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配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的制作過(guò)程2023/05/24: 細(xì)菌培養(yǎng)的基礎(chǔ)是配制培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方然后再加熱溶解，補(bǔ)足水分，其制作過(guò)程包括以下4個(gè)環(huán)節(jié)：①清潔玻璃器皿一般用肥皂液煮沸30min,或用重鉻酸鉀和濃硫酸配制的溶液浸泡數(shù)10min，然后用清水沖洗，晾干后保存?zhèn)溆?。②配制液體培養(yǎng)基a．根據(jù)需要配制培養(yǎng)基數(shù)量，先在燒杯中注入少量蒸餾水；b．按培養(yǎng)基配方稱量各種成分的原料，依次使之溶解；c．補(bǔ)足需水量；d．如用牛肉膏、蛋白胨配制時(shí)，需加熱熔化后溶解；e．加熱后，補(bǔ)足水分即可。③配制固體培養(yǎng)基在液體培養(yǎng)基里加入一定量的瓊脂，加熱熔化即可。④

淺析細(xì)菌在培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)特性2023/05/24: 1．固體培養(yǎng)基標(biāo)本或液體培養(yǎng)物劃線接種到固體培養(yǎng)基表面后，單個(gè)細(xì)菌經(jīng)分裂繁殖可形成一個(gè)肉眼可見(jiàn)的細(xì)菌集團(tuán)，稱為菌落（colony）。(1)菌落的形態(tài)特征：大小、形狀（露滴狀、圓形、菜花樣、不規(guī)則等）、突起或扁平、凹陷、邊緣（光滑、波形、鋸齒狀、卷發(fā)狀等）、顏色（紅色、灰白色、黑色、綠色、無(wú)色、黃色等）、表面（光滑、粗糙等）、透明度（不透明、半透明、透明等）和粘度等。據(jù)細(xì)菌菌落表面特征不同，可將菌落分為3型：①光滑型菌落（S型菌落）：菌落表面光滑、濕潤(rùn)、邊緣整齊，新分離的細(xì)菌大多呈光滑型菌落。②粗

微生物培養(yǎng)基質(zhì)的種類與成分介紹2023/05/24: 微生物培養(yǎng)基質(zhì)按照物理狀態(tài)可分為：固體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基和脫水培養(yǎng)基。按照微生物的種類可分為：細(xì)菌培養(yǎng)基、放線菌培養(yǎng)基、酵母菌培養(yǎng)基和霉菌培養(yǎng)基。按照化學(xué)分類可分為：天然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基和半合成培養(yǎng)基。一、微生物培養(yǎng)基質(zhì)有哪些種類1、按照物理狀態(tài)區(qū)分：分為固體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基和脫水培養(yǎng)基。2、按照微生物種類區(qū)分：分為細(xì)菌培養(yǎng)基、放線菌培養(yǎng)基、酵母菌培養(yǎng)基和霉菌培養(yǎng)基。3、按照化學(xué)分類區(qū)分：分為天然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基、半合成培養(yǎng)基。4、按照營(yíng)養(yǎng)成分是否wan全區(qū)分：

植物組織培養(yǎng)基配置的關(guān)鍵環(huán)節(jié)說(shuō)明2023/05/24: 以MS培養(yǎng)基為例,其母液的配制包括大量元素、微量元素、鐵鹽、維生素、氨基酸、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)和有機(jī)附加物等種類。1、大量元素和微量元素母液的配制按規(guī)定用量,稱取所需的各種藥品,在配制時(shí)為減少工作量,可以把幾種藥品（如大量元素或微量元素）配在同一母液中。但由于各種藥品的混合,可能發(fā)生反應(yīng),生成沉淀物,以致母液失效。為避免類似現(xiàn)象發(fā)生,在大量元素、微量元素和維生素及氨基酸的母液配制時(shí),可采用如下2種做法加以解決：①將要配在同一母液的大量元素、微量元素和維生素及氨基酸等化合物,按先后順序溶解藥品,待前

