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2017
07-14

疏水色譜的原理和應(yīng)用
疏水色譜是利用樣品分子與固定相的疏水力作用的不同，用流動(dòng)相洗脫時(shí)，各組分遷移速度不同而達(dá)到分離的目的。流動(dòng)相一般為pH6-8的鹽水溶液，具有對(duì)蛋白質(zhì)的回收率高，蛋白質(zhì)變性可能性小等優(yōu)勢(shì)。由于流動(dòng)相中不使用有機(jī)溶劑，也有利于蛋白質(zhì)保持固有的活性。疏水作用色譜是在高離子強(qiáng)度的條件下，蛋白質(zhì)溶解度降低，易吸附在中等疏水性的填料表面。隨著離子強(qiáng)度的降低，蛋白質(zhì)的溶解度增加，逐步從柱子上洗脫下來。該法具有高分辨率及保持蛋白質(zhì)生物活性的特點(diǎn)。疏水作用色譜的固定相表面為弱疏水性基團(tuán)，它的疏水性比反相色譜用的固
2017
06-27

C18液相色譜柱使用過程中需要注意的事項(xiàng)
C18柱是一種常用的反相色譜柱，它以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料，因此有較高的碳含量和更好的疏水性，對(duì)各種類型的生物大分子有更強(qiáng)的適應(yīng)能力，適用范圍較廣，是液相色譜儀分析中的色譜柱類型。C18液相色譜柱使用注意事項(xiàng)：1、新C18色譜柱在使用前，須先用甲醇或乙腈試劑以20倍柱體積低流速?zèng)_洗，作用是使固定相能充分潤(rùn)濕、碳鏈?zhǔn)嬲?，使色譜柱的性能達(dá)到狀態(tài)。具體操作是，將配制好65%的乙腈/水沖洗后，把色譜柱進(jìn)口端連接在色譜儀上，出口端放空（不可連上檢測(cè)器，以免污染了檢測(cè)器），以0.1ml/min~0.5
2017
06-12

淺談離子色譜儀
離子色譜是液相色譜的一種，故又稱離子色譜（HPIC）或現(xiàn)代離子色譜，其有別于傳統(tǒng)離子交換色譜柱色譜的主要是樹脂具有很高的交聯(lián)度和較低的交換容量，進(jìn)樣體積很小，用柱塞泵輸送淋洗液通常對(duì)淋出液進(jìn)行在線自動(dòng)連續(xù)電導(dǎo)檢測(cè)。經(jīng)過近幾十年的發(fā)展，離子色譜已經(jīng)從zui初的用于常見無機(jī)陰離子分析發(fā)展到多種無機(jī)和有機(jī)陰、陽(yáng)離子的分析，已經(jīng)成為分析離子態(tài)樣品zui廣泛的分析技術(shù)。我國(guó)的離子色譜儀經(jīng)過這么多年的發(fā)展，也取得了一些成績(jī)和發(fā)展。但是國(guó)產(chǎn)的離子色譜儀和先進(jìn)水平之間還是存在比較大的差距，主要是體現(xiàn)在離子色譜分
2017
03-14

C4反相色譜柱特點(diǎn)及試用范圍
C4反相色譜柱特點(diǎn)：1、定量結(jié)果更準(zhǔn)確、更：（1）純度分析。（2）穩(wěn)定性分析。2、靈敏度更高：檢測(cè)下限更低，對(duì)低濃度雜質(zhì)有更強(qiáng)的檢測(cè)能力。3、分離度更好：更有利于相鄰色譜峰的分離。4、色譜柱間重現(xiàn)性：指同一批次合成的填料之間的重現(xiàn)性。（1）柱床填充質(zhì)量控制：1）理論塔板數(shù)。2）色譜峰對(duì)稱。3）柱反壓。（2）無選擇性差異。5、色譜柱批次間重現(xiàn)性：指不同批次合成的填料之間的重現(xiàn)性。（1）顆粒的物理性質(zhì)。（2）顆粒表面的化學(xué)性質(zhì)。C4反相色譜柱應(yīng)用范圍：1、pH值范圍寬：（1）pH＞8時(shí)，許多C18硅
2016
11-26

