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抗胰島細(xì)胞抗體自身抗原2012/03/09: 單個靶抗原的鑒定有助于改善胰島自身抗體的臨床應(yīng)用價值。闡明特異性T細(xì)胞和針對p-胰島細(xì)胞自身反應(yīng)的HLA作用機(jī)制，以zui終闡明引起胰島自身免疫性損害的機(jī)制。以患者血作為疾病相關(guān)抗體或T細(xì)胞的來源，結(jié)合分離的胰島或p細(xì)胞衍生細(xì)胞株已鑒定出一系列糖尿病相關(guān)自身抗原。判斷一個有重要致病作用的抗原的標(biāo)準(zhǔn)是其組織分布，在l型糖尿病中自身免疫性應(yīng)是直接針對β細(xì)胞的，但已鑒定出的糖尿病相關(guān)抗原卻大多數(shù)分布在其他組織，更進(jìn)一步地說，ICA抗體所識別的胰島中的所有細(xì)胞而不是β細(xì)胞。按組織分布將靶抗原分成4類：①

FITC（異硫氰酸熒光素）2012/03/01: 基本信息異硫氰酸熒光素（fluoresceinisothiocyanate,FITC）純品為黃色或橙黃色結(jié)晶粉末，易溶于水和酒精溶劑。有兩種異構(gòu)體，其中異構(gòu)體Ⅰ型在效率、穩(wěn)定性與蛋白質(zhì)結(jié)合力等方面都更優(yōu)良。FITC分子量為389.4，zui大吸收光波長為490～495nm，zui大發(fā)射光波長為525～530nm，呈現(xiàn)明亮的黃綠色熒光。FITC在冷暗干燥處可保存多年，是目前應(yīng)用zui廣泛的熒光素。其主要優(yōu)點是人眼對黃綠色較為敏感，通常切片標(biāo)本中的綠色熒光少于紅色。FITC是在熒光素的基礎(chǔ)上通過化學(xué)

抗胰島細(xì)胞抗體自身抗體2012/03/01: 胰島細(xì)胞抗體（Isletcellautoantibodies，ICA）在1974年用O型血患者的胰腺組織冷凍切片，經(jīng)間接免疫熒光法（11F）檢測胰島依賴性糖尿病及其他器官特異性自身免疫性疾病患者血清時發(fā)現(xiàn)抗胰島細(xì)胞抗體。胰島細(xì)胞抗體檢測--------------------------------------------------------------------------------抗體方法新IDDM*病情控制胰島細(xì)胞抗體人類胰腺冰凍切片（11F）75％～86％2％～4％CF-胰島素補(bǔ)

Science技術(shù)新突破觀測病毒內(nèi)部2012/02/11: 生物通報道自從顯微鏡被發(fā)現(xiàn)以來，科學(xué)家們一直致力于改進(jìn)這一技術(shù)用于顯示更小的細(xì)胞結(jié)構(gòu)以深入了解人類細(xì)胞、細(xì)菌和病毒的內(nèi)部機(jī)制。如今來自國立衛(wèi)生研究員(NIH)下屬關(guān)節(jié)炎、肌肉骨骼肌皮膚疾病國家研究院(NIAMS)的研究人員開發(fā)了一種新技術(shù)可清楚觀察到病毒內(nèi)的結(jié)構(gòu)。他們在一期(1月13日)的《科學(xué)》(Science)雜志上報道了這一成果。生物通www.ebiotrade.com獲?。築io-RadChemiDocMP多色熒光成像系統(tǒng)資料低溫電子顯微鏡(cryo-EM)技術(shù)是一種可幫助科學(xué)家們對諸如

華大基因、墨爾本大學(xué)Nature Genetics新文章2012/02/11: 摘要：生物通www.ebiotrade.com1月15日，來自澳大利亞墨爾本大學(xué)、華大基因等處的研究人員聯(lián)合在《自然遺傳學(xué)》(NatureGenetics)發(fā)表了題為“Whole-genomesequenceofSchistosomahaematobium”的研究論文，報告了對埃及血吸蟲(Schistosomahaematobium)全基因組測序的研究成果。索?。篗illipore抑制劑技術(shù)手冊生物通www.ebiotrade.com生物通報道1月15日，來自澳大利亞墨爾本大學(xué)、華大基因等處的研

