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2018
03-05

轉(zhuǎn)錄組常見(jiàn)問(wèn)題與解答
轉(zhuǎn)錄組是某個(gè)物種或者特定細(xì)胞類型產(chǎn)生的所有轉(zhuǎn)錄本的集合，轉(zhuǎn)錄組測(cè)序(RNA-seq)是zui近發(fā)展起來(lái)的利用深度測(cè)序技術(shù)進(jìn)行轉(zhuǎn)錄分析的方法,可以對(duì)全轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行系統(tǒng)的研究。RocheGSFLXTitanium、IlluminaSolexaGAIIx和ABSOLID4均可以對(duì)轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行測(cè)序，RocheGSFLXTitanium與IlluminaSolexaGAIIx和ABSOLID4相比，擁有更長(zhǎng)的讀長(zhǎng)和較小的數(shù)據(jù)量，適用于表達(dá)量較高基因的RNA全長(zhǎng)測(cè)序。但是對(duì)低表達(dá)豐度的基因，可能需要多次測(cè)序才能
2018
03-05

三維基因組Hi-C技術(shù)解析
Hi-C(High-throughchromosomeconformationcapture)是以整個(gè)細(xì)胞核為研究對(duì)象，利用高通量測(cè)序技術(shù)，結(jié)合生物信息分析方法，研究全基因組范圍內(nèi)整個(gè)染色質(zhì)DNA在空間位置上的關(guān)系，獲得高分辨率的染色質(zhì)調(diào)控元件相互作用圖譜。Hi-C可以與RNA-Seq、ChIP-Seq等數(shù)據(jù)進(jìn)行聯(lián)合分析，從基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)和表觀遺傳網(wǎng)絡(luò)來(lái)闡述生物體性狀形成的相關(guān)機(jī)制。一、技術(shù)優(yōu)勢(shì)1、無(wú)需專門構(gòu)建群體，單個(gè)樣本實(shí)現(xiàn)輔助基因組組裝；2、率高，人類基因組錨定染色體率為98%，排序和定；3
2018
03-02

ChIP實(shí)驗(yàn)技術(shù)經(jīng)驗(yàn)分享
染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)（ChromatinImmunoprecipitation，簡(jiǎn)稱ChIP）是研究活體內(nèi)蛋白質(zhì)與DNA相互作用的一種技術(shù)。它利用抗原抗體反應(yīng)的特異性，可以真實(shí)地反映體內(nèi)蛋白因子與基因組DNA結(jié)合的狀況。隨著對(duì)基因功能研究的不斷深入，這項(xiàng)技術(shù)正越來(lái)越多的被應(yīng)用于科研的各個(gè)領(lǐng)域。ChIP的原理把生理狀態(tài)下的細(xì)胞內(nèi)的DNA與蛋白質(zhì)交聯(lián)在一起，通過(guò)超聲或酶處理將染色質(zhì)切為小片段后，利用抗原抗體的特異性識(shí)別反應(yīng)，將與目的蛋白相結(jié)合的DNA片段沉淀下來(lái)，然后可進(jìn)行后續(xù)的DNA序列測(cè)序鑒定等。
2018
03-02

WB檢測(cè)全攻略
WesternBlot,對(duì)于任何一個(gè)科研君都不陌生，但是，為甚么別人的實(shí)驗(yàn)時(shí)間短、跑膠快、成像顯影辣么好看活生生的羨慕，嫉妒，hen(哼)，足足被甩了幾篇SCI?內(nèi)情你知否？除了實(shí)驗(yàn)精細(xì)化操作，選擇合適的實(shí)驗(yàn)試劑，還有呢？當(dāng)然離不開(kāi)你的優(yōu)化設(shè)計(jì)你對(duì)關(guān)鍵步驟的步步為營(yíng)。本文旨在通過(guò)提供建議，幫助您在短時(shí)間、以更少的終端用戶優(yōu)化調(diào)整得到預(yù)期結(jié)果，提升免疫印跡效果。PS：科研是不斷進(jìn)步的過(guò)程，有不當(dāng)之處，望指正。何為蛋白印跡（WB）蛋白印跡也稱作免疫印跡，是一種被廣泛應(yīng)用并得到*的技術(shù)，用于檢測(cè)細(xì)胞或
2018
03-02

