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簡(jiǎn)述腺病毒包裝2013/11/20: 腺病毒概述腺病毒（Adenovirus，AdV）是一種無(wú)包膜的線性雙鏈DNA病毒，基因組長(zhǎng)約35000bp，理論上可編碼22~40個(gè)基因，兩端各有長(zhǎng)約100~150bp的末端反向重復(fù)序列（ITR），在其左端ITR3，端為長(zhǎng)約300bp的包裝信號(hào)（Ψ）。病毒顆粒直徑約80~110nm，病毒衣殼有252個(gè)殼粒，呈規(guī)則的正二十面體面體結(jié)構(gòu)，其中包括240個(gè)六聯(lián)體和12個(gè)位于正二十面體頂部的五聯(lián)體構(gòu)成。腺病毒是一種非整合型雙鏈DNA病毒，在自然界中廣泛分布。盡管一些類型的腺病毒會(huì)引起人胃腸道、呼吸系統(tǒng)或

慢病毒包裝概述及步驟2013/11/19: 慢病毒包裝概述目前慢病毒也被廣泛地應(yīng)用于表達(dá)RNAi的研究中。由于有些類型細(xì)胞脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染效果差，轉(zhuǎn)移到細(xì)胞內(nèi)的siRNA半衰期短，體外合成siRNA對(duì)基因表達(dá)的抑制作用通常是短暫的，因而使其應(yīng)用受到較大的限制。采用事先在體外構(gòu)建能夠表達(dá)siRNA的載體，然后轉(zhuǎn)移到細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄siRNA的策略，不但使脂質(zhì)體有效轉(zhuǎn)染的細(xì)胞種類增加，而且對(duì)基因表達(dá)抑制效果也不遜色于體外合成siRNA，在長(zhǎng)期穩(wěn)定表達(dá)載體的細(xì)胞中，甚至可以發(fā)揮長(zhǎng)期阻斷基因表達(dá)的作用。在所構(gòu)建的siRNA表達(dá)載體中，是由RNA聚合酶Ⅲ啟動(dòng)子

淺析慢病毒載體2013/11/18: 慢病毒載體介紹慢病毒載體（Lentiviralvector,LVs）是在HIV-1病毒基礎(chǔ)上改造而成的病毒載體系統(tǒng)，它能的將目的基因（或RNAi）導(dǎo)入動(dòng)物和人的原代細(xì)胞或細(xì)胞系。慢病毒載體基因組是正鏈RNA，其基因組進(jìn)入細(xì)胞后，在細(xì)胞漿中被其自身攜帶的反轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)為DNA，形成DNA整合前復(fù)合體，進(jìn)入細(xì)胞核后，DNA整合到細(xì)胞基因組中。整合后的DNA轉(zhuǎn)錄mRNA，回到細(xì)胞漿中，表達(dá)目的蛋白；或產(chǎn)生RNAi干擾。慢病毒載體介導(dǎo)的基因表達(dá)或RNAi干擾作用持續(xù)且穩(wěn)定，原因是目的基因整合到宿主細(xì)胞基因

關(guān)于蛋白質(zhì)提取與純化2013/11/16: 一、蛋白質(zhì)的提取微生物生產(chǎn)的蛋白質(zhì)或酶有來(lái)自胞內(nèi)、來(lái)自細(xì)胞周質(zhì)或被分泌到培養(yǎng)介質(zhì)中。對(duì)胞外酶而言，當(dāng)zui后產(chǎn)品是用于工業(yè)用途而不是需要太高純度時(shí)，純化工藝比較簡(jiǎn)單。許多酶是以更為復(fù)雜的胞內(nèi)混合物的形式存在，這對(duì)蛋白質(zhì)純化研究人員提出更多的挑戰(zhàn)。正常來(lái)說(shuō)，大部分蛋白質(zhì)都可溶于水、稀鹽、稀酸或堿溶液，少數(shù)與脂類結(jié)合的蛋白質(zhì)則溶于乙醇、丙酮、丁醇等有機(jī)溶劑中，因些，可采用不同溶劑提取分離和純化蛋白質(zhì)及酶。（1）水溶液提取法：稀鹽和緩沖系統(tǒng)的水溶液對(duì)蛋白質(zhì)穩(wěn)定性好、溶解度大、是提取蛋白質(zhì)zui常用的溶

淺談基因的亞克隆2013/11/15: 亞克?。杭?xì)胞克隆中，對(duì)培養(yǎng)的細(xì)胞來(lái)說(shuō)，從原有的克隆中，再篩選出具有某種特性的細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，就是subclone，分為細(xì)胞克隆和分子克隆。一、亞克隆實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、掌握細(xì)菌基因組提取的方法和原理。2、掌握限制性核酸內(nèi)切酶處理基因組及其結(jié)果分析。3、掌握基因片段回收的方法。二、亞克隆實(shí)驗(yàn)原理細(xì)菌基因組的提取：通過(guò)堿法或者酶法裂解細(xì)菌之后，可以將胞內(nèi)的核酸和蛋白質(zhì)全釋放出來(lái)。DNA溶于1mol/L的NaCl中，不溶于0.14mol/L的NaCl，而RNA溶于0.14mol/L的NaCl不溶于1mol/L的