測序解析光合作用背后的機(jī)制2012/02/11: 摘要：生物通www.ebiotrade.com在近日召開的植物和動物基因組大會上，孟山都基因組分析中心的研究人員ToddMichael介紹了他們?nèi)绾卫肐onPGM測序儀對玉米石(又名白花景天)這種植物的基因組進(jìn)行測序。在干旱條件下，這種植物可從標(biāo)準(zhǔn)的C3光合作用轉(zhuǎn)換到景天酸代謝(CAM)。索?。篒onPGM測序資料生物通www.ebiotrade.com生物通報道在近日召開的植物和動物基因組大會上，孟山都基因組分析中心的研究人員ToddMichael介紹了他們?nèi)绾卫肐onPGM測序儀對玉米石

抗甲狀腺球蛋白抗體檢測方法臨床意義2012/02/10: 過去用于檢測Tg自身抗體的方法有：沉淀試驗、間接免疫熒光(11F)、血凝試驗、ELISA和放射定量分析。目前常用IIF法和ELISA法。IIF法熒光圖形為在甲狀腺濾泡腔內(nèi)出現(xiàn)波浪狀著染。在甲狀腺炎患者中抗TPO抗體檢測方法的靈敏度稍遜于抗Tg抗體，但實際上兩者的檢出率不相上下。用高靈敏度方法檢測Tg，可能會降低與疾病相關(guān)的特異性。一些評估Tg自身抗體特異性的研究表明，甲狀腺功能正常的個體與自身免疫性甲狀腺炎免疫應(yīng)答之間存有一定的差別。正常人亦可產(chǎn)生能識別相同或具有交叉反應(yīng)性抗原表位的抗體。另一方

抗體標(biāo)記直接法和間接法的選用2012/02/10: 很多免疫學(xué)技術(shù)依賴于標(biāo)記抗體的使用。對抗體進(jìn)行標(biāo)記主要是用于抗原的定位分析，在某些情況下，也可以對混雜有大量其他分子的樣本中的抗原進(jìn)行定量檢測。由于抗體與其相應(yīng)抗原具有很高的親和力，因此帶有易識別標(biāo)記物的抗體可以定位分析抗原，并且是一種理想的快速價廉的定量測定方法。需要使用標(biāo)記抗體的三種方法，即免疫染色法、免疫印跡法和免疫分析。此三種方法均能定位復(fù)雜混合物中的抗原，而且通過適當(dāng)?shù)膶φ找材芏繙y定。就免疫染色法而言，其目的就是定位正常細(xì)胞環(huán)境中出現(xiàn)的抗原。在此背景下，所有抗原均暴露于抗體，而抗體只

凝膠電泳前的蛋白質(zhì)烷化2012/02/10: 1．如果使用經(jīng)免疫沉淀法得到的蛋白，按常規(guī)洗滌免疫復(fù)合物。盡可能*去除zui后的洗液。如果使用其他來源的蛋白，則將其轉(zhuǎn)入20mmol／L的磷酸鹽溶液中(pH7．0)，或直接在20／1l水中重懸蛋白。蛋白濃度應(yīng)低于lmg／m1。2．加入20u1．5％SDS和20mmol／LDTI。3．加熱至85C10min，仔細(xì)將上清液移入另一試管。4．加入10rd新鮮配制的0．2mmol／LN-乙基順了烯二酰亞胺(NEM)，12．5mg／m1的水溶液為飽和溶液)，使用前臨時配制。85℃溫育10min，有利于NE

用多聚甲醛固定懸浮細(xì)胞2012/02/10: 所有的固定方案必須做到：①防止抗原丟失；②透化細(xì)胞以便使抗體進(jìn)入；③盡量使抗原保持能與抗體結(jié)合的狀態(tài)；④維持細(xì)胞正常結(jié)構(gòu)。常用的固定劑種類很多，固定劑的正確選擇取決于被研究抗原的性質(zhì)及所用抗體的特性。固定劑可分為兩大類：有機(jī)溶劑和交聯(lián)劑。有機(jī)溶劑如乙醇和丙酮能夠去除脂類物質(zhì)使細(xì)胞脫水，把蛋白質(zhì)沉淀在細(xì)胞結(jié)構(gòu)上。交聯(lián)劑一般通過自由氨基基團(tuán)把生物分子橋連起來，形成一個相互連接的抗原網(wǎng)。兩種方法均使蛋白質(zhì)抗原部分變性。因此，在細(xì)胞染色中，能夠識別變性蛋白的抗體更加有用。在某些情況下，只有用此類抗體才能

