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乙醇固定樣品DNA抽提和直接PCR實(shí)驗(yàn)2023/05/04: 實(shí)驗(yàn)概要本實(shí)驗(yàn)從乙醇浸泡的魚(yú)苗中提取DNA，并利用直接PCR進(jìn)行了鑒定。實(shí)驗(yàn)原理在實(shí)際的研究工作中，野外取樣的地點(diǎn)一旦較為偏遠(yuǎn)，受條件的限制，很難保證得到的樣品活體或能夠快速冷凍；另外，對(duì)一些稀有物種和瀕危種，鮮活樣品的采集十分困難，一般為了解決這些問(wèn)題，常采用乙醇和甲醛固定的方法來(lái)處理樣品，再對(duì)樣品DNA進(jìn)行提取以及擴(kuò)增。使用乙醇固定樣品具有硬化，固定，脫水作用，對(duì)組織滲透迅速，特別適合組織中核酸的保存，相比于甲醛等其它固定方法，此法更簡(jiǎn)單，保存時(shí)間更長(zhǎng)質(zhì)量更好，也更加清潔無(wú)害。乙醇固定樣品主

PCR測(cè)定支原體實(shí)驗(yàn)步驟2023/05/04: 實(shí)驗(yàn)材料：TaqDNA多聚酶引物陽(yáng)性對(duì)照DNA脫氧核苷三磷酸混合物三磷酸瓊脂糖1.3%TAE膠試劑、試劑盒：磷酸緩沖鹽溶液液Tris醋酸EDTA6×加樣緩沖液引物儲(chǔ)備液儀器、耗材：DNA抽提和純化系統(tǒng)基質(zhì)的DNA抽提試劑盒熱循環(huán)儀實(shí)驗(yàn)步驟一、DNA標(biāo)本的收集和制備1.需要檢測(cè)支原體污染的細(xì)胞系，在收集樣品前數(shù)天或至少在解凍后兩周內(nèi)，不能加任何抗生素。應(yīng)保證支原體在培養(yǎng)上清中的效價(jià)在PCR測(cè)定范圍之內(nèi)。2.收集1ml貼壁細(xì)胞或懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)上清液。這樣收集的標(biāo)本包含活的或死的細(xì)胞，其優(yōu)點(diǎn)是一些支原

PCR的反應(yīng)條件你知道嗎？2023/05/04: PCR反應(yīng)條件為溫度、時(shí)間和循環(huán)次數(shù)。溫度與時(shí)間的設(shè)置：基于PCR原理三步驟而設(shè)置變性-退火-延伸三個(gè)溫度點(diǎn)。在標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)中采用三溫度點(diǎn)法，雙鏈DNA在90～95℃變性，再迅速冷卻至40～60℃，引物退火并結(jié)合到靶序列上，然后快速升溫至70～75℃，在TaqDNA聚合酶的作用下，使引物鏈沿模板延伸。對(duì)于較短靶基因（長(zhǎng)度為100～300bp時(shí)）可采用二溫度點(diǎn)法，除變性溫度外、退火與延伸溫度可合二為一，一般采用94℃變性，65℃左右退火與延伸（此溫度TaqDNA酶仍有較高的催化活性）。①變性溫度與時(shí)間

紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)的常見(jiàn)問(wèn)題2023/04/28: 紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)是常用的分析儀器，因使用廣泛且頻率較高，所以經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)故障。了解紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)的常見(jiàn)問(wèn)題與處理方法有利于及時(shí)解決故障，以保證實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行。1.讀數(shù)向增大或減小，單方向不停地漂移-預(yù)熱時(shí)間不夠：預(yù)熱時(shí)間至少30分鐘。-儀器受環(huán)境因素影響，機(jī)內(nèi)受潮：延長(zhǎng)預(yù)熱時(shí)間并降低環(huán)境濕度。2.不能調(diào)0.000A或不穩(wěn)-樣品室內(nèi)有擋光物體：去掉擋光物體若樣品架擋光，則調(diào)整樣品架位置。-用來(lái)校零的空白溶液與空氣的吸光度之差超過(guò)0.4Abs：更換低濃度的空白溶液。-前置放大板壞：修理前置放大板。

