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2020
03-16

細(xì)胞凋亡檢測(cè)技術(shù)與方法（二）
3．mRNA水平的檢測(cè)研究者們發(fā)現(xiàn)了很多在細(xì)胞凋亡時(shí)表達(dá)異常的基因，檢測(cè)這些特異基因的表達(dá)水平也成為檢測(cè)細(xì)胞凋亡的一種常用方法。據(jù)報(bào)道，F(xiàn)as蛋白結(jié)合受體后能誘導(dǎo)癌細(xì)胞中的細(xì)胞毒性T細(xì)胞（cytotoxicTcells）等靶細(xì)胞。Bcl-2和bcl-X（長(zhǎng)的）作為抗凋亡（bcl-2和bcl-X）的調(diào)節(jié)物，它們的表達(dá)水平比例決定了細(xì)胞是凋亡還是存活。一般多采用Northern雜交和RT-PCR走膠對(duì)它們進(jìn)行檢測(cè)。隨著近年來(lái)熒光定量PCR技術(shù)的發(fā)展，用定量PCR技術(shù)來(lái)檢測(cè)基因表達(dá)水平無(wú)疑比之前者更快
2020
03-16

細(xì)胞凋亡檢測(cè)技術(shù)與方法
1．早期檢測(cè):1）PS（磷脂酰絲氨酸）在細(xì)胞外膜上的檢測(cè):PS從細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)轉(zhuǎn)移到外側(cè)在細(xì)胞受到凋亡誘導(dǎo)后不久發(fā)生,可能作為免疫系統(tǒng)的識(shí)別標(biāo)志。AnnexinV，一個(gè)鈣依賴(lài)性的磷脂結(jié)合蛋白，能專(zhuān)一性的結(jié)合暴露在膜外側(cè)的PS，再通過(guò)簡(jiǎn)單的顯色或發(fā)光系統(tǒng)進(jìn)行檢測(cè)。由于這是一種凋亡早期的活細(xì)胞檢測(cè)（懸浮細(xì)胞和貼壁細(xì)胞都適用），可與DNA染料或別的晚期檢測(cè)方法相結(jié)合來(lái)標(biāo)記凋亡的發(fā)展階段。美國(guó)著名生物試劑公司CLONTECH和INTERGEN公司分別開(kāi)發(fā)了多種標(biāo)記的AnnexinV產(chǎn)品，簡(jiǎn)便快速，10分鐘就
2020
03-05

血清沉淀的正確處理方法
血清沉淀是什么？血清中經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的沉淀，其成分有多種類(lèi)型，產(chǎn)生的原因有很多，主要有纖維蛋白、磷酸鈣還有一些其它成分。1.纖維蛋白（Fibrin）血清中肉眼可見(jiàn)的沉淀物大多屬于這一類(lèi)型。由于在生產(chǎn)過(guò)程中，血清采集、過(guò)濾（3次0.1μm過(guò)濾）和灌裝處理都是在低溫條件下快速完成,此時(shí)血清中纖維蛋白原（Fibrinogen）處于溶解狀態(tài)。但在解凍之后,血清中纖維蛋白原往往會(huì)發(fā)生凝集，形成肉眼可見(jiàn)的沉淀。下圖是血清因反復(fù)凍融而造成纖維蛋白原的凝集2.磷酸鈣（CalciumPhosphate）這是一
2020
03-04

澳洲胎牛血清產(chǎn)品的高品質(zhì)是毋庸置疑的
一起來(lái)了解下澳洲胎牛血清的相關(guān)知識(shí)點(diǎn)：澳洲胎牛血清的原料血只源自于澳大利亞和新西蘭牧場(chǎng)的胎牛。澳大利亞和新西蘭是*的優(yōu)質(zhì)的牧牛飼養(yǎng)地和胎牛血的來(lái)源地。在擁有得天獨(dú)厚的豐沛牧草條件和濕潤(rùn)氣候的同時(shí)，這兩個(gè)國(guó)家也被歐盟科學(xué)指導(dǎo)委員會(huì)認(rèn)定為瘋牛病非疫區(qū)。因而，以澳洲血源為原料才能產(chǎn)出品質(zhì)、穩(wěn)定性較佳的胎牛血清。源自潔凈的澳洲，從血源采集、加工到質(zhì)檢，整個(gè)過(guò)程遵循行業(yè)高標(biāo)準(zhǔn)，確保高產(chǎn)品品質(zhì)。澳洲胎牛血清產(chǎn)品特點(diǎn)：1.澳大利亞來(lái)源，具有可追溯性2.無(wú)菌心臟穿刺取血3.3次0.1μm無(wú)菌過(guò)濾4.可提供γ射線
2020
03-03