熒光定量PCR技術(shù)簡(jiǎn)介2013/11/14: 定量PCR簡(jiǎn)介熒光定量PCR技術(shù)是普通PCR技術(shù)的改良和發(fā)展，它提高了普通PCR技術(shù)的特異性和準(zhǔn)確性，能做到實(shí)時(shí)監(jiān)控和準(zhǔn)確定量，廣泛應(yīng)用于基礎(chǔ)研究、臨床檢驗(yàn)、海關(guān)檢疫等各個(gè)領(lǐng)域。定量PCR服務(wù)內(nèi)容1、合成設(shè)計(jì)合成各種標(biāo)記探針并可根據(jù)客戶要求負(fù)責(zé)探針的調(diào)試（詳見(jiàn)合成）2、檢測(cè)mRNA表達(dá)檢測(cè)及mRNA表達(dá)譜芯片后期驗(yàn)證MicroRNA檢測(cè)及MicroRNA表達(dá)譜芯片后期驗(yàn)證SNP檢測(cè)基因copy數(shù)檢測(cè)病原微生物樣品檢測(cè)3、研發(fā)接受采用熒光定量PCR的檢測(cè)方法針對(duì)各種檢測(cè)目標(biāo)的合作研發(fā)和委托研發(fā)。定

簡(jiǎn)述離心機(jī)的相關(guān)知識(shí)2013/11/13: 一、離心機(jī)的概念離心機(jī)就是一個(gè)產(chǎn)生離心力的機(jī)器，離心力與轉(zhuǎn)子半徑、轉(zhuǎn)速及樣品質(zhì)量有關(guān)：即F=Rmω2（F：離心力：R：半徑：m：樣品質(zhì)量：to：轉(zhuǎn)速），離心力是衡量離心機(jī)zui重要的參數(shù)之一，也是離心機(jī)檔次的區(qū)別標(biāo)準(zhǔn)之一，離心機(jī)在出廠的時(shí)候都會(huì)給出該離心機(jī)的zui大離心力。離心機(jī)在高速旋轉(zhuǎn)的過(guò)程中，由離心力所導(dǎo)致的運(yùn)動(dòng)使懸浮于液體中的固體物質(zhì)形成沉淀，也就是懸浮體液中質(zhì)量或體積較大的物體向轉(zhuǎn)頭半徑zui大的方向移動(dòng)，而質(zhì)量或體積較小的部分沉積在轉(zhuǎn)頭半徑較近的地方。我們都知道，轉(zhuǎn)子的半徑和樣品質(zhì)量

淺析質(zhì)粒與載體2013/11/11: 一、質(zhì)粒的組成要素a復(fù)制起始位點(diǎn)Ori即控制復(fù)制起始的位點(diǎn)。原核生物DNA分子中只有一個(gè)復(fù)制起始點(diǎn)。而真核生物DNA分子有多個(gè)復(fù)制起始位點(diǎn)。b抗生素抗性基因可以便于加以檢測(cè)，如Amp+,Kan+c多克隆位點(diǎn)MCS克隆攜帶外源基因段dP/E啟動(dòng)子/增強(qiáng)子eTerms終止信號(hào)f加poly（A）信號(hào)可以起到穩(wěn)定mRNA作用二、質(zhì)粒圖譜如何讀取*步：首先看Ori的位置，了解質(zhì)粒的類型（原核/真核/穿梭質(zhì)粒）第二步：再看篩選標(biāo)記，如抗性，決定使用什么篩選標(biāo)記。（1）Ampr水解β－內(nèi)酰胺環(huán)，解除氨芐的毒性

淺談質(zhì)粒載體的構(gòu)建及類型2013/11/10: 一、質(zhì)粒載體必須具備的基本條件現(xiàn)行通用的基因克隆載體，絕大多數(shù)就是以質(zhì)粒為基礎(chǔ)改建而成的。一般說(shuō)來(lái)，一種理想的用作克隆載體的質(zhì)粒必須滿足如下幾個(gè)方面的條件：（1）具有復(fù)制起點(diǎn)（2）具有抗菌素抗生基因（3）具若干限制酶單一識(shí)別位點(diǎn)（4）具有較小的分子量和較高的拷貝數(shù)二、質(zhì)粒載體的選擇記號(hào)在基因克隆中采用的質(zhì)粒載體的選擇記號(hào)，包括有新陳代謝特性、對(duì)大腸桿菌素E1的免疫性，以及抗菌素抗性等多種。但絕大多靈敏的質(zhì)粒載體都是使用抗菌素抗性記號(hào)。基因克隆實(shí)驗(yàn)中常用的幾種抗菌素的作用方式及其抗性機(jī)理列于。三、

TA克隆（TA-cloning）2013/11/09: TA克?。═A-cloning）是利用Taq聚合酶的特性將PCR產(chǎn)物克隆的方法，又稱為T(mén)-載體克隆。TaqDNA聚合酶在四種dNTP存在下可以向非特性的PCR產(chǎn)物的3’末端特異性的添加一個(gè)A。這也成為T(mén)aq酶催化的PCR產(chǎn)物不能的連接至平末端載體的主要原因。相反地，如果此時(shí)有一個(gè)線性的帶有粘性T末端的載體DNA（T載體），那么帶有A粘性末端的PCR產(chǎn)物就可以的插入載體DNA中。這種方法被稱為T(mén)A克隆。實(shí)驗(yàn)材料：Invitrogen公司提供的TOPO快速TA克隆試劑盒。我們采用pCR®II-TOP

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