凝膠滲透色譜儀主要特點(diǎn)
凝膠滲透色譜儀主要特點(diǎn)：1.整體控溫和其他品牌的常溫GPC系統(tǒng)不同，EcoSEC不僅僅對(duì)色譜柱進(jìn)行溫度控制，而是將高溫GPC的溫控設(shè)計(jì)應(yīng)用在常溫GPC儀器上，對(duì)系統(tǒng)內(nèi)的各個(gè)部件，包括輸液泵、色譜柱以及檢測(cè)器，整體進(jìn)行控溫。這樣的設(shè)計(jì)使得溶劑在進(jìn)入輸液泵之前就達(dá)到恒定的溫度，可得到更高的輸液穩(wěn)定性，減少由于溶劑體積隨溫度變化而產(chǎn)生的對(duì)檢測(cè)信號(hào)的影響，從而可以獲得更穩(wěn)定的示差（RI）基線，得到更穩(wěn)定的分析結(jié)果。2.雙流路系統(tǒng)GPC儀器中配備的示差（RI）檢測(cè)器，是以檢測(cè)器中樣品池（samplecel
2016
10-14

影響親和色譜柱的因素有哪些？
影響親和色譜柱的因素有：1)上樣體積若目標(biāo)產(chǎn)物與配基的結(jié)合作用較強(qiáng)，上樣體積對(duì)親和色譜效果影響較小。若二者間結(jié)合力較弱，樣品濃度要高一些，上樣量不要超過色譜柱載量的5%~10%。（這個(gè)載量是什么意思，是指柱子所能吸附的zui大量嗎。。求大神解釋T^T）2)柱長(zhǎng)親和柱的長(zhǎng)度需要根據(jù)親和介質(zhì)的性質(zhì)確定。如果親和介質(zhì)的載量（同上求解釋T^T）高，與目標(biāo)產(chǎn)物（目標(biāo)物）的作用力強(qiáng)，可以選擇較短的珠子（柱子）；相反，則應(yīng)該增加柱子的長(zhǎng)度，保證目標(biāo)產(chǎn)物與親和介質(zhì)有充分的作用時(shí)間。3)流速親和吸附時(shí)目標(biāo)產(chǎn)物與配
2016
07-28

疏水色譜柱柱壓高原因與解決方法
疏水色譜柱柱壓高原因與解決方法：疏水色譜柱柱壓過高是HPLC柱用戶zui常碰到的問題。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的問題，您可按下面步驟檢查問題的起因：a、拆去保護(hù)柱，看柱壓是否還高，否則是保護(hù)柱的問題，若柱壓仍高，再檢查b、把色譜柱從儀器上取下，看壓力是否下降，否則是管路堵塞，需清洗，若壓力下降，再檢查c、將柱子的進(jìn)出口反過來接在儀器上，用10倍柱體積的流動(dòng)相沖洗柱子，(此時(shí)不要連接檢測(cè)器，以防固體顆粒進(jìn)入流動(dòng)性)。這時(shí)，如果柱壓仍不下降，再檢查d、更換柱子入口篩板，若柱壓下降，說明
2016
06-27

如何延長(zhǎng)疏水色譜柱的使用壽命呢？
1.使用”保護(hù)柱”，能夠延長(zhǎng)疏水色譜柱的使用壽命。簡(jiǎn)單的說，”保護(hù)柱”即是很短的色譜柱，填裝和所使用疏水色譜柱相同的填料。正確使用裝在疏水色譜柱前面的”保護(hù)柱”，可以阻攔一些容易損壞疏水色譜柱的物質(zhì)。而達(dá)到延長(zhǎng)柱子壽命的效果。如果使用”保護(hù)柱”不當(dāng)。會(huì)造成反效果。因?yàn)樵诒Ｗo(hù)柱使用過程中。如污染達(dá)到一定程度而沒有及時(shí)更換，累積的雜物很可能會(huì)沖入色譜柱中，反而會(huì)造成色譜柱損壞。因此。使用”保護(hù)柱”時(shí)，zui重要的是要知道什幺時(shí)候該換保護(hù)柱。該換的時(shí)候就必須要立即更換。2.選擇高品質(zhì)的柱子，并注意使用
2016
06-15

