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上海基屹生物科技有限公司
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簡述腺病毒包裝2013/11/20
腺病毒概述腺病毒（Adenovirus，AdV）是一種無包膜的線性雙鏈DNA病毒，基因組長約35000bp，理論上可編碼22~40個基因，兩端各有長約100~150bp的末端反向重復序列（ITR），在其左端ITR3，端為長約300bp的包裝信號（Ψ）。病毒顆粒直徑約80~110nm，病毒衣殼有252個殼粒，呈規(guī)則的正二十面體面體結(jié)構(gòu)，其中包括240個六聯(lián)體和12個位于正二十面體頂部的五聯(lián)體構(gòu)成。腺病毒是一種非整合型雙鏈DNA病毒，在自然界中廣泛分布。盡管一些類型的腺病毒會引起人胃腸道、呼吸系統(tǒng)或
慢病毒包裝概述及步驟2013/11/19
慢病毒包裝概述目前慢病毒也被廣泛地應用于表達RNAi的研究中。由于有些類型細胞脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染效果差，轉(zhuǎn)移到細胞內(nèi)的siRNA半衰期短，體外合成siRNA對基因表達的抑制作用通常是短暫的，因而使其應用受到較大的限制。采用事先在體外構(gòu)建能夠表達siRNA的載體，然后轉(zhuǎn)移到細胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄siRNA的策略，不但使脂質(zhì)體有效轉(zhuǎn)染的細胞種類增加，而且對基因表達抑制效果也不遜色于體外合成siRNA，在長期穩(wěn)定表達載體的細胞中，甚至可以發(fā)揮長期阻斷基因表達的作用。在所構(gòu)建的siRNA表達載體中，是由RNA聚合酶Ⅲ啟動子
淺析慢病毒載體2013/11/18
慢病毒載體介紹慢病毒載體（Lentiviralvector,LVs）是在HIV-1病毒基礎上改造而成的病毒載體系統(tǒng)，它能的將目的基因（或RNAi）導入動物和人的原代細胞或細胞系。慢病毒載體基因組是正鏈RNA，其基因組進入細胞后，在細胞漿中被其自身攜帶的反轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)為DNA，形成DNA整合前復合體，進入細胞核后，DNA整合到細胞基因組中。整合后的DNA轉(zhuǎn)錄mRNA，回到細胞漿中，表達目的蛋白；或產(chǎn)生RNAi干擾。慢病毒載體介導的基因表達或RNAi干擾作用持續(xù)且穩(wěn)定，原因是目的基因整合到宿主細胞基因
關于蛋白質(zhì)提取與純化2013/11/16
一、蛋白質(zhì)的提取微生物生產(chǎn)的蛋白質(zhì)或酶有來自胞內(nèi)、來自細胞周質(zhì)或被分泌到培養(yǎng)介質(zhì)中。對胞外酶而言，當zui后產(chǎn)品是用于工業(yè)用途而不是需要太高純度時，純化工藝比較簡單。許多酶是以更為復雜的胞內(nèi)混合物的形式存在，這對蛋白質(zhì)純化研究人員提出更多的挑戰(zhàn)。正常來說，大部分蛋白質(zhì)都可溶于水、稀鹽、稀酸或堿溶液，少數(shù)與脂類結(jié)合的蛋白質(zhì)則溶于乙醇、丙酮、丁醇等有機溶劑中，因些，可采用不同溶劑提取分離和純化蛋白質(zhì)及酶。（1）水溶液提取法：稀鹽和緩沖系統(tǒng)的水溶液對蛋白質(zhì)穩(wěn)定性好、溶解度大、是提取蛋白質(zhì)zui常用的溶
淺談基因的亞克隆2013/11/15
亞克?。杭毎寺≈?，對培養(yǎng)的細胞來說，從原有的克隆中，再篩選出具有某種特性的細胞進行培養(yǎng)，就是subclone，分為細胞克隆和分子克隆。一、亞克隆實驗目的1、掌握細菌基因組提取的方法和原理。2、掌握限制性核酸內(nèi)切酶處理基因組及其結(jié)果分析。3、掌握基因片段回收的方法。二、亞克隆實驗原理細菌基因組的提?。和ㄟ^堿法或者酶法裂解細菌之后，可以將胞內(nèi)的核酸和蛋白質(zhì)全釋放出來。DNA溶于1mol/L的NaCl中，不溶于0.14mol/L的NaCl，而RNA溶于0.14mol/L的NaCl不溶于1mol/L的
