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免疫學(xué)檢測(cè)-抗原、抗體檢測(cè)方法介紹2022/11/18: 1、免疫熒光技術(shù)免疫熒光技術(shù)(immunofluorescencetechnique)是在生物化學(xué)、顯微鏡技術(shù)和免疫學(xué)基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)檢測(cè)技術(shù),是用熒光標(biāo)記的抗體或抗原與被檢樣品中相應(yīng)的抗原或抗體結(jié)合,在顯微鏡下檢測(cè)熒光,并對(duì)樣品進(jìn)行分析的方法。它把顯微鏡技術(shù)的精確性和免疫學(xué)檢測(cè)的特異性、敏感性有機(jī)地結(jié)合在一起。這一方法的特點(diǎn)是特異性強(qiáng)、靈敏度高。根據(jù)熒光素標(biāo)記的方式不同,可分為直標(biāo)熒光抗體和間標(biāo)熒光抗體。①直標(biāo)免疫熒光技術(shù):該方法是最早的免疫熒光技術(shù),是用已標(biāo)記了熒光素的特異性熒光抗體直接

影響考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定蛋白質(zhì)的因素2022/11/18: 影響考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定蛋白質(zhì)的因素有哪些1）靈敏度高,據(jù)估計(jì)比Lowry法約高四倍,其最/低蛋白質(zhì)檢測(cè)量可達(dá)1mg.這是因?yàn)榈鞍踪|(zhì)與染料結(jié)合后產(chǎn)生的顏色變化很大,蛋白質(zhì)－染料復(fù)合物有更高的消光系數(shù),因而光吸收值隨蛋白質(zhì)濃度的變化比Lowry法要大的多.（2）測(cè)定快速、簡(jiǎn)便,只需加一種試劑.完成一個(gè)樣品的測(cè)定,只需要5分鐘左右.由于染料與蛋白質(zhì)結(jié)合的過(guò)程,大約只要2分鐘即可完成,其顏色可以在1小時(shí)內(nèi)保持穩(wěn)定,且在5分鐘至20分鐘之間,顏色的穩(wěn)定性最好.因而完/全不用像Lowry法那樣費(fèi)時(shí)和嚴(yán)格地控制

蛋白質(zhì)的沉淀方法中哪些可以用于酶的制備過(guò)程2022/11/18: 蛋白質(zhì)的沉淀方法中只有鹽析法可以用于酶的制備過(guò)程。蛋白質(zhì)沉淀的概念：蛋白質(zhì)分子凝聚從溶液中析出的現(xiàn)象稱為蛋白質(zhì)沉淀(precipitation)，變性蛋白質(zhì)一般易于沉淀，但也可不變性而使蛋白質(zhì)沉淀，在一定條件下，變性的蛋白質(zhì)也可不發(fā)生沉淀。定性分析：蛋白質(zhì)所形成的親水膠體顆粒具有兩種穩(wěn)定因素，即顆粒表面的水化層和電荷。若無(wú)外加條件，不致互相凝集。然而除掉這兩個(gè)穩(wěn)定因素(如調(diào)節(jié)溶液pH至等電點(diǎn)和加入脫水劑)蛋白質(zhì)便容易凝集析出。如將蛋白質(zhì)溶液pH調(diào)節(jié)到等電點(diǎn)，蛋白質(zhì)分子呈等電狀態(tài)，雖然分子間同性電

電泳后的凝膠染色實(shí)驗(yàn)介紹2022/11/18: 實(shí)驗(yàn)概要本文介紹了電泳后主要的凝膠染色方法，包括：標(biāo)準(zhǔn)考馬斯亮藍(lán)染色法、快速考馬斯亮藍(lán)染色法、凝膠銨銀染色法、凝膠中性銀染色法及凝膠銅染色法。實(shí)驗(yàn)步驟1.標(biāo)準(zhǔn)考馬斯亮藍(lán)染色法1)電泳后，將凝膠轉(zhuǎn)入一潔凈的玻璃或塑料容器中。加入5倍于凝膠體積的0.25%考馬斯亮藍(lán)R-250(溶解于50%甲醇和10%乙酸中)；2)室溫下振搖溫育4h至過(guò)夜；3)去除染色液，收集保存可重復(fù)使用20-40次；4)依次在25%甲醇和7.5%乙酸中室溫振搖下脫色。靈敏度為0.1-0.5ug蛋白／每條帶。注：使用加熱的染色液或