淺析細(xì)胞體外培養(yǎng)
細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是離體方法中主要的一種，是從動(dòng)物體內(nèi)取出細(xì)胞，模擬體內(nèi)的生理環(huán)境，在無(wú)菌、適溫、豐富的營(yíng)養(yǎng)條件下，使離體細(xì)胞生存、生長(zhǎng)并維持結(jié)構(gòu)和功能的一門(mén)技術(shù)。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)是科學(xué)探究的基礎(chǔ)，細(xì)胞實(shí)驗(yàn)服務(wù)可以提供包括細(xì)胞侵襲檢測(cè)、細(xì)胞劃痕檢測(cè)以及細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)等的研究。細(xì)胞體外培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)對(duì)于科學(xué)研究至關(guān)重要，然而在細(xì)胞培養(yǎng)中，常會(huì)因?yàn)椴贿m宜的環(huán)境條件以及不得當(dāng)?shù)牟僮鲗?dǎo)致細(xì)胞被污染。在細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中如何避免污染是一項(xiàng)很重要的工作，現(xiàn)在我們來(lái)看一下細(xì)胞體外培養(yǎng)中常見(jiàn)的污染種類(lèi)，以及避免方法。1、外源性污染外源性
2020
02-20

關(guān)于細(xì)胞不貼壁的原因及解決方法
關(guān)于細(xì)胞不貼壁的原因：1、胰蛋白酶消化過(guò)度。2、支原體污染。3、培養(yǎng)基pH值過(guò)堿（NaHCO3分解）。4、細(xì)胞老化。5、接種細(xì)胞起始濃度太低或太高。關(guān)于細(xì)胞不貼壁的解決方法：1、縮短胰蛋白酶消化時(shí)間或降低胰蛋白酶濃度。2、分離培養(yǎng)物，檢測(cè)支原體。清潔支架或培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物。3、使用無(wú)菌醋酸溶液調(diào)整pH值或充入無(wú)菌CO2。4、啟用新的保種細(xì)胞。5、調(diào)節(jié)好接種細(xì)胞濃度。
2020
02-19

南美胎牛血清有哪些作用呢？
南美胎牛血清使用方法：在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，經(jīng)常加入5%-20%的Gibco胎牛血清，常使用的胎牛血清濃度是10%。高濃度的血清可能改變細(xì)胞的基因表達(dá)譜，影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，我們?cè)趯?shí)驗(yàn)中使用10%的胎牛血清培養(yǎng)293T細(xì)胞，效果非常好。但是有些細(xì)胞也會(huì)使用5%的Gibco胎牛血清或者20%的Gibco胎牛血清，要根據(jù)具體細(xì)胞選擇合適的胎牛血清濃度。南美胎牛血清作用：1.提供對(duì)維持細(xì)胞指數(shù)生長(zhǎng)的激素，基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒(méi)有或量很少的營(yíng)養(yǎng)物，以及主要的低分子營(yíng)養(yǎng)物。2.提供結(jié)合蛋白，能識(shí)別維生素、脂類(lèi)、金屬和
2020
02-17