熒光定量PCR技術(shù)簡介2013/11/14
定量PCR簡介熒光定量PCR技術(shù)是普通PCR技術(shù)的改良和發(fā)展，它提高了普通PCR技術(shù)的特異性和準確性，能做到實時監(jiān)控和準確定量，廣泛應用于基礎研究、臨床檢驗、海關檢疫等各個領域。定量PCR服務內(nèi)容1、合成設計合成各種標記探針并可根據(jù)客戶要求負責探針的調(diào)試（詳見合成）2、檢測mRNA表達檢測及mRNA表達譜芯片后期驗證MicroRNA檢測及MicroRNA表達譜芯片后期驗證SNP檢測基因copy數(shù)檢測病原微生物樣品檢測3、研發(fā)接受采用熒光定量PCR的檢測方法針對各種檢測目標的合作研發(fā)和委托研發(fā)。定
簡述離心機的相關知識2013/11/13
一、離心機的概念離心機就是一個產(chǎn)生離心力的機器，離心力與轉(zhuǎn)子半徑、轉(zhuǎn)速及樣品質(zhì)量有關：即F=Rmω2（F：離心力：R：半徑：m：樣品質(zhì)量：to：轉(zhuǎn)速），離心力是衡量離心機zui重要的參數(shù)之一，也是離心機檔次的區(qū)別標準之一，離心機在出廠的時候都會給出該離心機的zui大離心力。離心機在高速旋轉(zhuǎn)的過程中，由離心力所導致的運動使懸浮于液體中的固體物質(zhì)形成沉淀，也就是懸浮體液中質(zhì)量或體積較大的物體向轉(zhuǎn)頭半徑zui大的方向移動，而質(zhì)量或體積較小的部分沉積在轉(zhuǎn)頭半徑較近的地方。我們都知道，轉(zhuǎn)子的半徑和樣品質(zhì)量
淺析質(zhì)粒與載體2013/11/11
一、質(zhì)粒的組成要素a復制起始位點Ori即控制復制起始的位點。原核生物DNA分子中只有一個復制起始點。而真核生物DNA分子有多個復制起始位點。b抗生素抗性基因可以便于加以檢測，如Amp+,Kan+c多克隆位點MCS克隆攜帶外源基因段dP/E啟動子/增強子eTerms終止信號f加poly（A）信號可以起到穩(wěn)定mRNA作用二、質(zhì)粒圖譜如何讀取*步：首先看Ori的位置，了解質(zhì)粒的類型（原核/真核/穿梭質(zhì)粒）第二步：再看篩選標記，如抗性，決定使用什么篩選標記。（1）Ampr水解β－內(nèi)酰胺環(huán)，解除氨芐的毒性
淺談質(zhì)粒載體的構(gòu)建及類型2013/11/10
一、質(zhì)粒載體必須具備的基本條件現(xiàn)行通用的基因克隆載體，絕大多數(shù)就是以質(zhì)粒為基礎改建而成的。一般說來，一種理想的用作克隆載體的質(zhì)粒必須滿足如下幾個方面的條件：（1）具有復制起點（2）具有抗菌素抗生基因（3）具若干限制酶單一識別位點（4）具有較小的分子量和較高的拷貝數(shù)二、質(zhì)粒載體的選擇記號在基因克隆中采用的質(zhì)粒載體的選擇記號，包括有新陳代謝特性、對大腸桿菌素E1的免疫性，以及抗菌素抗性等多種。但絕大多靈敏的質(zhì)粒載體都是使用抗菌素抗性記號。基因克隆實驗中常用的幾種抗菌素的作用方式及其抗性機理列于。三、
TA克?。═A-cloning）2013/11/09
TA克?。═A-cloning）是利用Taq聚合酶的特性將PCR產(chǎn)物克隆的方法，又稱為T-載體克隆。TaqDNA聚合酶在四種dNTP存在下可以向非特性的PCR產(chǎn)物的3’末端特異性的添加一個A。這也成為Taq酶催化的PCR產(chǎn)物不能的連接至平末端載體的主要原因。相反地，如果此時有一個線性的帶有粘性T末端的載體DNA（T載體），那么帶有A粘性末端的PCR產(chǎn)物就可以的插入載體DNA中。這種方法被稱為TA克隆。實驗材料：Invitrogen公司提供的TOPO快速TA克隆試劑盒。我們采用pCR®II-TOP
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