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2017
03-30

核酸分離與純化過程中材料與方法
(一)費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌材料與方法的選擇臨床常見的標(biāo)本有血液、尿液、唾液、組織及培養(yǎng)細(xì)胞等;核酸分離與純化的方法非常多，如何恰當(dāng)?shù)厥占c準(zhǔn)備材料，選擇適宜的分離與純化方法是一個(gè)首要的問題。首先我們應(yīng)當(dāng)明確核酸的分離與純化并不是zui終的目的，不同的實(shí)驗(yàn)研究與應(yīng)用對(duì)核酸的產(chǎn)量、完整性、純度和濃度可能有不同的要求;至于分離與純化核酸所需的時(shí)間與成本也往往需要考慮;在不影響核酸質(zhì)量的情況下，應(yīng)選擇安全無毒的試劑與方案。(二)選擇的原則核酸分離與純化的方法很多，應(yīng)根據(jù)具體生物材料的性質(zhì)與起始量、待分離核酸
2017
03-28

幾種常用的染色方法
（一）亮發(fā)光桿菌單染色法只應(yīng)用一種染料進(jìn)行染色的方法，如美藍(lán)染色法。美藍(lán)染色法：在已干燥、固定好的抹片上，滴加適量的（足夠覆蓋抹片點(diǎn)即可）美藍(lán)染色液，經(jīng)1～2分鐘，水洗，瀝去多余的水分，吸干或烘干（不能太熱），然后鏡檢。（二）復(fù)染色法應(yīng)用兩種或兩種以上的染料或再加助染劑進(jìn)行染色的方法。染色時(shí)，有些是將染料分別先后使用，有些則同時(shí)混合使用，染色后不同的細(xì)菌和物體或者細(xì)菌結(jié)構(gòu)的不同部分，可以呈現(xiàn)不同顏色，有鑒別細(xì)菌的作用，又可稱為鑒別染色，如革蘭氏染色法，抗酸染色法，瑞特氏染色法和姬姆薩氏染色法等。
2017
03-23

芽孢桿菌的功能特點(diǎn)介紹
1.青海發(fā)光桿菌生命力強(qiáng)，耐280°C的高溫、耐零下60°C的低溫、耐強(qiáng)光、耐強(qiáng)酸、耐強(qiáng)堿、耐干燥、耐輻射、耐肥料、耐化學(xué)毒物。國標(biāo)規(guī)定微生物肥料氮磷鉀含量不超過18%，而芽孢桿菌在氮磷鉀含量30%的化肥中正常生存。普通菌一般6個(gè)月失活，而該菌有效期可達(dá)3年。2.芽孢桿菌繁殖快，在土壤中20分鐘即繁殖一代，條件適宜4小時(shí)增值10萬倍。3.分解力強(qiáng)，芽孢桿菌將蛋白質(zhì)分解，產(chǎn)生多肽酶、脂肪酶、淀粉酶等許多催化酶。催化酶將糞肥、污水、秸稈草等有機(jī)物質(zhì)中的大分子分解，產(chǎn)生氨基酸、生長(zhǎng)素等多種活性物質(zhì)和營
2017
03-21

酶聯(lián)免疫法測(cè)定大腸桿菌菌體蛋白質(zhì)殘留量
（1)費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌包被液（PH9.6碳酸鹽緩沖液）稱取碳酸鈉0.32g、碳酸氫鈉0.586g,置200ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度。(2)磷酸鹽緩沖液（pH7.4)稱取氯化鈉8g、磷酸氫二鈉1.44g、磷酸二氫鉀0.24g，加水溶解并稀釋至500ml,121°C滅菌15分鐘。(3)洗滌液（pH7.4)量取聚山梨酯200.5ml，加磷酸鹽緩沖液至500ml。(4)稀釋液（pH7.4)稱取牛血清白蛋白0.5g，加洗滌液溶解并稀釋至100ml。(5)濃稀釋液稱取牛血清白蛋白l.Og,加洗滌液溶
2017
03-16