核酸提取中磁珠的分類介紹2023/05/23: 分子診斷是以核酸作為檢測(cè)對(duì)象，主要應(yīng)用于臨床各科的診斷中，如腫瘤、感染、遺傳等各方面，而核酸提取是分子診斷實(shí)驗(yàn)的“第一步”。近年來(lái)，磁珠已成為核酸提取過(guò)程中最chang用的工具之一。磁珠的概念和分類根據(jù)不同的表面處理與標(biāo)記，可將磁珠分成各種不同的應(yīng)用類型：TiO2磷酸化多肽富集磁珠磁珠表面覆蓋有一層TiO2材料，可以選擇性的與磷酸化的氨基酸殘基：絲氨酸(Ser)、酪氨酸(Tyr)、蘇氨酸(Thr)結(jié)合，而與酸性的氨基酸殘基的非特異性結(jié)合最小。與傳統(tǒng)的IMAC技術(shù)相比，其靈敏度提高了1000倍，富

【核酸提取】RNA提取與DNA的提取簡(jiǎn)介2023/05/23: 核酸分為兩大類：一類為核糖核酸（RNA），另一類為脫氧核糖核酸（DNA）。核酸的分子量極大，從數(shù)萬(wàn)到億萬(wàn)。核酸是兩性化合物，在一定的等電點(diǎn)溶于水，其水溶液呈酸性，不溶于乙醇等有機(jī)溶劑。細(xì)胞內(nèi)的核酸常和蛋白質(zhì)結(jié)合成核蛋白。核糖核蛋白和脫氧核糖核蛋白在不同濃度的電解質(zhì)溶液中的溶解度有顯著區(qū)別，在一定濃度范圍的氯化鈉溶液中，脫氧核糖核蛋白的溶解度隨著氯化鈉濃度的增加而逐漸下降，當(dāng)氯化鈉濃度為0.14mol/L時(shí)，其溶解度僅為水中溶解度的1/100，但當(dāng)氯化鈉濃度在增加時(shí)，脫氧核糖核蛋白的溶解度重新增加

【遠(yuǎn)慕實(shí)驗(yàn)】RNA的提取與核酸的顏色反應(yīng)2023/05/23: 一.目的學(xué)習(xí)用濃鹽法從酵母中提取RNA掌握用等電點(diǎn)法沉淀RNA觀察核酸的顏色反應(yīng)，了解核酸定性與定量測(cè)定的原理熟練掌握普通離心機(jī)的使用方法二.原理酵母繁殖快，生長(zhǎng)周期短；其細(xì)胞質(zhì)中的核酸大部分是RNA，而DNA很少；RNA提取液與菌體分離比較容易。因此，酵母是提取RNA的好材料。將RNA從細(xì)胞中釋放出來(lái)在工業(yè)上主要有三種方法—稀堿法、濃鹽法和自溶法。本實(shí)驗(yàn)采用濃鹽法，即利用高濃度的鹽（10%NaCl）在90～100°C條件下改變了細(xì)胞膜通透性，并將核蛋白體解離成RNA和蛋白質(zhì)而使RNA釋放到鹽溶

自制EM菌液也可以很簡(jiǎn)單！2023/05/23: EM菌種培育菌液的方法挺簡(jiǎn)單的，就是加水加紅糖密封發(fā)酵就可以了下面遠(yuǎn)慕生物為您詳細(xì)做下培育方法介紹EM活性液制作方法：[原料準(zhǔn)備]①至少可以容納10公斤水的容器（最好是可以密封的朔料桶）.②紅糖0.5公斤.③10公斤無(wú)菌干凈的水(深井水、涼開(kāi)水、或者放置24小時(shí)的自來(lái)水).④益富源發(fā)酵床專用菌種1瓶步驟1、先把塑料桶裝入7～8公斤無(wú)菌干凈的水。步驟2、把剩余的2～3公斤水燒開(kāi)把0.5公斤紅糖wan全融化，溶化后倒進(jìn)步驟1中的塑料桶內(nèi)。步驟3、將益富源發(fā)酵床專用菌種倒入塑料桶中，攪拌菌液，密封起來(lái)