遠(yuǎn)慕簡(jiǎn)述分子熒光分析法基本原理2023/04/28: 一.分子熒光的發(fā)生過(guò)程（一）分子的激發(fā)態(tài)——單線激發(fā)態(tài)和三線激發(fā)態(tài)大多數(shù)分子含有偶數(shù)電子，在基態(tài)時(shí)，這些電子成對(duì)地存在于各個(gè)原子或分子軌道中，成對(duì)自旋，方向相反，電子凈自旋等于零：S=?+(-?)=0，其多重性M=2S+1=1(M為磁量子數(shù))，因此，分子是抗（反）磁性的，其能級(jí)不受外界磁場(chǎng)影響而分裂，稱(chēng)“單線態(tài)”；當(dāng)基態(tài)分子的一個(gè)成對(duì)電子吸收光輻射后，被激發(fā)躍遷到能量較高的軌道上，通常它的自旋方向不改變，即?S=0，則激發(fā)態(tài)仍是單線態(tài)，即“單線(重)激發(fā)態(tài)”；如果電子在躍遷過(guò)程中，還伴隨著自旋方

各培養(yǎng)基適用性檢查的具體操作過(guò)程2023/04/28: 1膽鹽乳糖培養(yǎng)基新鮮配制100mL/瓶的對(duì)照膽鹽乳糖培養(yǎng)基4瓶，121℃滅菌15min，備用。分別接種大腸埃希菌、銅綠假單胞菌以及金黃se葡萄球菌各1瓶，接種菌液量1mL(不大于100CFU),另一瓶不接種菌作為空白對(duì)照；被檢培養(yǎng)基同法操作，置規(guī)定溫度培養(yǎng)。培養(yǎng)18h,與對(duì)照培養(yǎng)基比較，被檢培養(yǎng)基中試驗(yàn)菌應(yīng)生長(zhǎng)良好，表現(xiàn)為液體培養(yǎng)基變渾濁；培養(yǎng)48h，空白培養(yǎng)瓶和接種金黃se葡萄球菌的培養(yǎng)瓶應(yīng)不得渾濁；2MUG培養(yǎng)基新鮮配制50mL/瓶的對(duì)照MUG培養(yǎng)基4瓶，121℃滅菌15min,備用。接種大

幾種常見(jiàn)的實(shí)驗(yàn)室化學(xué)試劑用途2023/04/27: 幾種常見(jiàn)的實(shí)驗(yàn)室化學(xué)試劑用途：1、HPLC級(jí)高純液相色譜溶劑優(yōu)點(diǎn)：低紫外吸收非揮發(fā)性物質(zhì)、游離酸、游離堿和水份含量低可用于熒光檢測(cè)用途：用于液相色譜（LC）樣品制備、LC樣品分析、LC-MS分析2、農(nóng)殘級(jí)試劑優(yōu)點(diǎn)：極低的農(nóng)殘背景值（≤5pg/ml），不揮發(fā)性組分極少GC控制（ECD-PND檢測(cè)）質(zhì)量可靠，穩(wěn)定性高適用于分析有機(jī)氯農(nóng)藥、有機(jī)磷農(nóng)藥、多氯聯(lián)苯（PCBs）及其他用GC/ECD和GC/PND檢測(cè)的化合物符合各種殺蟲(chóng)劑殘留量分析的要求和對(duì)低揮發(fā)性雜質(zhì)的要求用途：用于氣相色譜檢測(cè)（ECD、P

實(shí)驗(yàn)室霉菌污染原因與解決方案2023/04/27: 一、培養(yǎng)箱環(huán)境污染很多實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)霉菌采用的是專(zhuān)用的霉菌培養(yǎng)箱，所以培養(yǎng)箱空間里會(huì)有大量的霉菌孢子。而平皿的蓋和底是有一定縫隙的，尤其是玻璃平皿縫隙還是比較大的，正置培養(yǎng)中，孢子會(huì)向上飛揚(yáng)通過(guò)縫隙落到平板的培養(yǎng)基上，導(dǎo)致污染。細(xì)心地實(shí)驗(yàn)猿可能發(fā)現(xiàn)，污染的菌落大部分都是在平皿邊緣生長(zhǎng)的。用一次性塑料平皿來(lái)培養(yǎng)，污染的概率就會(huì)小很多，因?yàn)橐淮涡运芰掀矫蟮纳w和底之間的縫隙相比之下是比較小的。因此培養(yǎng)箱環(huán)境中的孢子可能會(huì)是主要污染源。這樣一來(lái)，解決的方法就應(yīng)該是對(duì)培養(yǎng)箱進(jìn)行殺菌。可以考慮用紫外線殺一下菌，