發(fā)光菌的生物毒性測(cè)試實(shí)驗(yàn)步驟
1．亮發(fā)光桿菌菌種準(zhǔn)備1)發(fā)光細(xì)菌新鮮菌懸液的制備(1)斜面菌種培養(yǎng)。于測(cè)定前48h取保存菌種，于新鮮斜面上接出*代斜面，(20±0.5)℃培養(yǎng)24h立即轉(zhuǎn)接第二代斜面，(20±0.5)℃培養(yǎng)12h，再接出第三代斜面，(20±0.5)℃培養(yǎng)12h后備用。每次接種量不超過1接種耳。(2）搖瓶菌液培養(yǎng)。取第三代斜面菌種近1環(huán)，幾接種于裝有50mL培養(yǎng)液的250mL三角瓶?jī)?nèi)，(20±0.5)℃,184r/min下培養(yǎng)12-14h，備用。(3)將培養(yǎng)液稀釋至每毫升108一109個(gè)細(xì)胞，初始發(fā)光度不低于8
2017
03-14

青海發(fā)光桿菌菌種培養(yǎng)溫度和濕度分析
青海發(fā)光桿菌微生物在一個(gè)較寬的溫度范圍內(nèi)生長(zhǎng)。但是，要獲得高質(zhì)量的孢子，其zui適溫度區(qū)間很狹窄。一般來說，提高培養(yǎng)溫度，可使菌體代謝活動(dòng)加快，縮短培養(yǎng)時(shí)間，但是，菌體的糖代謝和氮代謝的各種酶類，對(duì)溫度的敏感性是不同的。因此，培養(yǎng)溫度不同，菌的生理狀態(tài)也不同，如果不是用zui適溫度培養(yǎng)的孢子，其能力就會(huì)下降。不同的菌株要求的zui適溫度不同，需經(jīng)實(shí)踐考察確定。例如，龜裂鏈霉菌斜面zui適溫度為36.5～37℃，如果高于37℃，則孢子成熟早，易老化，接入發(fā)酵罐后，就會(huì)出現(xiàn)菌絲對(duì)糖、氮利用緩慢，氨基
2017
03-09

費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌染菌原因分析
費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌染菌原因分析（一）染菌的雜菌種類分析對(duì)于每一個(gè)發(fā)酵過程而言，污染的雜菌種類的影響是不同的。如在抗生素的發(fā)酵過程中，青霉素的發(fā)酵污染細(xì)短產(chǎn)氣桿菌比粗大桿菌的危害更大；鏈霉素的發(fā)酵污染細(xì)短桿菌、假單胞桿菌和產(chǎn)氣桿菌比污染粗大桿菌更有危害；四環(huán)素的發(fā)酵過程zui怕污染雙球菌、芽孢桿菌和夾膜桿菌；檸檬酸的發(fā)酵zui怕青霉菌的污染；谷氨酸發(fā)酵zui怕噬菌體污染。因噬菌體蔓延迅速，難以防治，容易造成連續(xù)污染。若污染的雜菌是耐熱的芽孢桿菌，可能是由于培養(yǎng)基或設(shè)備滅菌不*、設(shè)備存在死角等引起；若
2017
03-07

吸水鏈霉菌的發(fā)酵及其抗菌物質(zhì)的分離純化與性質(zhì)研究
亮發(fā)光桿菌活性物質(zhì)的抑菌譜廣，對(duì)黃曲霉、赭曲霉、黑曲霉等多種病原真菌具有較強(qiáng)的抑制作用?？装宸y(cè)得抗真菌活性物質(zhì)對(duì)黃曲霉的MIC和MFC分別為6.25?g/mL96和12.56?g/mL?？拐婢钚晕镔|(zhì)對(duì)花生的防霉效果明顯，對(duì)家蠶的生長(zhǎng)發(fā)育無不良影響。將TetrinsA和B、TetramycinsA和B以2000mg/kg劑量灌胃小鼠，小鼠無急性毒性表現(xiàn)。5.抗細(xì)菌活性物質(zhì)的發(fā)酵培養(yǎng)基配方及發(fā)酵條件的優(yōu)化通過單次單因子試驗(yàn)、正交試驗(yàn)、Plackett-Burman設(shè)計(jì)、zui陡爬坡和中心組合試驗(yàn)
2017
03-02