細(xì)胞類代謝組學(xué)樣本收集步驟
適用細(xì)胞類型：哺乳動(dòng)物細(xì)胞（CHO、NS0、CD-hybridoma細(xì)胞系）樣品量要求：1*107cell/sample，提供2份樣本。樣本收集步驟：1）使用細(xì)胞計(jì)數(shù)器測(cè)定細(xì)胞數(shù)量，計(jì)算出所需淬滅緩沖液的量。下圖以細(xì)胞數(shù)量1*107為例；NOTE：①使用50ml圓錐形管一次處理樣本zui大量為8ml，如果樣本量8ml，就分開(kāi)做；②淬滅過(guò)程時(shí)間敏感，兩個(gè)人操作。2）將5倍樣本體積的淬滅緩沖液加入50ml圓錐形管中；3）在低溫恒溫器上預(yù)冷淬滅緩沖液至-40℃（淬滅緩沖液：60%（v/v）甲醇+0.8
2018
03-01

MTT法簡(jiǎn)介及操作步驟
一、MTT是什么MTT是一種粉末狀化學(xué)試劑，全稱為3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide，漢語(yǔ)化學(xué)名為3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴鹽，商品名：噻唑藍(lán)。是一種黃顏色的染料。二、MTT法用來(lái)做什么簡(jiǎn)單地說(shuō)：是一種檢測(cè)細(xì)胞存活和生長(zhǎng)的方法。MTT主要有兩個(gè)用途1．藥物（也包括其他處理方式如放射線照射）對(duì)體外培養(yǎng)的細(xì)胞毒性的測(cè)定；2．細(xì)胞增殖及細(xì)胞活性測(cè)定。三、為何MTT可以用來(lái)做上述工作檢測(cè)
2018
03-01

手性色譜柱的分類和原理
手性色譜柱（ChiralHPLCColumns）是由具有光學(xué)活性的單體，固定在硅膠或其它聚合物上制成手性固定相（ChiralStationaryPhases）。通過(guò)引入手性環(huán)境使對(duì)映異構(gòu)體間呈現(xiàn)物理特征的差異，從而達(dá)到光學(xué)異構(gòu)體拆分的目的。要實(shí)現(xiàn)手性識(shí)別，手性化合物分子與手性固定相之間至少存在三種相互作用。這種相互作用包括氫鍵、偶級(jí)-偶級(jí)作用、π-π作用、靜電作用、疏水作用或空間作用。手性分離效果是多種相互作用共同作用的結(jié)果。這些相互作用通過(guò)影響包埋復(fù)合物的形成，特殊位點(diǎn)與分析物的鍵合等而改變手
2018
02-28

HE染色經(jīng)驗(yàn)總結(jié)
的HE染色切片應(yīng)該具備切片完整、無(wú)皺褶、細(xì)胞核著色清晰呈藍(lán)色、細(xì)胞質(zhì)呈鮮紅色、核仁核膜核內(nèi)染色質(zhì)顆粒清晰，核質(zhì)藍(lán)紅分明、對(duì)比清晰、透明度好等屬性；劣質(zhì)的HE染色切片會(huì)出現(xiàn)切片不完整，染色灰暗，紅藍(lán)對(duì)比不明顯，有甚者染色后的切片鏡下呈云霧狀、組織結(jié)構(gòu)不清楚等狀況，對(duì)于科研黨和病理檢驗(yàn)工作者來(lái)說(shuō)，想要一張好的組織HE染色圖，看似簡(jiǎn)單但也不簡(jiǎn)單。目前，我們收集了一些導(dǎo)致組織切片染色不佳的原因及解決辦法，希望對(duì)大家的科研工作有一定的幫助。1．切片污染：包括染液的污染和組織污染所謂染色的污染，是由于蘇木精
2018
02-28