BEN細(xì)胞的注意事項(xiàng)
1、收到細(xì)胞后首先觀察T-25瓶是否有損壞、漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。2、瓶中運(yùn)輸?shù)呐囵B(yǎng)液不能重復(fù)使用，請(qǐng)換新鮮培養(yǎng)液培養(yǎng)。3、對(duì)于貼壁細(xì)胞，若大部分細(xì)胞漂浮，置于培養(yǎng)箱隔夜觀察，大部分漂浮細(xì)胞重新貼壁，表明細(xì)胞活力正常，繼續(xù)培養(yǎng)，剩余漂浮的細(xì)胞可以去掉；若大部分細(xì)胞仍然不貼壁，將漂浮的細(xì)胞離心收集，用臺(tái)盼藍(lán)染色鑒定細(xì)胞活力，并與本公司銷(xiāo)售人員及時(shí)聯(lián)系。4、建議客戶收到細(xì)胞后不同倍鏡各拍幾張細(xì)胞的照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，如細(xì)胞狀態(tài)出現(xiàn)問(wèn)題請(qǐng)于一周內(nèi)與本公司銷(xiāo)售聯(lián)系，以便于更
2020
02-13

人黑色素瘤貼壁細(xì)胞如何培養(yǎng)
人黑色素瘤貼壁細(xì)胞培養(yǎng)方法如下：1、從手術(shù)室無(wú)菌取腦髓灰質(zhì)或白質(zhì)后，仔細(xì)剝除腦膜、血管和纖維成分，置Hanks液中漂洗一、二次。2、置于30—50倍體積的Hanks液中，此時(shí)腦組織比較柔軟，反復(fù)吹打即制成細(xì)胞懸液。3、把懸液注入離心管室溫中直立5—10分鐘后，細(xì)胞或細(xì)胞團(tuán)快自然下沉，脂肪等雜物易漂浮，可吸除上層、反復(fù)二、三次，即可排除脂肪成分和其它碎塊并獲較多細(xì)胞成分。4、在沉降物中加入適量培養(yǎng)液，通過(guò)紗網(wǎng)成紗布過(guò)濾，計(jì)數(shù)并調(diào)整細(xì)胞密度。5、接入培養(yǎng)瓶或皿中，置5%CO2溫箱中培養(yǎng)。適應(yīng)環(huán)境過(guò)程
2020
02-10

細(xì)胞培養(yǎng)步驟及注意事項(xiàng)
細(xì)胞培養(yǎng)步驟：1.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：①準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基（F-12K:GIBCO,貨號(hào)：21127-022);北美胎牛血清，10%;PS1%。②培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%;二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。③凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。2.細(xì)胞處理：①?gòu)?fù)蘇細(xì)胞：將含有l(wèi)mL細(xì)胞懸液的凍存管在37°C水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加l-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)
2020
02-06

Hyclone培養(yǎng)基的選購(gòu)需要注意哪些內(nèi)容？
Hyclone培養(yǎng)基是通過(guò)代謝途徑設(shè)計(jì)開(kāi)發(fā)的調(diào)節(jié)友好的培養(yǎng)基，以增加制備抗體和抗體片段的工藝產(chǎn)量，用于多種工程雜交瘤和重組骨髓瘤細(xì)胞系中的治療用途。培養(yǎng)基是一種含各種氨基酸和葡萄糖的培養(yǎng)基，是在MEM培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上研制的。與MEM比較增加了各種成分用量，同時(shí)又分為高糖型（低于4500mg/L）和低糖型（低于1000mg/L）。高糖型有利于細(xì)胞停泊于一個(gè)位置生長(zhǎng)，適于生長(zhǎng)較快、附著較困難腫瘤細(xì)胞等。Hyclone培養(yǎng)基特色：1.FBS和其它血清多樣化的血清產(chǎn)品，包括胎牛血清(FBS)；其它血清類(lèi)型
2020
01-19

牛胚氣管細(xì)胞培養(yǎng)常見(jiàn)問(wèn)題及解決方案
牛胚氣管細(xì)胞培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。細(xì)胞處理：1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下
2020
01-16