免疫親和純化的操作步驟2012/02/09: 1．主要內(nèi)容純化率為1000～10000倍?？焖偌兓乖?，層析柱常可重復(fù)使用?？色@得純化的抗原。不能用于定量測定。純化效果取決于抗原的濃度和抗體的親和力需要適當(dāng)純化的抗體。2．操作步驟(1)將抗體結(jié)合到蛋白A或蛋白G微珠上。對于一般用途的層析柱，每毫升濕的微珠大約可以結(jié)合2mg單克隆抗體或親和純化的多克隆抗體。將抗體和蛋白A或蛋白G微珠混合制成稀薄的勻漿，在總量為10ml的溶液中加入大約lml微珠，室溫孵育1h，輕輕搖動混勻。(2)用10倍體積的0．2mol／L硼酸鈉(pH9．0)洗滌微珠2次，

為何使用標(biāo)記蛋白2012/02/09: 標(biāo)記蛋白具有許多優(yōu)點。原則上，該方法為檢測各種細(xì)胞成分中感興趣的蛋白提供廠新的手段。①如果開放閱讀框已經(jīng)被克隆化，但是由于蛋白是新發(fā)現(xiàn)的，或者由于蛋白免疫原性較弱，目前尚沒有針對該蛋白產(chǎn)物的抗體時，此標(biāo)記技術(shù)具有重要的應(yīng)用價值。隨著基因組的研究，由基因工程進(jìn)入蛋白工程，標(biāo)記技術(shù)顯得越來越重要。②由于標(biāo)記物不是天然蛋白氨基酸序列的固有部分，與標(biāo)記物結(jié)合的試劑在進(jìn)行蛋白提純過程中，對蛋白功能產(chǎn)生影響的可能性較小。③只要具備適當(dāng)?shù)妮d體，標(biāo)記蛋白可在任何細(xì)胞中進(jìn)行表達(dá)；例如，相同的標(biāo)記蛋白既可在細(xì)菌中表

Real-Time PCR2012/02/09: 所謂Real-TimePCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號累積實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，zui后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。利用熒光信號的變化實時檢測PCR擴(kuò)增反應(yīng)中每一個循環(huán)擴(kuò)增產(chǎn)物量的變化,通過Ct值和標(biāo)準(zhǔn)曲線的分析對起始模板進(jìn)行定量分析。real-timePCR技術(shù)即實時熒光定量PCR避免了傳統(tǒng)PCR以終產(chǎn)物監(jiān)測定量產(chǎn)生的偏差，提高實驗的重復(fù)性。該技術(shù)已經(jīng)被廣泛用于監(jiān)測細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化；比較不同組織的mRNA表達(dá)差異；驗證基因芯片，siRNA干擾

探秘云南轉(zhuǎn)基因克隆豬神奇熒光助推人類醫(yī)學(xué)研究2012/02/09: 摘要：云南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院近日成功育成10頭攜帶綠色熒光蛋白和瘦素蛋白的轉(zhuǎn)基因克隆豬引起各界廣泛關(guān)注，2月3日記者在云南農(nóng)業(yè)大學(xué)了解到，這一成果將有助于脂肪沉積以及人類肥胖病和糖尿病等疾病的研究，也將使轉(zhuǎn)基因克隆技術(shù)在功能基因驗證、疾病模型、異種器官移植等領(lǐng)域的應(yīng)用前景更為廣闊。云南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院近日成功育成10頭攜帶綠色熒光蛋白和瘦素蛋白的轉(zhuǎn)基因克隆豬引起各界廣泛關(guān)注，2月3日記者在云南農(nóng)業(yè)大學(xué)了解到，這一成果將有助于脂肪沉積以及人類肥胖病和糖尿病等疾病的研究，也將使轉(zhuǎn)基因克

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