蛋白質(zhì)保存方法大全
蛋白質(zhì)的保存是一個(gè)比較棘手的問(wèn)題，分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的童鞋們或多或少都會(huì)碰到。有沒(méi)有遇到過(guò)，不同批次純化的蛋白，采用同樣的測(cè)試方法，活性卻不太一樣？有沒(méi)有遇到過(guò)新純化的蛋白，從冰箱拿出融化后，居然沉淀了？蛋白質(zhì)純化后，保存方式都有哪些呢？一、謹(jǐn)記蛋白質(zhì)的保存原則低溫、分裝、濃縮、速凍／速融、添加劑二、保存方法你知多少蛋白質(zhì)的的保存方法的選擇*取決于蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性以及保存后什么時(shí)候再次使用你的蛋白。1、如即提即用的話，可將濃縮蛋白質(zhì)儲(chǔ)存在單一溶液（如PBS），置于聚丙烯管或干凈的玻璃容器中，放在4°
2018
02-28

常見(jiàn)免疫組化難題解答
1、石蠟切片和冰凍切片的比較？（1）要求做冰凍切片的不一定能做石蠟切片，這是今天我向一老師請(qǐng)教得出的結(jié)論。因?yàn)樽魇炃衅瑫r(shí)要高溫烤片，可能會(huì)破壞組織的抗原性，如果組織的抗原性較穩(wěn)定，則可作石蠟切片；但是要求做石蠟切片的，可作冰凍切片。（2）冰凍切片的優(yōu)點(diǎn)是能夠較好的保存組織的抗原免疫活性，做免疫組化時(shí)不需抗原修復(fù)這一步。缺點(diǎn)是細(xì)胞內(nèi)易形成冰晶而破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，可能會(huì)使抗原彌散；切片厚度較石蠟的厚，做的片子沒(méi)石蠟的漂亮。當(dāng)你買一抗時(shí)，目錄上都寫著做什么樣的切片，如果它寫著只能做冰凍，就不能做石蠟，如
2018
02-27

生物制品的質(zhì)量及質(zhì)量管理的基本原理
一、生物制品質(zhì)量的特殊性和重要性一切工業(yè)產(chǎn)品包括藥品的生產(chǎn)，都要求把質(zhì)量放在*，強(qiáng)調(diào)“質(zhì)量是企業(yè)發(fā)展的生命”，這是人們所熟知的基本常識(shí)。生物制品是用于預(yù)防傳染病、臨床治療、急救和診斷的具有生物活性的制品，其質(zhì)量具有自身的特殊性和重要性，必須更加強(qiáng)調(diào)“質(zhì)量*”的原則。這是因?yàn)椋?，所有預(yù)防制品如疫苗都是直接用于大量健康人群，特別是用于大量?jī)和律鷥旱拿庖呓臃N，其質(zhì)量的優(yōu)劣，直接關(guān)系到千百萬(wàn)人的健康和生命安危；第二，所有治療制品如血液制劑、抗毒素、免疫血清或免疫調(diào)節(jié)制劑，都是通過(guò)非胃腸途徑，直接用
2018
02-27

噬菌體平臺(tái)應(yīng)用解析
PartI：天然抗體庫(kù)構(gòu)建、免疫抗體庫(kù)構(gòu)建、多種片段抗體庫(kù)構(gòu)建、抗體人源化1、技術(shù)路線外周血淋巴細(xì)胞/脾細(xì)胞?提取RNA/gDNA?PCR出全套抗體片段（Fab、scFv等）?隨機(jī)重組插入噬菌體外殼蛋白?感染大腸桿菌?抗體片段展示于噬菌體表面?抗原特異性篩選?富集有效結(jié)合克隆?擴(kuò)增結(jié)合力強(qiáng)的克隆。2、技術(shù)應(yīng)用（主要在醫(yī)學(xué)口）（1）在寄生蟲醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用（如瘧原蟲、吸血蟲等），進(jìn)行診斷試劑與疫苗的開(kāi)發(fā)，例如分子疫苗制備、保護(hù)性抗原制備。篩選抗靶蛋白抗體可變區(qū)---研究蛋白分子免疫識(shí)別---篩選診斷試
2018
02-26