哪些情況下需要使用穩(wěn)定細(xì)胞系？2023/05/22: 穩(wěn)定細(xì)胞系是指將外源基因整合到宿主細(xì)胞基因組中，使外源基因能夠在宿主細(xì)胞中長(zhǎng)期穩(wěn)定表達(dá)，這樣的細(xì)胞系稱為穩(wěn)定細(xì)胞系。其原理是將外源基因克隆到具有某種抗性的載體上，通過(guò)轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞，外源基因整合到宿主染色體上，用載體中所含抗性基因進(jìn)行篩選即可得到成功整合目的基因的細(xì)胞。在試驗(yàn)過(guò)程中，常用的真核表達(dá)載體抗性篩選標(biāo)志物有嘌呤霉素(puromycin)、新霉素(neomycin)、潮霉素(hygromycin)等。通過(guò)篩選可得到符合實(shí)驗(yàn)要求的穩(wěn)定高表達(dá)目的蛋白細(xì)胞株或者穩(wěn)定沉默目的基因的細(xì)胞株。其建立的

培養(yǎng)基的滅菌處理方法介紹2023/05/22: 要獲得微生物純培養(yǎng)，必須避免雜菌污染，因此對(duì)所用器材及工作場(chǎng)所進(jìn)行消毒與滅菌。對(duì)培養(yǎng)基而言，更是要進(jìn)行嚴(yán)格的滅菌。對(duì)培養(yǎng)基一般采取高壓蒸汽滅菌，一般培養(yǎng)基用1.05kg/cm2，121.3℃條件下維持15-30min可達(dá)到滅菌目的。在高壓蒸汽滅菌過(guò)程中，長(zhǎng)時(shí)間高溫會(huì)使某些不耐熱物質(zhì)遭到破壞，如使糖類物質(zhì)形成氨基糖、焦糖，因此含糖培養(yǎng)基常在0.56kg/cm2，112.6℃15-30分鐘進(jìn)行滅菌，某些對(duì)糖類要求較高的培養(yǎng)基，可先將糖進(jìn)行過(guò)濾除菌或間歇滅菌，再與其他已滅菌的成分混合；長(zhǎng)時(shí)間高溫還會(huì)引

【微生物檢測(cè)】培養(yǎng)基適用性操作規(guī)程2023/05/22: 一、目的：建立培養(yǎng)基適用性檢查操作規(guī)程，保證培養(yǎng)基的質(zhì)量，確保檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。二、適用范圍：本規(guī)程規(guī)定了培養(yǎng)基適用性檢查方法和操作要求，適用于微生物實(shí)驗(yàn)室計(jì)數(shù)用培養(yǎng)基、控制菌檢查用培養(yǎng)基的適用性檢查。三、內(nèi)容：1、簡(jiǎn)述1.1培養(yǎng)基適用性檢查試驗(yàn)可用于確定實(shí)驗(yàn)室所使用培養(yǎng)基(包括購(gòu)置的不同批號(hào)的成品培養(yǎng)基、不同批號(hào)的脫水培養(yǎng)基、按處方自行配制培養(yǎng)基所用不同批次的原材料等)、制備程序（包括水質(zhì)控制、配制方法、滅菌程序等）、保存條件（溫度、濕度、時(shí)間及盛裝培養(yǎng)基的容器條件等）等是否滿足微生物限度檢查

遠(yuǎn)慕教您鑒定發(fā)酵罐中的菌種種類2023/05/22: 也許好多人對(duì)菌種的鑒定方法不了解，尤其是發(fā)酵罐的。下面遠(yuǎn)慕生物就來(lái)給大家介紹如何鑒定發(fā)酵罐中的菌種種類：1.糖發(fā)酵試驗(yàn)糖發(fā)酵實(shí)驗(yàn)是最常chang用的生化反應(yīng)，在腸道細(xì)菌鑒定上尤為重要。絕大多數(shù)細(xì)菌都能利用糖類作為碳源和能源，但是它們?cè)诜纸馓堑哪芰ι嫌泻艽蟛町?，有些?xì)菌能分解糖并產(chǎn)酸（如乳酸、醋酸、丙酸等）和氣體（如氫、甲烷、二氧化碳等）；有些細(xì)菌只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。例如大腸桿菌能分解乳糖和葡萄糖產(chǎn)酸并產(chǎn)氣；傷寒桿菌能分解葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，不能分解乳糖；普通變形桿菌分解葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，不能分解乳糖。酸的