pUC18 和 pUC19質(zhì)粒圖譜說(shuō)明書(shū)2022/11/17: pUC18和pUC19質(zhì)粒圖譜pUC18和pUC19大小只有2686bp，是最/常用的質(zhì)粒載體，其結(jié)構(gòu)組成緊湊，幾乎不含多余的DNA片段，GenBank注冊(cè)號(hào)為L(zhǎng)08752(pUC18)和X02514(pUC19)。由pBR322改造而來(lái)，其中l(wèi)acZ(MSC)來(lái)自M13mp18/19圖3-4是其質(zhì)粒圖譜。這兩個(gè)質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)幾乎是完/全一樣的，只是多克隆位點(diǎn)的排列方向相反。這些質(zhì)粒缺乏控制拷貝數(shù)的rop基因，因此其拷貝數(shù)達(dá)500-700。pUC系列載體含有一段lacZ蛋白氨基末端的部分編碼序列，在

提高質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)化效率的方法2022/11/17: 1.細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)和密度:不要用經(jīng)過(guò)多次轉(zhuǎn)接或儲(chǔ)于4℃的培養(yǎng)菌，最好從-70℃或-20℃甘油保存的菌種中直接轉(zhuǎn)接用于制備感受態(tài)細(xì)胞的菌液。細(xì)胞生長(zhǎng)密度以剛進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期時(shí)為好，可通過(guò)監(jiān)測(cè)培養(yǎng)液的OD600來(lái)控制。DH5α菌株的OD600為0.5時(shí),細(xì)胞密度在5×107個(gè)/ml左右(不同的菌株情況有所不同),這時(shí)比較合適。密度過(guò)高或不足均會(huì)影響轉(zhuǎn)化效率。2.質(zhì)粒的質(zhì)量和濃度:用于轉(zhuǎn)化的質(zhì)粒DNA應(yīng)主要是超螺旋態(tài)DNA(cccDNA)。轉(zhuǎn)化效率與外源DNA的濃度在一定范圍內(nèi)成正比,但當(dāng)加入的外源DNA

遠(yuǎn)慕分享：斜面培養(yǎng)基的制作方法2022/11/17: 1、配制溶液向容器內(nèi)加入所需水量的一部分，按照培養(yǎng)基的配方，稱取各種原料，依次加入使其溶解，最后補(bǔ)足所需水分。對(duì)蛋白胨、肉膏等物質(zhì)，需加熱溶解，加熱過(guò)程所蒸發(fā)的水分，應(yīng)在全部原料溶解后加水補(bǔ)足。配制固體培養(yǎng)基時(shí)，先將上述已配好的液體培養(yǎng)基煮沸，再將稱好的瓊脂加入，繼續(xù)加熱至完/全融化。并不斷攪拌，以免瓊脂糊底燒焦。2、調(diào)節(jié)pH值用pH試紙（或pH電位計(jì)、氫離子濃度比色計(jì)）測(cè)試培養(yǎng)基的pH值，如不符合需要，可用10%HCl或10%NaOH進(jìn)行調(diào)節(jié)，直到調(diào)節(jié)到配方要求的pH值為止。3、過(guò)濾用濾紙、紗

細(xì)菌在液體培養(yǎng)基中的三種生長(zhǎng)現(xiàn)象2022/11/17: 細(xì)菌在液體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)現(xiàn)象有三種：混濁生長(zhǎng)、沉淀生長(zhǎng)、菌膜生長(zhǎng)（表面生長(zhǎng)）1、混濁生長(zhǎng)：大多數(shù)細(xì)菌在液體培養(yǎng)基中生長(zhǎng)繁殖后均勻渾濁。如大腸埃希菌、志賀菌等。2、沉淀生長(zhǎng)：少數(shù)鏈狀排列的細(xì)菌如鏈球菌，炭疽芽孢桿菌等則呈沉淀生長(zhǎng)。3、菌膜生長(zhǎng)（表面生長(zhǎng)）：枯草芽孢桿菌、結(jié)核分歧桿菌和銅綠假單胞菌等專性需氧菌一般呈表面生長(zhǎng)，常形成菌膜。細(xì)菌培養(yǎng)常見(jiàn)的培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法（一）培養(yǎng)基培養(yǎng)基是供細(xì)菌生長(zhǎng)用的，由人工方法將多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)根據(jù)各種細(xì)菌的需要而組合成的混合營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。培養(yǎng)基的基本成分有營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、凝固物

