jìn)行機(jī)械破碎。此法充分利用玻璃微珠的快速轉(zhuǎn)動撞擊酵母菌從而機(jī)械破碎裂解酵母細(xì)胞。由此可見，這是一種強(qiáng)有力的裂解方法，但在裂解過程中又傳輸大量的能量，導(dǎo)致樣本的變性。因此，和哺乳動物細(xì)胞的研究比較，酵母菌的免疫沉淀試驗并不是一個好的方法，特別是研究蛋白質(zhì)的性質(zhì)和結(jié)構(gòu)時，該方法是不可取的。1．準(zhǔn)備工作由于免疫沉淀有多個步驟，且包括數(shù)小時孵育，因此在實驗開始前必須安排好時間，注意適當(dāng)利用過夜孵育的間隙。這將有助于決定何時開始裂解細(xì)胞。同時應(yīng)注意，酵母菌免
組織培養(yǎng)細(xì)胞的裂解2012/10/08
對于組織培養(yǎng)中生長的細(xì)胞，zui有效的裂解方法是用去污劑進(jìn)行處理。雖然有多種去污劑可用于裂解細(xì)胞，但zui常用的是TritonX—100或NP—40等非離子型去污劑。非離子型去污劑能溶解胞質(zhì)和細(xì)胞膜，破壞分子間許多微弱的結(jié)合鍵，并能溶解大部分經(jīng)常研究的蛋白質(zhì)抗原，但對于大分子多聚抗原則無效，在大多數(shù)情況下該抗原也是難以研究的。濃度介于0．1％～1％的去污劑即可滿足幾乎所有溶解需求。非離子型去污劑裂解液一般補(bǔ)充等離子濃度的鹽和接近中性的pH。在某些情況下，需要較劇烈的抽提條件以釋出所研究的抗原或除
病毒性腦炎實驗室診斷與結(jié)果分析2012/09/22
目前，我國流行的主要是乙型腦炎和森林腦炎。而在世界各地還有不同類型的病毒性腦炎流行，其病原體為各種不同的蟲媒病毒，如屬于A組病毒的東方馬腦炎、西方馬腦炎；屬于B組病毒的圣路易腦炎、波瓦生腦炎、蘇格蘭腦炎等。波瓦生腦炎波瓦生腦炎是由波瓦生腦炎病毒引起的，經(jīng)蜱傳播的中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染的自然疫源性疾病。潛伏期7—14d。起病急，持續(xù)高熱、頭痛，隨之出現(xiàn)中樞神經(jīng)癥狀及腦膜刺激征，部分病例出現(xiàn)肢體強(qiáng)直或偏癱。病死率高達(dá)50％，發(fā)病以兒童多見。本病分布于加拿大、美國和北歐，多發(fā)生于夏秋季，其診斷主要依賴于血清
病毒性出血熱實驗室診斷與結(jié)果分析2012/09/22
病毒性出血熱（viralhemorrhagicfever，VHF）是指由多種RNA病毒引起，經(jīng)嚙齒動物或節(jié)肢動物傳播的一組臨床綜合征，微血管損害和滲透性增加為本組疾病的基本病變，肝、心、腦、腎等器官也可受累，發(fā)熱、肌痛、出血為臨床特征。不同病種間病死率差異很大。[病因?qū)W]引起病毒性出血熱的是多種RNA病毒，其中腎綜合征出血熱和漢坦病毒肺綜合征由漢坦病毒屬病毒引起；立夫特山谷熱由白蛉熱病毒屬病毒引起；克里米亞—剛果出血熱由納羅病毒屬病毒引起；拉沙熱、阿根廷出血熱和玻利維亞出血熱由沙粒病毒屬病毒引起
懸浮細(xì)胞用甩片機(jī)黏附于載玻片2012/09/20