基因工程實(shí)驗(yàn)報(bào)告的實(shí)驗(yàn)步驟
實(shí)驗(yàn)一：大腸桿菌DH5α和BL21感受態(tài)細(xì)胞的制備【實(shí)驗(yàn)步驟】1從LB平板上挑取新活化的大腸桿菌DH5α單菌落，接種到5mLLB培養(yǎng)基中，37℃振蕩培養(yǎng)過(guò)夜。2取1mL培養(yǎng)物接種到100mLLB培養(yǎng)基（250mL三角瓶）中，37℃振蕩培養(yǎng)2~3h。3將菌液轉(zhuǎn)移到50mL離心管（2管）中，冰上放置15min。44℃4000rpm離心5min，棄去上清液，倒置使培養(yǎng)液流盡。5用20mL冷CaCl2溶液懸浮菌體沉淀合并成一管，在4℃4000rpm離心5min，棄去上清液。6用10mL冷CaCl2溶液懸
2018
02-26

綜述生物檢定法在食品安全監(jiān)測(cè)分析中的應(yīng)用
生物制品的生物學(xué)檢定方法生物檢定法是利用微生物或?qū)嶒?yàn)動(dòng)物來(lái)檢定制品效價(jià)的方法，其通過(guò)檢查制品中某些痕量雜質(zhì)可對(duì)生物體產(chǎn)生特殊的生理作用及影響用藥的安全有效性進(jìn)行評(píng)價(jià)。主要包括細(xì)菌學(xué)檢查、純菌檢測(cè)、微生物限變監(jiān)測(cè)、支原體檢測(cè)、動(dòng)物試驗(yàn)、熱原試驗(yàn)、內(nèi)毒素檢測(cè)及效價(jià)檢測(cè)。細(xì)菌學(xué)檢查主要應(yīng)用于預(yù)防和治療用的生物制品，使生物制品中不含專門規(guī)定外的雜菌；滅活細(xì)菌疫苗、病毒類疫苗不含活的本細(xì)菌、本病毒。動(dòng)物試驗(yàn)又包括異常毒性試驗(yàn)（目的是通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)檢查制品中外源性毒性物質(zhì)的傳染情況以及是否存在意外的不安全因素
2018
02-26

微生物實(shí)驗(yàn)室無(wú)菌操作技術(shù)規(guī)范
1.目的規(guī)范無(wú)菌操作流程，減少及避免發(fā)生染菌現(xiàn)象出現(xiàn)。2.使用范圍無(wú)菌室及潔凈區(qū)的操作。3.無(wú)菌操作技術(shù)原則3.1環(huán)境要清潔，在每次無(wú)菌操作結(jié)束后都需要對(duì)環(huán)境進(jìn)行清理、清洗；且避免操作前進(jìn)行清掃。3.2做好個(gè)人衛(wèi)生，進(jìn)入無(wú)菌室前需修剪指甲、洗手，穿好無(wú)菌服，帽子需遮住所有頭發(fā)，口罩遮住口鼻。3.3在無(wú)菌操作時(shí)，不可講話，打噴嚏，對(duì)懷疑染菌的無(wú)菌物品，不可使用。4.內(nèi)容4.1.1準(zhǔn)備：工作人員著裝整潔，洗手、戴口罩、修剪指甲；備齊用物（如：接種針、接種環(huán)、酒精燈、斜面、平皿、搖瓶、75%酒精棉、無(wú)
2018
02-24

gst pull down實(shí)驗(yàn)流程
蛋白-蛋白相互作用是蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能研究中zui重要的方面之一。GSTpull-down將靶蛋白與GST融合表達(dá)，并將蛋白固化在谷胱甘肽(GSH)親和樹(shù)脂上，作為與目的蛋白親和的支撐物，充當(dāng)“誘餌蛋白”，目的蛋白溶液過(guò)柱，可從中捕獲與之相互作用的“捕獲蛋白”（目的蛋白），洗脫結(jié)合物后通過(guò)電泳分析，從而證實(shí)兩種蛋白間的相互作用或篩選相應(yīng)的目的蛋白。"誘餌蛋白"和"捕獲蛋白"均可通過(guò)細(xì)胞裂解物、純化的蛋白、表達(dá)系統(tǒng)以及體外轉(zhuǎn)錄翻譯系統(tǒng)等方法獲得。此方法簡(jiǎn)單易行，操作方便。GSTpull-down一般
2018
02-24