【超全】免疫定量分析中標(biāo)準(zhǔn)品的制備、鑒定、與計(jì)量2022/11/17: 標(biāo)準(zhǔn)品是標(biāo)記免疫分析定量的依據(jù)。標(biāo)準(zhǔn)品的正確與否直接影響樣品的測(cè)定結(jié)果。如果在連續(xù)測(cè)定中，或各實(shí)驗(yàn)室之間使用的標(biāo)準(zhǔn)品不一致，則可影響到實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可比性。為此，對(duì)標(biāo)記免疫分析所使用的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)滿足如下要求。一、標(biāo)準(zhǔn)品的要求1、化學(xué)結(jié)構(gòu)：原則上標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)與被測(cè)物具有完/全相同的化學(xué)結(jié)構(gòu)，包括相同的立體化學(xué)結(jié)構(gòu)。但在實(shí)際工作中，用化學(xué)結(jié)構(gòu)完//全相同的物質(zhì)作標(biāo)準(zhǔn)品是十分困難的。這是由于一方面來(lái)源有限，另一方面有些被測(cè)物本身的化學(xué)結(jié)構(gòu)還不清楚，或是有明顯的異型性。所以有時(shí)也用結(jié)構(gòu)類似的物質(zhì)作標(biāo)準(zhǔn)品。此時(shí)，應(yīng)

瓊脂糖凝膠電泳法檢測(cè)DNA及RNA的純度及濃度2022/11/16: 1、DNA的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)（1）配制瓊脂糖凝膠①稱取適量瓊脂糖，放入100mL錐形瓶中按膠濃度加入1倍TAE或TBE緩沖液，于微波爐或水浴中溶解。②熔化的瓊脂糖冷卻至60℃，加入終濃度為0.5μg/mL的EB，混勻。③將凝膠床水平放置，插入兩端的擋板，用滴管吸取少量的凝膠封好膠床邊緣。④放入梳子，使梳齒高于底板0.5～1.0mm。⑤倒入瓊脂糖凝膠溶液，其厚度為3～5mm，放置30～60min，使膠完/全硬化。⑥去掉兩端的擋板，將膠床放入電泳槽中，加入電泳緩沖液，液面高出膠面1～2mm小心拔出

什么是固定液？固定液對(duì)使用有什么要求？2022/11/16: 什么是固定液？固定液的使用要求？相信有些小伙伴對(duì)此還一知半解，今天遠(yuǎn)慕具體講解一下。一般是一種高沸點(diǎn)的有機(jī)物的液膜,通過(guò)對(duì)不同組份的不同分子間的作用,使組份在色譜柱中得到分離。對(duì)氣相色譜用的固定液,一般有如下幾點(diǎn)要求:1、在操作溫度下蒸氣壓低,熱穩(wěn)定性好,與被分析物理或載氣不產(chǎn)生不可逆反應(yīng);2、在操作溫度下呈液態(tài),而且粘度愈低愈好。物質(zhì)在高粘度的固定液中傳質(zhì)速度慢,柱效率因而降低。這決定固定液的最/低使用溫度;3、能牢固地附著在載體上,并形成均勻和結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的薄層;4、被分離的物質(zhì)必須在其中有一定

多肽的合成以及需要注意的誤區(qū)2022/11/16: 藥物肽、化妝品多肽等已經(jīng)滲透到我們的生活中，人們逐漸開(kāi)始了解多肽，那么什么是多肽呢？多肽的合成有哪些方法？有哪些容易忽略的誤區(qū)？現(xiàn)在讓我?guī)闳チ私庖幌隆５谝?，什么是多肽？多肽是一種生物活性物質(zhì)，涉及生物體內(nèi)各種細(xì)胞功能。它是分子結(jié)構(gòu)介于氨基酸和蛋白質(zhì)之間的一類化合物，由多種氨基酸按照一定的排列順序通過(guò)肽鍵結(jié)合而成。到現(xiàn)在，人們已發(fā)現(xiàn)和分離出一百多種存在于人體的肽，對(duì)于多肽的研究和利用具有很重要的理論意義和應(yīng)用價(jià)值。第二，有什么方法可以合成多肽？多肽合成主要分為化學(xué)合成多肽和生物合成多肽兩種方式。