處理懸浮細(xì)胞的一個簡單辦法是在固定細(xì)胞之前把細(xì)胞黏附在固相支持物上。方法之一是使用甩片機(jī)。細(xì)胞在固定之前，用特殊的離心方法將細(xì)胞甩至載玻片上。需要注意的是離心力可使細(xì)胞壓癟并擴(kuò)張，使抗體更容易結(jié)合細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)，但也輕微扭曲了正常的細(xì)胞結(jié)構(gòu)。1．所需溶液和儀器PBS及甩片機(jī)。2．操作步驟（1）用PBS洗滌細(xì)胞（400r/min2X106／m1；離心5min），并重懸于PBS中。調(diào)整濃度至1～（2）將顯微鏡載玻片固定于甩片機(jī)的轉(zhuǎn)頭上，然后加入0．1—0．5ml細(xì)胞懸液；（3）迅速使離心力達(dá)到1200
用于染色培養(yǎng)細(xì)胞標(biāo)本的制備2012/09/20
用于染色的培養(yǎng)細(xì)胞既可以是貼壁細(xì)胞，也可以是懸浮細(xì)胞。貼壁細(xì)胞通常使其生長在合適的固相支持物上；懸浮細(xì)胞可以直接固定，也可以通過甩片或使用化學(xué)黏合劑黏附在固相支持物上。（一）貼壁細(xì)胞貼壁細(xì)胞的準(zhǔn)備比較簡單，可以使其生長于適當(dāng)?shù)妮d玻片、蓋玻片或塑料組織培養(yǎng)皿中。如果實驗要求高分辨率或需拍照，細(xì)胞應(yīng)生長于載玻片或蓋玻片上；如果實驗的分辨率要求不高，或者是大量樣品的篩選，可使細(xì)胞生長于塑料組織培養(yǎng)皿中。將貼壁細(xì)胞生長在固相支持物上有其*的優(yōu)點，操作步驟，如沖洗、固定、通透及染色均較簡單易行，便于同時進(jìn)
用人血清進(jìn)行噬菌體ElISA2012/09/18
[器材和試劑]●包被緩沖液●PBST●PBBST[PBS，1％TritonX—100，3％BSA（Sigma）]●兔抗人Fc—特異性IgG（Pierce）：用包被緩沖液稀釋為5．0ug/ml①●HRP標(biāo)記的抗噬菌體抗體（AmershamBiosciences）：用封閉液以1/10000比例稀釋●顯色液[3，3’，5，5’—四甲基聯(lián)苯胺（TMB）液體底物系統(tǒng)，Sigma][方法]1．將200ul兔抗人Fc—特異性IgG等量分加到各孔中。4℃孵育過夜。2．用PBST洗滌多孔板。3．加250ulPBB
gⅥ-cDNA融合噬菌體親和選擇2012/09/18
每一輪的親和選擇包括原始的或富集的gⅥ—cDNA文庫中噬菌粒顆粒的獲取和純化以及它們自身的淘選過程。介紹兩種不同的方法來抽提特異的噬菌體。1噬菌體文庫的獲取和純化在每輪淘選循環(huán)中的起始部分，（富集的）Topl0F，細(xì)胞經(jīng)輔助噬菌體被雙重感染以便產(chǎn)生和純化gⅥ—cDNAt噬菌粒顆粒，從而進(jìn)行下一輪的淘選。在淘選過程中，如果沒有特異的緩沖液且噬菌體對誘餌的親和力較高（如免疫親和篩選），此時經(jīng)雙重感染獲得的噬菌體顆粒并不一定要純化。2生物素化的誘餌的制備用不同的配體標(biāo)準(zhǔn)化淘選的一個方法是用普通的標(biāo)記物
蛋白酶的分類及作用位點2012/09/10
蛋白酶分類作用位點已知抑制物氨基肽酶金屬蛋白酶帶有自由氨基的L-氨基酸氨基末端；不能分解由X-Pro、·D或·Q組成的肽鍵2，2，雙吡啶，1．1（）-菲咯啉菠蘿蛋白酶巰基蛋白酶無特異性α2巨球蛋白，TPCK，TLCK，烷化羧肽酶A鋅金屬蛋白酶帶有自由氨基酸的L—氨基酸羧基端；不能分解R、P或羥脯氨酸EDTA，EGTA羧肽酶B鋅金屬蛋白酶K，R羧基端EDTA，EGTA，堿性氨基酸羧肽酶Y絲氨酸羧肽酶氨基酸羧基端PMSF組織蛋白酶C琉基蛋白酶氨基端雙肽，可通過K，R或P氨基端作為第二或第三個氨基酸封