常用的厭氧菌培養(yǎng)方法分析
1．亮發(fā)光桿菌厭氧缸法接種好標(biāo)本的平板或液體培養(yǎng)基試管，可放入?yún)捬醺變?nèi)培養(yǎng)，厭氧缸是普通的干燥缸，用物理化學(xué)的方法使缸內(nèi)造成厭氧環(huán)境，從而將厭氧菌培養(yǎng)出來。2．厭氧袋（Bio-bag）即在塑料袋內(nèi)造成厭氧環(huán)境來培養(yǎng)厭氧菌。塑料袋透明而不透氣，內(nèi)裝氣體發(fā)生管（有硼氫化鈉的碳酸氫鈉固體以及5%檸檬酸安瓿）、美蘭指示劑管、鈀催化劑管、干燥劑。放入已接種好的平板后，盡量擠出袋內(nèi)空氣，然后密封袋口。先折斷氣體發(fā)生管，后折斷美蘭指示劑管，命名袋內(nèi)在半小時(shí)內(nèi)造成無氣環(huán)境。如不突變表示袋內(nèi)已達(dá)厭氧狀態(tài)，可以孵育
2017
02-28

費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌采用固體好氧發(fā)酵基本操作流程
1．費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌工藝流程保藏菌種一菌種活化→三角瓶種子→一級(jí)種子液→發(fā)酵培養(yǎng)基配料混合→培養(yǎng)基滅菌→冷卻→接種→發(fā)酵床通風(fēng)培養(yǎng)→費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物2．種子液的制備(1)斜面菌種活化將費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌的保藏菌種在試管斜面培養(yǎng)基上劃線接種，于37℃培養(yǎng)18~20h，使費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌活化；試管斜面培養(yǎng)基可用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。(2)三角瓶種子制備將活化的費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌斜面菌種接種到裝有費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌液體培養(yǎng)基三角瓶中，于35~37℃，180~200r／min，搖床18~20h，得到
2017
02-23

青海發(fā)光桿菌培養(yǎng)基保藏法和操作方法
1.青海發(fā)光桿菌斜面保藏法將菌種轉(zhuǎn)接在適宜固體斜面培養(yǎng)基上,待其充分生長(zhǎng)后,用牛皮紙將棉塞部分包扎好（棉塞換成膠塞效果更好）,置4C冰箱中包藏.保藏時(shí)間依微生物的種類而定.霉菌,放線菌及芽孢菌保存2-4個(gè)月移種一次,酵母菌間隔兩個(gè)月,普通細(xì)菌一個(gè)月,假單胞菌兩周傳代一次.此法優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)單,使用方便,缺點(diǎn)是保藏時(shí)間短,易被污染.2.液體石蠟保藏法將無菌石蠟加在已長(zhǎng)好菌的斜面上,其用量以高出斜面頂端1CM為準(zhǔn),使菌種與空氣隔絕.將試管直立,置低溫或室溫下保存.此法實(shí)用且效果較好.霉菌,放線菌,芽孢
2017
02-21

BD分枝桿菌檢測(cè)系統(tǒng)操作流程和檢測(cè)原理
BD分枝桿菌檢測(cè)系統(tǒng)操作流程和檢測(cè)原理亮發(fā)光桿菌*步:選擇操作項(xiàng)第二步:掃描培養(yǎng)管第三步:將培養(yǎng)管放入綠色指示燈亮的測(cè)試孔內(nèi)第四步:當(dāng)出現(xiàn)陽性或陰性結(jié)果，掃描取出對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)管BACTECTMMGITTM960系統(tǒng)檢測(cè)出陽性樣本會(huì)立即以聲單和光的信號(hào)報(bào)警，測(cè)試孔指示燈會(huì)發(fā)出紅光以指示位置BACTECTMMGITTM960亮發(fā)光桿菌全自動(dòng)快速分枝桿菌培養(yǎng)鑒定藥每?jī)x采用BD熒光增強(qiáng)原理，在MGITTM培養(yǎng)管底部包埋對(duì)培養(yǎng)管內(nèi)氧氣濃度高度敏感的熒光指示劑。當(dāng)培養(yǎng)管內(nèi)有分枝桿菌生長(zhǎng)時(shí)，氧氣被消耗，熒光顯示
2017
02-16