預(yù)防化學(xué)試劑變質(zhì)看這篇就夠了~2023/04/27: 引發(fā)和促使化學(xué)試劑發(fā)生變化的原因，大致可歸納如下：1、揮發(fā)2、升華3、潮解4、風(fēng)化5、濃縮和析晶6、水解7、分解8、氧化和還原9、非氧化——還原反應(yīng)10、聚合和縮合11、光化學(xué)反應(yīng)12、霉變?nèi)绾晤A(yù)防化學(xué)試劑變質(zhì)a.密封這是普遍通用的方法。試劑瓶的材料和密封程度應(yīng)根據(jù)試劑性質(zhì)而定。如：強(qiáng)腐蝕的“三酸”和液溴，可用帶磨口玻璃的試劑瓶，或是有塑料襯墊的螺旋蓋的玻璃瓶，則應(yīng)密封貯藏在銀制或塑料制容器內(nèi)，等等。密封適用于易揮發(fā)、升華、潮解、稀釋、風(fēng)化、水解和氧化還原、霉變的所有化學(xué)試劑對(duì)于極易分解產(chǎn)生氣體

滴定分析結(jié)果總是超出了誤差范圍怎么解決？2023/04/27: 對(duì)于任何滴定分析，都要首先了解什么樣的精度要求才是有意義的并且是必須的，之后如果發(fā)現(xiàn)一些結(jié)果還是超出了誤差范圍，你就要從以下幾點(diǎn)去找原因：1、待測(cè)樣品是否在整個(gè)樣品中具有代表性?換句話(huà)說(shuō)，你應(yīng)該從取樣時(shí)就開(kāi)始尋找可能的錯(cuò)誤?！胺治鼋Y(jié)果僅代表實(shí)際被分析的樣品的結(jié)果。”也許在實(shí)際測(cè)量前，樣品可能來(lái)自于一個(gè)沒(méi)有混合均勻的容器。亦或在取樣后，樣品暴露在不同的環(huán)境條件下。例如樣品在滴定前放置不同的時(shí)間段，就會(huì)吸收不同量的空氣中的二氧化碳。在樣品轉(zhuǎn)換器上用敞開(kāi)式的滴定容器時(shí)，就應(yīng)考慮到這一點(diǎn)。因此我們建議先

抗原抗體反應(yīng)原理特點(diǎn)歸納總結(jié)！2023/04/26: 抗原抗體反應(yīng)是指抗原與相應(yīng)抗體之間所發(fā)生的特異性結(jié)合反應(yīng)。這種反應(yīng)既可在機(jī)體內(nèi)進(jìn)行，也可以在機(jī)體外進(jìn)行?？乖贵w反應(yīng)的過(guò)程是經(jīng)過(guò)一系列的化學(xué)和物理變化，包括抗原抗體特異性結(jié)合和非特異性促凝聚兩個(gè)階段，以及由親水膠體轉(zhuǎn)為疏水膠體的變化。由于抗體主要存在于血清中，在抗原或抗體檢測(cè)中多以血清為試驗(yàn)材料，故將體外抗原抗體的免疫學(xué)反應(yīng)也稱(chēng)作血清學(xué)反應(yīng)(serologicalreaction)。該反應(yīng)既可用已知的抗原檢測(cè)未知的抗體，這是臨床上常用的血清學(xué)診斷方法；也可用已知的抗體檢測(cè)未知的抗原，如微生物及其

【遠(yuǎn)慕技術(shù)】BAS-酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)2023/04/26: BAS-酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(BAS-ELISA)是ELISA的一種改良技術(shù)，將BAS，即生物素-親和素系統(tǒng)(biotinavidinsystem)引入ELISA，大大提高了ELISA的靈敏度。(一)親和素和生物素1.親和素(avidin)給動(dòng)物飼喂大量卵白蛋白后，可引起生物素缺乏癥，此后證明，卵白蛋白中存在一種對(duì)生物素有異常親和力的堿性蛋白，稱(chēng)之為抗生物素蛋白或卵白素，現(xiàn)今均稱(chēng)為親和素。因?yàn)橛H和素存在于卵白蛋白中，故可從雞蛋白清中提取親和素，它是由四個(gè)相同的亞基組成的堿性糖蛋白，分子量6.6～6.