TCA沉淀過濾法，斑點法2012/09/10
TCA沉淀——過濾法1．為了檢測放射性標(biāo)記物結(jié)合蛋白質(zhì)的摻入量，每個樣本吸取一定量（通常為5／／1）加入盛有100t~lBSA溶液（1mg／m1）的1．5m1錐形管中。2．每管加入lmll0％冰冷的三氯醋酸，混勻。3．冰上孵育30min。4．將玻璃纖維濾紙置于一適當(dāng)?shù)倪^濾器上，用少量的10％三氯醋酸真空過濾，預(yù)先濕潤濾紙。5．滴加樣本于濾紙的中央，而末摻入標(biāo)記物則通過濾紙除去，被TCA沉淀的蛋白質(zhì)則吸附在濾紙上。6．再用少量的10％三氯醋酸（數(shù)毫升）洗滌2次。7．用少量的95％乙醇洗滌2次。8．
肉毒梭菌診斷技術(shù)2012/09/07
疾病診斷、細(xì)菌鑒定，關(guān)鍵在鑒定毒素。從材料中如能迅速檢出毒素為，檢出速度快，治療預(yù)防能及時。從癥狀、流行病學(xué)懷疑肉毒癥后，應(yīng)先千方百計地在極短時期內(nèi)證明檢材中是否有肉毒梭菌毒素，搶時間救人。在設(shè)法證明毒素存在的同時，進(jìn)行細(xì)菌分離、鑒定及產(chǎn)毒能力測定。（1）檢驗程序檢驗菌株是否產(chǎn)生肉毒毒素，或污染食品中是否有產(chǎn)毒素的肉毒梭菌存可按圖進(jìn)行檢驗。檢樣接種肝湯35℃培養(yǎng)3天檢樣接種TPCYT肉湯2℃培養(yǎng)5天↓↓取液體部分7000r/min離心30min↓取上清中過滅菌↓↓↓血清學(xué)試驗禽眼瞼閉合試驗小白鼠
DNA限制酶分析與切割2012/09/07
本實驗是以質(zhì)體pBluescriptIISK（-）為材?，以?同限制酶作用，經(jīng)電泳分離DNA片段后，比較各DNA片段的泳動?與分子?，藉此練習(xí)限制酶的使用、電泳分析及簡?DNA限制圖譜（restrictionmap）的建?。以DNA操作為主的各項實驗必須維持溶液與容器?受核酸分解酵素污染，因此請同學(xué)遵守以下原則并養(yǎng)成習(xí)慣：a.請隨時保持實驗桌的清潔。b.微?移液器頭及微?離心管取出后?即將蓋子蓋上。c.請勿用手觸摸滅過菌的微?移液器頭、微?離心管及各種容器的內(nèi)部。d.溶液打開后，蓋子請勿隨意置放
制備scFv接頭DNA2012/09/02
器材和試劑]●PCR試劑和設(shè)備●1ug任何舍有scFv及（GIy4Ser）3接頭的載體●RHuJH引物、RHuVκ引物和RHuVλ引物，10pmol/ul[方法]1．在0．5ml微量離心管內(nèi)配制用于擴(kuò)增的主混合液。所顯示的主混合液用于VH—Vκ接頭。對于VH—Vλ接頭的主混合液，n＝29。單個反應(yīng)主混合液/ul（n＝25）●水37925●10×Vent緩沖液5．0125●20×dNTPs2．562．5●VentDNA聚合酶0．512．52．取24支0．5ml試管，每管分別加入RHuJH引物和RH
電感受態(tài)大腸桿菌TGl的制備2012/09/02
器材和試劑]●大腸桿菌TGl菌株（Stratagen）●37℃孵育箱（NewBrunswickScientmc）●SorvatlRC5離心機(jī)（或同類型），GS3轉(zhuǎn)頭（均在4℃預(yù)冷）●預(yù)冷的500m1聚丙烯離心管●2L有擋板錐形瓶●基本培養(yǎng)瓊脂板[105gK2HP04、4．5gKH2P04、1g（NH4）2S04、0．5gNa3C6H5O72H2O、15g瓊脂加水至幾。高壓滅菌，冷卻至錐形瓶微溫；接著加入lmllmol/LMgS04、0．5ml1%維生素B：（硫胺）和10m120%右旋糖?！?×Y