高溫凝膠滲透色譜儀性能優(yōu)勢(shì)
東曹高溫凝膠滲透色譜儀系統(tǒng)引入了EcoSECGPC系統(tǒng)現(xiàn)有的成熟設(shè)計(jì)和技術(shù)：雙泵系統(tǒng)、雙流路RI檢測(cè)器、大容量柱溫箱、整體溫控、自動(dòng)進(jìn)樣器、樣品溶解制備裝置、安全保護(hù)措施、以及一體化設(shè)計(jì)，均由直觀的軟件進(jìn)行控制和管理，從而實(shí)現(xiàn)其性能。東曹高溫凝膠滲透色譜儀性能優(yōu)勢(shì):1、覆蓋超高溫領(lǐng)域（220℃）zui高溫度可達(dá)到220℃的聚合物分析的系統(tǒng)。不僅可以分析PE、PP，還可分析溶解溫度更高的PPS等樣品。2、優(yōu)異的基線穩(wěn)定性雙通道/雙流路設(shè)計(jì)的示差折光（RI）檢測(cè)器，通過對(duì)光學(xué)組件進(jìn)行*的溫度控制，大
2016
05-31

液相色譜柱的日常維護(hù)
液相色譜柱的日常維護(hù)：(1)每次開機(jī)時(shí)，流速和柱壓要逐漸增加，突然迅速增加，會(huì)使柱床受到?jīng)_擊，引起紊亂，產(chǎn)生空隙(2)在進(jìn)樣前使色譜系統(tǒng)充分平衡，是否平衡可由基線加以判斷(3)在進(jìn)樣前，檢查色譜系統(tǒng)的各個(gè)接頭，通常由此能發(fā)現(xiàn)是否有漏液現(xiàn)象。如有漏液，空氣會(huì)從漏縫進(jìn)入系統(tǒng)引起基線漂移，影響峰高和峰面積的重復(fù)性(4)不要把柱接頭上得太緊，否則易損壞接頭螺紋，引起滲漏(5)不要把柱子放在有氣流的地方或直接放到陽(yáng)光下，氣流和陽(yáng)光都會(huì)使柱子產(chǎn)生溫度梯度造成基線漂移；如果懷疑基線漂移是由溫度梯度引起的，可以
2016
05-30

TSKgel色譜柱在單抗藥物研發(fā)中的應(yīng)用實(shí)例
與傳統(tǒng)小分子藥不同，單抗類蛋白藥是非均一性的結(jié)構(gòu)復(fù)雜的大分子，因此使這類原研藥或仿制藥的研發(fā)與質(zhì)控工作難度增大。通過液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（LC/MS），結(jié)合蛋白分子量的測(cè)定、異構(gòu)體、氨基酸修飾、糖基化修飾以及聚集情況分析等多種檢測(cè)手段，可對(duì)單抗類藥物進(jìn)行全面的結(jié)構(gòu)表征。利用尺寸排阻色譜法（SEC）的分子空間結(jié)構(gòu)不同的原理可對(duì)抗體的多聚體、抗體片段以及PEG蛋白等進(jìn)行有效分析。在該文獻(xiàn)中，對(duì)原研和仿制藥樣品的非均一性分析（抗體聚集情況分析）時(shí)使用了TSKgelG3000SL色譜柱。硼酸鹽親和色譜
2016
05-27

如何保證良好的柱性能與柱壽命
◆認(rèn)證閱讀色譜柱使用說明書；◆使用填充良好的色譜柱；◆盡量減少壓力波動(dòng)，避免機(jī)械及熱沖擊；◆使用保護(hù)柱及在線過濾器；◆經(jīng)常以強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱；◆充分過濾樣品及流動(dòng)相，盡量避免雜質(zhì)微粒與強(qiáng)保留成分；◆用穩(wěn)定的固定相（C18zui穩(wěn)定）；◆在中等PH值操作（6~8），用有機(jī)緩沖溶液；◆色譜柱使用溫度小于40℃；◆硅膠基質(zhì)的的色譜柱，應(yīng)保持流動(dòng)相的PH值范圍在3.0~8.0；◆在水流動(dòng)相與緩沖溶液中加200ppm的疊氮鈉；◆流動(dòng)相中含有緩沖溶液，應(yīng)注意應(yīng)95∶5的水及有機(jī)溶劑過渡，有機(jī)溶劑不能低于5%
2016
05-25