電解液安全使用說(shuō)明書(shū)2023/04/26: 電解液（卡爾費(fèi)休試劑）是用于庫(kù)倫電量法微量水分測(cè)定儀水分的測(cè)定使用，是配合儀器使用的重要部分。儀器和電解液的使用詳見(jiàn)微量水分測(cè)定儀的使用說(shuō)明書(shū)，因?yàn)殡娊庖河幸欢ǖ臍馕逗投拘?，特別需要注意，具體注意事項(xiàng)如下：1、電解液的主要成分為碘、甲醇、二氧化硫、乙二醇（其中有吡啶電解液含吡啶）等成分，應(yīng)儲(chǔ)存于避光干燥處，保存時(shí)間為半年。2、把電解液存放于通風(fēng)良好、環(huán)境溫度5~25℃，相對(duì)濕度不大于75%的地方，如果把電解液在直接的陽(yáng)光暴曬或置于高溫下，則二氧化硫和碘就會(huì)從吡啶中釋放出來(lái)而失效。3、電解液有一定

怎樣選擇合適的單、多克隆抗體及抗原？2023/04/26: 多克隆抗體（polyclonalantibody,pAb）：用一種包含多種抗原決定簇的抗原免疫動(dòng)物，可刺激機(jī)體多個(gè)B細(xì)胞克隆，產(chǎn)生針對(duì)多種抗原表位的不同抗體。所獲得的免疫血清實(shí)際上是含有多種抗體的混合物，即多克隆抗體。單克隆抗體是由單一B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的高度均一、僅針對(duì)某一特定抗原表位的抗體，稱(chēng)為單克隆抗體。通常采用雜交瘤技術(shù)來(lái)制備，雜交瘤（hybridoma）抗體技術(shù)是在細(xì)胞融合技術(shù)的基礎(chǔ)上，將具有分泌特異性抗體能力的致敏B細(xì)胞和具有無(wú)限繁殖能力的骨髓瘤細(xì)胞融合為B細(xì)胞雜交瘤。一、單多抗優(yōu)缺點(diǎn)多

多肽合成的水解影響因素與機(jī)制2023/04/25: 水解影響因素與機(jī)制多肽合成藥物在不同的環(huán)境中可以被酸、堿、蛋白酶催化或被金屬離子催化水解。例如，在25℃的溫度下，二肽甘氨酰甘氨酸在1mol/LNaOH中水解的半衰期約為2天，在1mol/L鹽酸中水解的半衰期則為150天。而難活化的肽鍵在鈀和銅配合物的催化下能迅速裂解。過(guò)去非催化肽鍵水解并未得到較多關(guān)注，直到1988年Kahne和Still用C標(biāo)記了甘氨酸并使其結(jié)合在肽C－末端，在中性pH值范圍內(nèi)和25℃的溫度下能監(jiān)測(cè)到釋放少量的甘氨酸，它的水解速率為3×10－9s－1，從而推算得出它的半衰期為

關(guān)于膠原纖維的結(jié)構(gòu)分析介紹2023/04/25: Ⅰ型膠原的原纖維平行排列成較粗大的束，成為光鏡下可見(jiàn)的膠原纖維，抗張強(qiáng)度超過(guò)鋼筋。其三股螺旋由二條α1（Ⅰ）鏈及一條α2（Ⅰ）鏈構(gòu)成。每條α鏈約含1050個(gè)氨基酸殘基，由重復(fù)的Gly-X-Y序列構(gòu)成。X常為Pro（脯氨酸），Y常為羥脯氨酸或羥賴(lài)氨酸殘基。重復(fù)的Gly-X-Y序列使α鏈卷曲為左手螺旋，每圈含3個(gè)氨基酸殘基。三股這樣的螺旋再相互盤(pán)繞成右手超螺旋，即原膠原。原膠原分子間通過(guò)側(cè)向共價(jià)交聯(lián)，相互呈階梯式有序排列聚合成直徑50~200nm、長(zhǎng)150nm至數(shù)微米的原纖維，在電鏡下可見(jiàn)間隔67n