青海發(fā)光桿菌培養(yǎng)基常壓蒸氣滅菌技術(shù)分析
青海發(fā)光桿菌培養(yǎng)基常壓蒸氣滅菌技術(shù)分析青海發(fā)光桿菌常壓蒸氣滅菌的常壓滅菌灶用磚砌成，選直徑110厘米的鐵鍋，用磚砌高100厘米、直徑120厘米的鍋筒，內(nèi)外用水泥抹光滑。培養(yǎng)基裝入滅菌鍋后，用較厚的塑料膜和麻袋片把鍋筒口包蓋住，用繩子捆縛鞏固，此后用旺火猛燒，在zui短的時(shí)間內(nèi)將鍋燒開。待塑料膜鼓氣后成饅頭狀時(shí)，青海發(fā)光桿菌說明鍋已燒開，滅菌從這時(shí)開端計(jì)時(shí)，要延續(xù)8—10小時(shí)，確保滅菌*，在滅菌上掉以輕心，因雜菌污染嚴(yán)重導(dǎo)致制種失敗。常壓滅菌時(shí)要做到“三避免”，一要避免中途降溫，中途不得不得停火，
2017
02-14

如何挑選優(yōu)良的亮發(fā)光桿菌菌種
如何挑選優(yōu)良的亮發(fā)光桿菌菌種一般來說，優(yōu)良的亮發(fā)光桿菌菌種一般會(huì)具備以下六點(diǎn)特征：菌絲豐滿優(yōu)良的原種，菌絲豐滿、濃密、均勻。如菌絲干癟、萎縮則不可使用。生長(zhǎng)整齊同一品種，使用相同的培養(yǎng)基，在相同培養(yǎng)條件下，長(zhǎng)速和長(zhǎng)相應(yīng)基本相同。菇香味濃郁亮發(fā)光桿菌正常的原種，打開瓶(袋)口，可聞到濃郁的菇香味。如果氣味清淡或無香味，甚至有一股異味，說明菌種有問題，不能使用。無其他生物污染污染的真菌易于鑒別，有各類各色的孢子。細(xì)菌常被忽略，肉眼鑒別較難。長(zhǎng)相正常不同種類的菌種長(zhǎng)相不同，但同一品種不同個(gè)體長(zhǎng)相要一致
2017
02-09

費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌的繁殖與菌落特征
費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌的繁殖與菌落特征費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌主要通過無性孢子及菌絲片段進(jìn)行繁殖。電子顯微技術(shù)和超薄切片研究表明，費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌通過產(chǎn)生橫隔膜的方式使孢子絲分裂成為一串分生孢子。孢子在適宜環(huán)境中吸收水分，膨脹萌發(fā)，長(zhǎng)出l～4根芽管，形成新的菌絲體(圖1-30)。少數(shù)費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌首先在菌絲上形成孢子囊，在孢子囊內(nèi)形成孢囊孢子。孢子囊可在氣生菌絲上形成，也可在營養(yǎng)菌絲上形成，或二者均可生成。孢子囊成熟后，釋放出大量孢囊孢子。孢囊孢子可萌發(fā)形成菌絲體。較低等的費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌如放線菌屬(Act
2017
02-07

亮發(fā)光桿菌菌種如何證明進(jìn)行了傳代
亮發(fā)光桿菌菌種如何證明進(jìn)行了傳代1.菌種是從事微生物學(xué)及生命科學(xué)研究的基本材料，亮發(fā)光桿菌在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中，診斷制品的制備，菌苗的、微生物致病性研究，藥物的抑菌試驗(yàn)及藥品微生物檢驗(yàn)等都有一套完整的菌種.微生物具有生命活力，在傳代過程中易發(fā)生變異甚至死亡，因此菌種傳代與保藏是一項(xiàng)重要的基礎(chǔ)工作。2.把凍干菌種管、滅菌1ml滴管、雙碟、鑷子、營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、營養(yǎng)瓊脂斜面數(shù)支，移入接種室或凈化工作臺(tái)。3.先用砂輪將凍干菌種安瓶頸部挫出刻痕,再將凍干菌種管外壁用75%乙醇擦洗消毒、稍干，用75%乙醇棉擦凈，
2017
01-21