RNA pull dow實(shí)驗(yàn)流程
RNAPullDown實(shí)驗(yàn)流程使用體外轉(zhuǎn)錄法標(biāo)記生物素RNA探針，然后與胞漿蛋白提取液孵育，形成RNA-蛋白質(zhì)復(fù)合物。該復(fù)合物可與鏈霉親和素標(biāo)記的磁珠結(jié)合，從而與孵育液中的其他成分分離。復(fù)合物洗脫后，通過(guò)westernblot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)特定的RNA結(jié)合蛋白是否與RNA相互作用。蛋白質(zhì)與RNA的相互作用是許多細(xì)胞功能的核心，如蛋白質(zhì)合成、mRNA組裝、病毒復(fù)制、細(xì)胞發(fā)育調(diào)控等。若待檢測(cè)目的蛋白明確，選擇Westernblot鑒定；若不明確，則可選擇質(zhì)譜鑒定。RNApull-down是檢測(cè)RNA結(jié)合蛋
2018
01-22

蛋白純化親和層析技術(shù)的原理及應(yīng)用分類
一．蛋白純化親和層析技術(shù)的原理蛋白質(zhì)親和層析技術(shù)適應(yīng)于理化性質(zhì)差異性較小而難分離的蛋白質(zhì)，親和層析利用固相介質(zhì)中的配基與混合生物分子之間親和能力不同而進(jìn)行分離，當(dāng)?shù)鞍状謽颖荆ɑ旌掀渌s蛋白、糖類、核酸及小分子）通過(guò)層析柱時(shí)，與配基能夠特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)就會(huì)被吸附固定在層析柱中，其他的蛋白質(zhì)、核酸等對(duì)配體不具有特異性的結(jié)合能力，將通過(guò)柱子洗脫下來(lái)，這種結(jié)合在一定條件下是可逆的，選用適當(dāng)?shù)南疵撘?，改變緩沖液的離子強(qiáng)度和pH值或者選擇更強(qiáng)的配體結(jié)合溶液將結(jié)合的蛋白質(zhì)洗脫下來(lái)，而無(wú)親和力的蛋白質(zhì)zui先
2018
01-22

Sanger測(cè)序技術(shù)的發(fā)展史
DNA測(cè)序技術(shù)是分子生物學(xué)研究中常用的技術(shù)，它的出現(xiàn)極大地推動(dòng)了生物學(xué)的發(fā)展。成熟的DNA測(cè)序技術(shù)始于20世紀(jì)70年代中期。1977年Maxam和Gilbert報(bào)道了通過(guò)化學(xué)降解測(cè)定DNA序列的方法。同一時(shí)期，Sanger發(fā)明了雙脫氧鏈終止法。20世紀(jì)90年代初出現(xiàn)的熒光自動(dòng)測(cè)序技術(shù)將DNA測(cè)序帶入自動(dòng)化測(cè)序的時(shí)代。這些技術(shù)統(tǒng)稱為*代DNA測(cè)序技術(shù)。*代測(cè)序技術(shù)在分子生物學(xué)研究中發(fā)揮過(guò)重要的作用，如人類基因組計(jì)劃(humangenomeprojec，tHGP)主要基于*代DNA測(cè)序技術(shù)。目前基于
2018
01-19

定量蛋白質(zhì)組學(xué)的方法有哪些
1背景和意義從生命活動(dòng)的直接執(zhí)行者——蛋白質(zhì)的角度研究生命現(xiàn)象和規(guī)律（特別是疾病防治和病理研究）已成為研究生命科學(xué)的主要手段。而這些研究往往離不開(kāi)對(duì)細(xì)胞、組織或器官中含有蛋白質(zhì)種類和表達(dá)量的研究。對(duì)處不同時(shí)期、不同條件下蛋白質(zhì)表達(dá)水平變化的研究，識(shí)別功能模塊和路徑，監(jiān)控疾病的生物標(biāo)志物，這些研究都需要對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行鑒定和定量。生物質(zhì)譜技術(shù)的出現(xiàn)和不斷成熟為蛋白質(zhì)差異表達(dá)分析提供了更可靠、動(dòng)態(tài)范圍更廣的研究手段?；谫|(zhì)譜技術(shù)，科學(xué)家們不斷開(kāi)發(fā)出新的定量蛋白質(zhì)組學(xué)方法，來(lái)了解細(xì)胞、組織或生物體的整體蛋

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