直接免疫熒光法和間接免疫熒光法之間的區(qū)別2023/05/19: 免疫熒光技術(shù)是將熒光素如異硫氰酸熒光素(fluoresceinisothiocyanate,FITC)與相應(yīng)抗體（或抗原）以化學(xué)的方法結(jié)合，將熒光標(biāo)記抗體（或抗原）與標(biāo)本中相應(yīng)的抗原結(jié)合形成熒光標(biāo)記的抗體-抗原復(fù)合物，用熒光顯微鏡觀察。在鏡下見(jiàn)到有熒光存在即推斷有抗原抗體復(fù)合物的存在，根據(jù)已知的抗體（或抗原）即可推知另一個(gè)未知抗原（或抗體）的存在。1.直接免疫熒光法直接免疫熒光法是利用熒光色素標(biāo)記的特異性抗體直接與相應(yīng)的抗原結(jié)合，以鑒定未知抗原。本法具有操作簡(jiǎn)單、時(shí)程短、特異性高的優(yōu)點(diǎn)，但也存在

農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備和轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)2023/05/19: 實(shí)驗(yàn)概要本實(shí)驗(yàn)介紹了根癌農(nóng)桿菌GV3101感受態(tài)細(xì)胞的制備及凍融法轉(zhuǎn)化。主要試劑利福平，LB培養(yǎng)基，NaCl，CaCl2，YEP培養(yǎng)基，卡那霉素主要設(shè)備搖床，高速離心機(jī)，低溫冰箱，水浴鍋實(shí)驗(yàn)材料根癌農(nóng)桿菌GV3101單菌落實(shí)驗(yàn)步驟1.根癌農(nóng)桿菌GV3101感受態(tài)細(xì)胞的制備1)挑取單菌落GV3101，接種于5mL附加有50mg/L的利福平的液體LB培養(yǎng)基中，28℃，200rpm，過(guò)夜；2)取2mL培養(yǎng)物至50mL液體LB培養(yǎng)基中，繼續(xù)培養(yǎng)至OD600為0.5左右；3)將培養(yǎng)物冰浴30min，4℃，

【分子構(gòu)建】載體構(gòu)建的經(jīng)驗(yàn)分享~2023/05/19: 做過(guò)分子實(shí)驗(yàn)的人都知道，要想做的有效率有質(zhì)量是很困難的，1個(gè)月做100個(gè)克隆那都是小case，沒(méi)點(diǎn)看家的本事怎么行。如果再遇到比較稀有的基因，周旋個(gè)把月，那也是家常便飯。下面遠(yuǎn)慕生物就和大家分享一些載體構(gòu)建的經(jīng)驗(yàn)，從此邁向科研達(dá)人！1.準(zhǔn)備工作俗話說(shuō)：用欲善其事，必先利其器。建議大家在做構(gòu)建之前先找好工具，效果事半功倍哦。推薦兩個(gè)工具，一個(gè)是oligo軟件，常用于引物設(shè)計(jì)和酶切位點(diǎn)分析；另一個(gè)是DNAstar軟件，工具ji強(qiáng)大，一款全面的生物醫(yī)學(xué)軟件，用作DNA和蛋白質(zhì)序列分析、重疊群拼接和基因

單細(xì)胞測(cè)序的主要步驟和特點(diǎn)分析2023/05/19: 單細(xì)胞測(cè)序的興起，不僅是新概念炒作，而是在相關(guān)領(lǐng)域，長(zhǎng)時(shí)間由于技術(shù)的瓶頸很多生物學(xué)問(wèn)題沒(méi)有解決，現(xiàn)在突然有一個(gè)技術(shù)可以高性價(jià)比地解決這些問(wèn)題，導(dǎo)致這個(gè)技術(shù)被大量應(yīng)用。以單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)為例開(kāi)展探討，單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組主要包括以下四個(gè)步驟，其中關(guān)鍵的一點(diǎn)就是如何進(jìn)行單細(xì)胞的捕獲/分選，這是決定單細(xì)胞檢測(cè)成本和通量的關(guān)鍵步驟。主要步驟：在細(xì)胞分選的方法里，主要包括特異性分選和非特意性分選兩類方法，兩類方法的關(guān)系有點(diǎn)類似定量（只針對(duì)特定目標(biāo)基因進(jìn)行檢測(cè)）和轉(zhuǎn)錄組測(cè)序，用特定標(biāo)志對(duì)特定目標(biāo)細(xì)胞進(jìn)行挑選，然