費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌純培養(yǎng)的群體生長(zhǎng)規(guī)律分析
費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌純培養(yǎng)的群體生長(zhǎng)規(guī)律分析費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌在適宜條件下，每20分鐘左右便可分裂一次，如果始終保持這樣的繁殖速度，一個(gè)細(xì)菌在48小時(shí)內(nèi)，其子代群體將達(dá)到無法想象的數(shù)量。然而，實(shí)際情況并非如此。費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌將少量單細(xì)胞純培養(yǎng)接種到一恒定容積的新鮮液體培養(yǎng)基中，在適宜的條件下培養(yǎng)，定時(shí)取樣測(cè)定其細(xì)菌含量，可以看到以下現(xiàn)象：開始有一短暫時(shí)間，細(xì)菌數(shù)量并不增加，隨之細(xì)菌數(shù)目增加很快，既而細(xì)菌數(shù)又趨穩(wěn)定，zui后逐漸下降。如果以培養(yǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo)，以細(xì)菌數(shù)目的對(duì)數(shù)或生長(zhǎng)速度為縱坐標(biāo)作圖，可
2017
01-19

分離費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌菌種方法
分離費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌菌種方法本技術(shù)方案采用了一種分離費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌的方法，包括以下步驟:將膠帶封閉的羊肚菌用75%消毒酒精均勻擦拭后，用燒灼的刀具從菌柄頂端在火焰上方切割掉子實(shí)體頭部，露出的新鮮菌柄橫切面，在火焰上輕快過2-4下，用刀具在新鮮菌柄內(nèi)側(cè)環(huán)割菌柄新鮮菌肉組織并送入抗生素平板培養(yǎng)荃上，于20-30℃的溫度下培養(yǎng)，待萌發(fā)出菌絲后，及時(shí)轉(zhuǎn)接。費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌實(shí)體在切割前要基部菌柄完整，用透明膠把費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌整個(gè)纏繞密封，中間不留空隙。所述的抗生素平板培養(yǎng)基為:馬鈴薯400g,草炭l0
2017
01-17

青海發(fā)光桿菌如何選購
青海發(fā)光桿菌如何選購青海發(fā)光桿菌是獲得食用菌豐產(chǎn)的基礎(chǔ)與保證，菌種的好壞直接影響食用菌的經(jīng)濟(jì)效益。選購青海發(fā)光桿菌要注意以下幾個(gè)方面。一、看準(zhǔn)市場(chǎng)選品種。不同地區(qū)、不同季節(jié)、不同年份食用菌價(jià)格均有差別。菇農(nóng)選種不能墨守陳規(guī)，要隨機(jī)應(yīng)變，從以下幾個(gè)方面入手。1、選擇價(jià)格好的品種，如蘑菇中“2796”，平菇p54“新世紀(jì)”、小平菇，草菇v23、v35等品種，通常供不應(yīng)求價(jià)格好，能以價(jià)取勝，特別適合城郊發(fā)展。2、選擇高產(chǎn)品種，以質(zhì)量與產(chǎn)量取勝。這些品種在上市高峰期仍能獲得較高的經(jīng)濟(jì)效益，比較適合外運(yùn)的
2017
01-12

亮發(fā)光桿菌的冷凍干燥保藏法
亮發(fā)光桿菌的冷凍干燥保藏法（1）收集菌種：作為長(zhǎng)期保藏的菌種，應(yīng)當(dāng)選擇zui適培養(yǎng)基和溫度以便得到良好的培養(yǎng)物。亮發(fā)光桿菌培養(yǎng)時(shí)間要掌握在生長(zhǎng)后期，因?yàn)閷?duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)菌對(duì)冷凍干燥的抵抗力較弱，有孢子的微生物需適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)以期得到成熟的孢子。大致說，細(xì)菌是24~48h，酵母為72h，放線菌和絲狀真菌是7~8天以上。從理論上說，是用生理鹽水或緩沖液將斜面上刮下的菌體或孢子洗幾次，以期洗凈培養(yǎng)基中可能帶來的各種物質(zhì)。但在實(shí)際操作中如果洗凈的條件不適宜會(huì)使細(xì)胞受損，同時(shí)也增加了污染的可能性，一般都省略了這

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