遠(yuǎn)慕實(shí)驗(yàn)：瓊脂糖凝膠電泳具體操作步驟2022/11/15: 一、操作步驟：1、電泳方法一般的核酸檢測(cè)只需要瓊脂糖凝膠電泳就可以；如果需要分辨率高的電泳，特別是只有幾個(gè)bp的差別應(yīng)該選擇聚丙烯酰胺凝膠電泳；用普通電泳不合適的巨大DNA鏈應(yīng)該使用脈沖凝膠電泳。2、凝膠濃度對(duì)于瓊脂糖凝膠電泳，濃度通常在0.5～2%之間，低濃度的用來(lái)進(jìn)行大片段核酸的電泳，高濃度的用來(lái)進(jìn)行小片段分析。低濃度膠易碎，小心操作和使用質(zhì)量好的瓊脂糖是解決辦法。3、緩沖液常用的緩沖液有TAE和TBE，而TBE比TAE有著更好的緩沖能力。電泳時(shí)使用新制的緩沖液可以明顯提高電泳效果。4、電壓

遠(yuǎn)慕為大家詳細(xì)介紹載體蛋白！2022/11/15: 載體蛋白又稱做載體（carrier）、通透酶（permease）或轉(zhuǎn)運(yùn)器（transporter）。能夠與特異性溶質(zhì)結(jié)合，通過(guò)自身構(gòu)象的變化，將與它結(jié)合的溶質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜的另一側(cè)載體蛋白，是多回旋折疊的跨膜蛋白質(zhì)，它與被傳遞的分子特異結(jié)合使其越過(guò)質(zhì)膜。其機(jī)制是載體蛋白分子的構(gòu)象可逆地變化，與被轉(zhuǎn)運(yùn)分子的親和力隨之改變而將分子傳遞過(guò)去。載體蛋白需要同被運(yùn)輸?shù)碾x子和分子結(jié)合，然后通過(guò)自身的構(gòu)型變化或移動(dòng)完成物質(zhì)運(yùn)輸?shù)哪さ鞍?。載體蛋白促進(jìn)擴(kuò)散時(shí)同樣具有高度的特異性，其上有結(jié)合點(diǎn)，只能與某一種物質(zhì)進(jìn)行暫時(shí)性

遠(yuǎn)慕生物：核酸檢測(cè)試劑原材料一覽！2022/11/15: 核酸檢測(cè)試劑是基于核酸擴(kuò)增檢測(cè)技術(shù)的體外診斷試劑，包括等溫?cái)U(kuò)增、PCR，qPCR等?，F(xiàn)在有些實(shí)驗(yàn)室自己合成引物探針，生產(chǎn)qPCR診斷試劑，也有些試劑生產(chǎn)企業(yè)在問(wèn)如何保證試劑生產(chǎn)過(guò)程的質(zhì)量控制。檢測(cè)試劑的生產(chǎn)質(zhì)控與診斷試劑的評(píng)價(jià)既有相同點(diǎn)，因?yàn)槎际腔谙嗤脑u(píng)價(jià)指標(biāo)；又有不同點(diǎn)，生產(chǎn)過(guò)程會(huì)關(guān)注原料、半成品、成品，診斷試劑評(píng)價(jià)只針對(duì)成品。核酸檢測(cè)試劑原材料有如下這些：1、dNTP脫氧三磷酸核苷，核酸的組成成分，包括：dATP、dUTP、dGTP、dCTP和dTTP。應(yīng)為HPLC純、PCR級(jí)，無(wú)DNa

遠(yuǎn)慕帶你快速了解PCR核酸檢測(cè)！2022/11/15: 1.什么是PCR?PCR的意思是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，能夠用來(lái)擴(kuò)增DNA，從而將微量的DNA擴(kuò)增到能夠檢測(cè)的程度。一方面是可以診斷疾病，如果連病原體的DNA都能檢測(cè)到，就說(shuō)明感染了這種病原體;另一方面是判斷病毒復(fù)制的多少，從而判斷病情嚴(yán)重程度或者治療效果。那么核酸檢測(cè)是什么意思呢？2.PCR核酸檢測(cè)是什么意思？PCR的意思是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，能夠用來(lái)擴(kuò)增DNA，從而將微量的DNA擴(kuò)增到能夠檢測(cè)的程度。有些病毒的核酸是DNA，需要采用這個(gè)方法進(jìn)行檢測(cè)。所以PCR并不是進(jìn)行的檢查，而是檢測(cè)DNA的一種方法。