單克隆抗體制備基本原理與過(guò)程介紹2023/05/18: 單克隆抗體制備的原理：B淋巴細(xì)胞在抗原的刺激下,能夠分化、增殖形成具有針對(duì)這種抗原分泌特異性抗體的能力、B細(xì)胞的這種能力和量是有限的,不可能持續(xù)分化增殖下去，因此產(chǎn)生免疫球蛋白的能力也是極其微小的、將這種B細(xì)胞與非分泌型的骨髓瘤細(xì)胞融合形成雜交瘤細(xì)胞，再進(jìn)一步克隆化，這種克隆化的雜交瘤細(xì)胞是既具有瘤的無(wú)限生長(zhǎng)的能力，又具有產(chǎn)生特異性抗體的B淋巴細(xì)胞的能力，將這種克隆化的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)或注入小鼠體內(nèi)即可獲得大量的高效價(jià)、單一的特異性抗體.這種技術(shù)即稱為單克隆抗體技術(shù)。單克隆抗體制備的過(guò)程：免疫

熒光原位雜交技術(shù)實(shí)驗(yàn)心得2023/05/18: 熒光原位雜交技術(shù)（fluorescenceinsituHybridization,FISH）是一種非放射性原位雜交方法，用特殊的熒光素標(biāo)記核酸探針，在細(xì)胞或組織切片標(biāo)本上進(jìn)行雜交，以檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)DNA或RNA特定序列存在與否。FISH實(shí)驗(yàn)操作與用非熒光標(biāo)記探針的原位雜交基本相似。在組織準(zhǔn)備方面，新鮮組織、冷凍組織樣本、細(xì)胞涂片、培養(yǎng)細(xì)胞爬片等材料均可以用于進(jìn)行FISH實(shí)驗(yàn)檢測(cè)。以下談?wù)動(dòng)眉?xì)胞爬片進(jìn)行RNAFISH檢測(cè)的一些總結(jié)。一、實(shí)驗(yàn)流程1.細(xì)胞在蓋玻片上進(jìn)行培養(yǎng)，細(xì)胞長(zhǎng)好后用CSK緩沖液簡(jiǎn)單洗

一些細(xì)胞爬片小知識(shí)了解一下2023/05/18: 什么叫細(xì)胞爬片?細(xì)胞爬片就是讓玻片浸在細(xì)胞培養(yǎng)基內(nèi)，細(xì)胞在玻片上生長(zhǎng)，主要用于組織學(xué)，免疫組織化學(xué)/，bing凍切片，細(xì)胞涂片，原位雜交等.細(xì)胞爬片經(jīng)驗(yàn)總結(jié)：1.爬片可用一般的蓋玻片，也可用爬片；2.應(yīng)用蓋玻片，可根據(jù)自己的需要剪裁成合適的大小，以備置于6孔板、12孔板或24孔板；裁剪時(shí)可用前護(hù)士輸液用于打開(kāi)玻璃安瓶的小沙輪，或者是口腔科的那種小沙輪，輕輕劃一下后，稍用力一掰就分開(kāi)了。如果接種大皿的話，我一般不將蓋玻片切開(kāi)，直接清潔后放入培養(yǎng)皿中，到染色時(shí)再將之切開(kāi)，這樣既保證了細(xì)胞均一性，又可

細(xì)胞爬片免疫熒光實(shí)驗(yàn)操作步驟2023/05/18: 細(xì)胞爬片免疫熒光步驟：1.遠(yuǎn)慕生物細(xì)胞爬片；首先是玻片的處理，普通的蓋玻片用砂輪劃成自己要的大小的小方塊，先用洗衣粉洗干凈，用水沖靜烤干，然后泡酸過(guò)夜，撈酸后流水洗凈，烤干，置于器皿中高壓滅菌，然后再烤箱中大約8小時(shí)烤干備用。爬片可以在培養(yǎng)皿六孔板或24孔板中都可，我選擇在培養(yǎng)皿中爬。一為節(jié)約經(jīng)費(fèi)（培養(yǎng)皿可以重復(fù)利用）二來(lái)覺(jué)得培養(yǎng)皿口大，操作比較方便。培養(yǎng)皿消毒同上，消毒時(shí)記得消兩把鑷子具體操作是：用胰yi酶消化好細(xì)胞，充分吹打，使之成單細(xì)胞懸液（注意：這一點(diǎn)很重要，關(guān)系到將來(lái)爬出來(lái)片子的質(zhì)量）

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