2011年諾貝爾獎2012/08/16
2011年度諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎北京時間3日下午揭曉，來自加拿大、美國和盧森堡的三名科學(xué)家因在免疫系統(tǒng)方面的貢獻(xiàn)獲獎。據(jù)外電報道，來自瑞典卡羅琳醫(yī)學(xué)院的消息稱，2011年度諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎由三人分享。其中一半獎勵布魯斯·巴特勒（BruceA.Beutler）和朱爾斯·霍夫曼（JulesA.Hoffmann）在激活先天免疫方面的發(fā)現(xiàn)。另外一半獎勵拉爾夫·斯坦曼（RalphM.Steinman）“發(fā)現(xiàn)樹狀細(xì)胞和它在適應(yīng)性免疫中的作用”。此前曾獲得拉斯克獎的中國科學(xué)家屠呦呦無緣本屆生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎。
帶血針管扎人能傳播艾滋病嗎?2012/08/13
扎人傳播HIV，成功率低于千分之三艾滋病毒污染的血液離開人體后，多長時間病毒會死亡，目前醫(yī)學(xué)界尚未明確的答案。因為，這與血液存儲環(huán)境的溫度、濕度、紫外線條件以及容器等都有直接關(guān)系。不過，想通過扎人傳播艾滋病毒，是非常困難的。即使是艾滋病人的新鮮血液，在無意中扎入他人體內(nèi)——比如醫(yī)生給病人打針后誤扎了自己——在不采取任何防護(hù)措施的前提下，感染艾滋病毒的幾率也只有3‰，即1000人中有3人會被感染。如果在被扎后及時采取防護(hù)措施，被艾滋病病毒感染的風(fēng)險還會再減少80%。針管里的血會很快凝固，想擠出來都
華中農(nóng)大專家可能鎖定結(jié)核病菌基因2012/08/13
一個新的科研成果可能使抗結(jié)核病工作前進(jìn)一大步；前日，記者從華中農(nóng)大蛋白質(zhì)組學(xué)研究中心獲悉，該校農(nóng)業(yè)微生物學(xué)國家重點實驗室何正國教授的課題組發(fā)現(xiàn)，基因WhiB—3可能是調(diào)控結(jié)核病原潛伏感染和耐藥性的關(guān)，鍵基因之一。據(jù)介紹，結(jié)核病的罪魁禍?zhǔn)资墙Y(jié)核分枝桿菌，而在組成結(jié)核分枝桿菌的基因中，哪些基因是起關(guān)鍵作用，并控控制其他基因，導(dǎo)致結(jié)核病病原傳染和產(chǎn)生耐藥性的基因“黑老大”呢?如果能找出它，就能有針對性的進(jìn)行研究，并生產(chǎn)出柜關(guān)藥物。何正國教授說，基因WhiB—3可能就是起關(guān)鍵作用的功能基因之一”?；碴P(guān)成
透析袋用什么封口2012/08/08
使用時，一端用橡皮筋或線繩扎緊，也可以使用特制的透析袋夾夾緊。小量體積溶液的透析，可在袋內(nèi)放一截兩頭燒園的玻璃棒或兩端封口的玻璃管，以使透析袋沉入液面以下。http://www.duoo135.com/st217887/product_7233223.htmlwww.shjinsuibio.com
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