純化膠原蛋白的方法2023/04/25: 可用于膠原蛋白的純化方法包括鹽析法、透析法、離心法、電泳法和色譜法，其中鹽析法、離心法和電泳法最為常用。由于單一方法難以wan全分離純化膠原蛋白，實(shí)際操作都是通過(guò)復(fù)合法來(lái)達(dá)到分離純化膠原蛋白的目的。鹽析法一般采用高濃度NaCl；離心法常選用制備型低溫超速離心機(jī)；電泳法多采用十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳法（SDS-PAGE），該法既可用于膠原蛋白的分離純化，還可用來(lái)測(cè)定膠原蛋白分子的相對(duì)分子質(zhì)量。像有人用破碎、酶解、鹽析三步法提純蘇尼特羊骨骼I型膠原蛋白。先去除骨頭里的非膠原物質(zhì)，然后往沉淀中

各類(lèi)蛋白互作檢測(cè)方法優(yōu)缺點(diǎn)分析2023/04/25: 聚焦蛋白質(zhì)互作研究進(jìn)展與實(shí)驗(yàn)方法研究蛋白-蛋白相互作用是理解生命活動(dòng)的基礎(chǔ)。蛋白質(zhì)—蛋白質(zhì)互作網(wǎng)絡(luò)是生物信息調(diào)控的主要實(shí)現(xiàn)方式，是決定細(xì)胞命運(yùn)的關(guān)鍵因素。檢測(cè)蛋白質(zhì)間相互作用的實(shí)驗(yàn)方法有哪些？這些檢測(cè)方法各有什么優(yōu)缺點(diǎn)?總結(jié)如下。1.生化方法●共純化、共沉淀，在不同基質(zhì)上進(jìn)行色譜層析(需要補(bǔ)充)●蛋白質(zhì)親和色譜基本原理是將一種蛋白質(zhì)固定于某種基質(zhì)上(如Sepharose)，當(dāng)細(xì)胞抽提液經(jīng)過(guò)改基質(zhì)時(shí)，可與改固定蛋白相互作用的配體蛋白被吸附，而沒(méi)有吸附的非目標(biāo)蛋白則隨洗脫液流出。被吸附的蛋白可以通過(guò)

過(guò)氧化物酶活性的測(cè)定方法2023/04/24: 過(guò)氧化物酶是植物體內(nèi)普遍存在的、活性較高的一種酶,它與呼吸作用、光合作用及生長(zhǎng)素的氧化等都有密切關(guān)系,在植物生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中,它的活性不斷發(fā)生變化,因此測(cè)量這種酶,可以反映某一時(shí)期植物體內(nèi)代謝的變化.一、原理在有過(guò)氧化氫存在下,過(guò)氧化物酶能使愈創(chuàng)木酚氧化,生成茶褐色物質(zhì),該物質(zhì)在470nm處有最大吸收,可用分光光度計(jì)測(cè)量470nm的吸光度變化測(cè)定過(guò)氧化物酶活性.二、實(shí)驗(yàn)材料、試劑與儀器設(shè)備（一）實(shí)驗(yàn)材料馬鈴薯塊莖.（二）試劑1．100mmol／L磷酸緩沖液pH6.0（見(jiàn)附錄）.2．反應(yīng)混合液：10

過(guò)氧化物酶(POX)染色實(shí)驗(yàn)方法2023/04/24: 實(shí)驗(yàn)原理血細(xì)胞中的過(guò)氧化物酶(Peroxidase,POX或MPO)能分解試劑中的底物H2O2，釋出新生態(tài)氧，使無(wú)色聯(lián)/苯胺氧化為藍(lán)色聯(lián)/苯胺，后者與亞硝基鐵qing化鈉結(jié)合形成藍(lán)黑色的顆粒，沉著于細(xì)胞質(zhì)中。實(shí)驗(yàn)方法材料：1.1%TMB2.亞硝基鐵qing化鈉飽和溶液3.1%過(guò)氧hua氫溶液4.稀過(guò)氧hua氫溶液5.瑞氏染色液6.新鮮涂片(骨髓或者血片)、染色架、顯微鏡等方法：1.取0.1%TMB乙醇溶液lml，加亞硝基鐵qing化鈉飽和溶液10?l，溶液呈淡棕黃色。2.在新鮮干燥的血片上，加混

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