購(gòu)買(mǎi)的人肺大靜脈平滑肌細(xì)胞收到后要注意的事項(xiàng)
1、收到人肺大靜脈平滑肌細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們。2、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等。3、用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落，將細(xì)胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)過(guò)夜，隔天再取出觀察。此時(shí)多數(shù)細(xì)胞均會(huì)貼壁，若細(xì)胞仍不能貼壁請(qǐng)用臺(tái)盼藍(lán)染色測(cè)定細(xì)胞活力，如果證實(shí)細(xì)胞活力正常，請(qǐng)將細(xì)胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng)；如果染色結(jié)果顯示細(xì)胞無(wú)活力
2020
01-15

活性炭胎牛血清的解凍
活性炭胎牛血清質(zhì)量非常好，用途比較廣，適用于各種癌細(xì)胞株，嬌貴細(xì)胞，原代細(xì)胞，干細(xì)胞（胚胎干細(xì)胞，間充質(zhì)干細(xì)胞等）培養(yǎng)。注意事項(xiàng)：有少量蛋白質(zhì)結(jié)塊析出不影響使用。未融化或融化未經(jīng)搖勻的血清禁止直接放入高溫水浴內(nèi)加溫。減少血清重復(fù)凍融。血清在室溫或4℃冰箱內(nèi)放置過(guò)久會(huì)影響促細(xì)胞生長(zhǎng)效果?；钚蕴刻ヅＱ宀勺孕挛魈m源健康母牛的出生前胎牛，經(jīng)無(wú)菌采集、批量混合，經(jīng)過(guò)3次0．1um過(guò)濾分裝。在此基礎(chǔ)上，經(jīng)過(guò)活性炭和葡聚糖處理，以降低血清中多種激素和生長(zhǎng)因子水平?；钚蕴?葡聚糖FBS已經(jīng)被證實(shí)可以有效降低類(lèi)
2020
01-09

牛血清具有極為重要的功能
1、牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中用量大的天然培養(yǎng)基，含有豐富的細(xì)胞生長(zhǎng)必須的營(yíng)養(yǎng)成份，常用于動(dòng)物細(xì)胞的體外培養(yǎng)，具有極為重要的功能。2、起酸堿度緩沖液作用。3、牛血清是細(xì)胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來(lái)源。4、有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合，起到解毒作用。5、提供蛋白酶抑制劑，使在細(xì)胞傳代時(shí)使剩余胰蛋白酶失活，保護(hù)細(xì)胞不受傷害。6、提供對(duì)維持細(xì)胞指數(shù)生長(zhǎng)的激素，基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒(méi)有或量很少的營(yíng)養(yǎng)物，以及主要的低分子營(yíng)養(yǎng)物。7、提供結(jié)合蛋白，能識(shí)別維生素、脂類(lèi)、金屬和其他激素等，能結(jié)合或調(diào)變
2020
01-09

流式細(xì)胞術(shù)常見(jiàn)技術(shù)問(wèn)題解答
⒈用于做Western或ELISA的一抗可否用于流式細(xì)胞術(shù)？看你說(shuō)明書(shū)上是怎么說(shuō)的了，如果沒(méi)有說(shuō)就不可以做流式，需要另外買(mǎi)了。⒉請(qǐng)問(wèn)流式細(xì)胞術(shù)單抗直接熒光需要幾種對(duì)照？首先確認(rèn)你用的直標(biāo)抗體的熒光染料是什么，再確定該抗體的來(lái)源種屬，選擇相應(yīng)的同型對(duì)照。如：你現(xiàn)在想檢測(cè)小鼠淋巴細(xì)胞表面的CD4抗原，熒光染料為FITC，抗體來(lái)源為大鼠的IgG1亞型，即RatantiMouseCD4-FITC（IgG1），你所需要的同型對(duì)照就應(yīng)該是RatIgG1-FITC，一般的抗體說(shuō)明上都會(huì)寫(xiě)清。⒊6孔板的細(xì)胞量能
2020
01-06

elisa試劑盒該如何挑選
elisa試劑盒是一種利用抗體/抗原反應(yīng)和終的顏色變化來(lái)檢測(cè)物質(zhì)含量的檢測(cè)方法。酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒（ELISAKits）已成為藥物和植物病理學(xué)研究中的常用診斷工具，也是很多行業(yè)重要的質(zhì)量控制手段。ELISA試劑盒是檢測(cè)組織提取液、血清和細(xì)胞培養(yǎng)液中目標(biāo)抗體/抗原的理想工具。ELISA試劑盒可特異性定量測(cè)定疾病相關(guān)蛋白，包括細(xì)胞因子、趨化因子、β淀粉樣蛋白與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)靶標(biāo)。elisa試劑盒產(chǎn)品特點(diǎn)：*品質(zhì)—高品質(zhì)的抗體和試劑是SigmaELISA試劑盒的基礎(chǔ)精確特異—特異檢測(cè)目標(biāo)分子，結(jié)果精確可重復(fù)
2020
01-02