與傳統(tǒng)HPLC相比，UPLC具有哪些優(yōu)勢(shì)？
與傳統(tǒng)的液相色譜（HPLC）相比，UPLC具有以下優(yōu)勢(shì)：1.高分離度（ultraresolution）根據(jù)液相色譜分離的解析度方程，解析度正比于柱效能的平方根而根據(jù)范迪姆特（VanDeemter）色譜理論，柱效反比于系統(tǒng)固定相粒度大小。UPLC系統(tǒng)運(yùn)用的固定相粒度能達(dá)到1.7μm，根據(jù)上述方程，該系統(tǒng)達(dá)到的效能將比5μm粒度系統(tǒng)高70%，而比3.5μm高40%。2.高速度（ultraspeed）在保證得到同樣質(zhì)量數(shù)據(jù)的前提下，UPLC能提供單位時(shí)間內(nèi)更多的信息量。在不影響解析度的的情況下，小粒度
2016
05-23

探討正相色譜柱與反相色譜柱的安裝保存和檢測(cè)
色譜柱的安裝：1、首先應(yīng)確認(rèn)柱和儀器的接頭以及管路是否匹配。為減少死體積，進(jìn)樣閥、柱子、檢測(cè)器之間的連接管路內(nèi)徑盡可能使用內(nèi)徑較小的管線，同時(shí)控制進(jìn)樣器、色譜柱和檢測(cè)器之間連接管線的長(zhǎng)度。安裝色譜柱之前，確認(rèn)流路系統(tǒng)中的溶劑是否正常。對(duì)分析較復(fù)雜的樣品建議安裝保護(hù)柱。2、為了使色譜柱與儀器系統(tǒng)達(dá)*的連接效果，應(yīng)盡量使用與色譜柱接口相匹配的螺帽和錐形接頭，如原來的接頭長(zhǎng)期匹配其他類型的色譜柱，建議在連接新色譜柱前應(yīng)檢查匹配情況，避免造成色譜柱的損壞或因色譜柱不匹配造成的漏液。3、使用PEEK材料的
2016
05-18

離子色譜儀常見故障解析
在環(huán)境監(jiān)測(cè)分析室中，離子色譜儀承擔(dān)著降水、地下水和清潔地表水中陰離子的測(cè)定。離子色譜儀在投入運(yùn)行的幾年中，儀器運(yùn)行良好，但也出現(xiàn)了一些問題，如系統(tǒng)壓力升高、壓力降低或無壓力、色譜峰的保留時(shí)間延長(zhǎng)或縮短等。為了確保儀器的正常運(yùn)行，應(yīng)進(jìn)行仔細(xì)排查，確定故障原因，及時(shí)排除故障使得儀器能夠正常運(yùn)行。1、電導(dǎo)檢測(cè)器常見故障電導(dǎo)檢測(cè)器常見故障是檢測(cè)池被污染。故障原因:污染物主要來源于沒有經(jīng)過適當(dāng)前處理的樣品,如濃度過高、復(fù)雜的樣品基體等。故障現(xiàn)象:基線噪聲變大,靈敏度降低。處理方法:(1)用3mol/LHN
2016
05-11

TSKgel丁基疏水色譜柱特點(diǎn)介紹
疏水色譜柱采用具有適度疏水性的填料，以含鹽水溶液作流動(dòng)相，借助于溶質(zhì)與固定相間的疏水相互作用實(shí)現(xiàn)分離的色譜方法。其保留機(jī)理與反相色譜基本相同，所不同的是其固定相的疏水性不如反相固定相強(qiáng)，多為低密度分布的甲基、乙基、丙基、丁基和苯基等。疏水作用色譜主要用于蛋白質(zhì)的分離與純化。TSKgelButyle-NPR丁基疏水色譜柱是一款以粒徑為2.5um的，丁基鍵合無孔型親水性聚合物基質(zhì)為填充劑的疏水作用色譜柱。適用于蛋白質(zhì)、單抗、酶等生物大分子的分離分析。由于和藥物安全以及生產(chǎn)成本息息相關(guān)，對(duì)于重組蛋白藥
2016
05-09