熒光定量PCR耗材的使用和選擇注意事項(xiàng)2022/11/14: 高通量的96孔PCR板和8聯(lián)管是在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PolymeraseChainReaction,PCR)中，主要作為參與擴(kuò)增反應(yīng)的引物、TaqDNA聚合酶、dNTP、模板核酸、Mg、緩沖液等的承載物。醫(yī)療級(jí)聚丙烯（PP）材質(zhì)因其極/高的純凈度和穩(wěn)定性，能更好適應(yīng)PCR反應(yīng)過(guò)程中反復(fù)高低溫設(shè)定，并且能夠?qū)崿F(xiàn)高溫高壓滅菌操作，常常被用于PCR耗材的生產(chǎn)。隨著熒光定量PCR技術(shù)的普及，該技術(shù)被廣泛用于遺傳、生化、免疫、醫(yī)藥等領(lǐng)域，不僅應(yīng)用于基因分離、克隆和核酸序列分析等基礎(chǔ)研究，還可用于疾病的診斷或

1分鐘快速搞懂什么是PCR實(shí)驗(yàn)室！2022/11/14: PCR實(shí)驗(yàn)室就是基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室，隨著近兩年疫情的發(fā)展，PCR實(shí)驗(yàn)室逐漸被大家熟知，但是究竟什么是PCR實(shí)驗(yàn)室呢？他的作用是什么呢？今天遠(yuǎn)慕花1分鐘時(shí)間給大家講清楚。一、什么是PCR實(shí)驗(yàn)室？PCR的意思是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，能夠用來(lái)擴(kuò)增DNA，從而將微量的DNA擴(kuò)增到能夠檢測(cè)的程度。比如核酸檢測(cè)用到就是PCR技術(shù)。PCR檢測(cè)一方面是可以診斷疾?。涣硪环矫媸桥袛嗖《緩?fù)制的多少，從而判斷病情嚴(yán)重程度或者治療效果。而PCR實(shí)驗(yàn)室就是為這項(xiàng)檢測(cè)提供的場(chǎng)所。二、PCR實(shí)驗(yàn)室能檢測(cè)什么？PCR實(shí)驗(yàn)室的實(shí)時(shí)熒光定量

普通對(duì)照品與分析對(duì)照品有何不同？2022/11/14: 分析對(duì)照品規(guī)格：22mg/支包裝：安瓿瓶密封性：通過(guò)高溫融封，去瓶中的氧氣達(dá)到與空氣完/全隔離分裝方式：檢測(cè)后直接分裝，數(shù)值保持一致檢測(cè)方法：外標(biāo)法/質(zhì)量守恒法檢測(cè)數(shù)據(jù)：1.采用質(zhì)量平恒法，在被測(cè)物質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)總和為100%的前提下，通過(guò)扣除其中所有雜質(zhì)組分的含量(如水分灰分、溶劑殘留等)，獲得主體物質(zhì)含量值2.外標(biāo)法，系用中國(guó)食品藥品檢定研究院標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行標(biāo)化，采用《中國(guó)藥典》2020版四部通則0512高效液相色譜法定量分析第二法外標(biāo)法，使分析對(duì)照品的含量可溯源至中國(guó)食品藥品檢定研究院，確保結(jié)果

中藥對(duì)照品的作用知多少？對(duì)照品的相關(guān)知識(shí)介紹2022/11/14: 對(duì)照品、標(biāo)準(zhǔn)品、對(duì)照藥材、雜質(zhì)對(duì)照品、對(duì)照溶液等物質(zhì)相信在業(yè)內(nèi)的學(xué)生、朋友都還是非常熟悉的吧，不過(guò)大家也容易互相混淆，本文所將的對(duì)照品其實(shí)只和標(biāo)準(zhǔn)品一樣，他們兩個(gè)的關(guān)系比較大，因?yàn)樗麄儍煞N分類都是我們?cè)跍y(cè)量和校準(zhǔn)藥品當(dāng)中不可/或缺的部分。一般來(lái)說(shuō)，我們?cè)谘芯恳环N新藥品的時(shí)候就需要用到對(duì)照品起到對(duì)照的作用，生物公司一般用的比較多。不過(guò)，對(duì)照品的全部作用以及相關(guān)知識(shí)都了解嗎？接下來(lái)就讓遠(yuǎn)慕帶大家來(lái)看看吧。首先，我們需要知道的是，在國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)中，對(duì)照品可以用于檢驗(yàn)、鑒定、含量測(cè)定、雜質(zhì)及相關(guān)物質(zhì)的檢

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