淺析細(xì)胞體外培養(yǎng)的三大污染原因
細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是離體方法中主要的一種，是從動(dòng)物體內(nèi)取出細(xì)胞，模擬體內(nèi)的生理環(huán)境，在無(wú)菌、適溫、豐富的營(yíng)養(yǎng)條件下，使離體細(xì)胞生存、生長(zhǎng)并維持結(jié)構(gòu)和功能的一門(mén)技術(shù)。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)是科學(xué)探究的基礎(chǔ)，細(xì)胞實(shí)驗(yàn)服務(wù)可以提供包括細(xì)胞侵襲檢測(cè)、細(xì)胞劃痕檢測(cè)以及細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)等的研究。細(xì)胞體外培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)對(duì)于科學(xué)研究至關(guān)重要，然而在細(xì)胞培養(yǎng)中，常會(huì)因?yàn)椴贿m宜的環(huán)境條件以及不得當(dāng)?shù)牟僮鲗?dǎo)致細(xì)胞被污染。在細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中如何避免污染是一項(xiàng)很重要的工作，現(xiàn)在我們來(lái)看一下細(xì)胞體外培養(yǎng)中常見(jiàn)的污染種類(lèi)，以及避免方法。1、外源性污染外源性
2020
01-02

康寧BD基質(zhì)膠有哪些特點(diǎn)
1、康寧BD基質(zhì)膠是從富含胞外基質(zhì)蛋白的EHS小鼠腫瘤中提取出基底膜基質(zhì)，其主要成分有層粘連蛋白、Ⅳ型膠原、巢蛋白、硫酸肝素糖蛋白，還包含生長(zhǎng)因子和基質(zhì)金屬蛋白酶等。在室溫條件下，Matrigel聚合形成具有生物學(xué)活性的三維基質(zhì)，模擬體內(nèi)細(xì)胞基底膜的結(jié)構(gòu)、組成、物理特性和功能，有利于體外細(xì)胞的培養(yǎng)和分化，可用于對(duì)細(xì)胞形態(tài)、生化功能、遷移、侵染和基因表達(dá)等的研究。2、BDMatrigel基質(zhì)膠形成的三維培養(yǎng)基質(zhì)，可促進(jìn)上皮細(xì)胞、肝細(xì)胞、Sertoli細(xì)胞、黑色素瘤細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、甲狀腺細(xì)胞及毛
2019
12-27

HyClone液體培養(yǎng)基使用時(shí)應(yīng)注意事項(xiàng)
HyClone液體培養(yǎng)基在使用過(guò)程中應(yīng)注意以下問(wèn)題：1、運(yùn)輸中要避光冷藏，瓶口保持向上，切勿劇烈振蕩。2、HyClone液體培養(yǎng)基開(kāi)瓶后不要長(zhǎng)時(shí)間暴露在空氣和強(qiáng)光下，以保持培養(yǎng)基的穩(wěn)定性。3、開(kāi)瓶后能在一周內(nèi)用完，短時(shí)間內(nèi)用不完可分裝冷藏保存，但PH值會(huì)在隨后的時(shí)間里慢慢變堿，屬于正?，F(xiàn)象，請(qǐng)放心使用。4、所有液體培養(yǎng)基均經(jīng)100納米無(wú)菌過(guò)濾和出廠嚴(yán)格檢測(cè)，除非需要，請(qǐng)不要私自進(jìn)行二次過(guò)濾和任何形式的無(wú)菌檢測(cè)。

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