凝膠色譜法的凝膠種類及性質(zhì)
（一）聚丙烯酰胺凝膠聚丙烯酰胺凝膠是一種人工合成凝膠，是以丙烯酰胺為單位，由甲叉雙丙烯酰胺交聯(lián)成的，經(jīng)干燥粉碎或加工成形制成粒狀，控制交聯(lián)劑的用量可制成各種型號(hào)的凝膠。交聯(lián)劑越多，孔隙越小。聚丙烯酰胺凝膠的商品為生物膠－P（Bio-GelP），由日本tosoh的TSKGEL的pw系列，適合蛋白和多糖的純化。即丙烯酰胺和少量交聯(lián)劑甲叉雙丙烯酰胺，在催化劑過硫酸銨作用下聚合形成凝膠。聚丙烯酰胺（PAM，polyacrylamide）聚丙烯酰胺簡(jiǎn)稱PAM，分子量100～500萬。聚丙烯酰胺主要有兩種商
2016
05-04

反相色譜柱的平衡方法
反相色譜柱的平衡方法聚合物基質(zhì)的反相色譜柱采用了聚甲基丙烯酸酯聚合物，制備而成具有不同孔徑和粒徑大小的各種規(guī)格的產(chǎn)品。TSKgel聚合物基質(zhì)反相色譜柱適用于較寬的pH范圍，即使在高pH下也具有很好的重復(fù)性。這類色譜柱在pH2-12下表現(xiàn)出極其穩(wěn)定的化學(xué)特性。因此，在硅膠基質(zhì)色譜柱適用受限的堿性pH下仍然可以使用。反相色譜柱載經(jīng)過出廠測(cè)試后是保存在乙腈-水中的；由于色譜柱在儲(chǔ)存或運(yùn)輸過程中固定相可能會(huì)干擾，這會(huì)引起鍵合相的空間結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，因此，新的色譜柱在用來分析樣品之前，請(qǐng)一定要充分平衡色譜柱
2016
05-04

陰離子交換色譜柱的清洗方法
對(duì)于陰離子色譜，通用有三種清洗方式，分別用于清洗酸溶性、堿溶性或有機(jī)污染物，在清洗過程中必須要確保嚴(yán)格按照清洗過程進(jìn)行，否則會(huì)引起色譜柱的局部高壓而損壞色譜柱。對(duì)于有機(jī)溶劑清洗色譜柱，需要逐步減少有機(jī)溶劑的量以避免由于混合的流動(dòng)相黏度的變化。（一）選擇合適的清洗溶劑1對(duì)低價(jià)親水污染物：用10倍的淋洗液；2對(duì)高價(jià)親水污染物：用1~3mol/l的鹽酸做淋洗液；3對(duì)金屬污染物：會(huì)引起色譜峰不對(duì)稱性，可采用絡(luò)合劑酸類，如0.2mol/l草酸；4有機(jī)污染物：有機(jī)污染物會(huì)引起色譜柱效降低，可以采用兼容的有機(jī)
2016
04-25

反相色譜柱的使用與維護(hù)
反相柱填料主要以硅膠為基質(zhì)，在其表面鍵合非極性的十八烷基官能團(tuán)（ODS）稱為C18柱，其它常用的反相柱還有C8,C4,C2和苯基柱等。另外還有離子交換柱，GPC柱，聚合物填料柱等。一、反相色譜柱的選擇1.柱子的PH值使用范圍反相柱優(yōu)點(diǎn)是固定相穩(wěn)定，應(yīng)用廣泛，可使用多種溶劑。但硅膠為基質(zhì)的填料，使用時(shí)一定要注意流動(dòng)相的PH范圍。一般的C18柱PH值范圍都在2-8，流動(dòng)相的PH值小于2時(shí)，會(huì)導(dǎo)致鍵合相的水解；當(dāng)PH值大于7時(shí)硅膠易溶解；經(jīng)常使用緩沖液固定相要降解。一旦發(fā)生上述情況，色譜柱人口處會(huì)塌陷

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