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2019
12-27

細(xì)胞分離技術(shù)
原代細(xì)胞的分離和制作人或動(dòng)物體內(nèi)（或胚胎組織）由于多種細(xì)胞結(jié)合緊密，不利于各個(gè)細(xì)胞在體外培養(yǎng)中生長(zhǎng)繁殖，即使采用1mm3的組織塊，也只有少量處于周邊的細(xì)胞可能生存和生長(zhǎng)，若需獲取大量細(xì)胞，必須將現(xiàn)有的組織塊充分散開(kāi)，使細(xì)胞解離出來(lái)，常采用的方法如下：一、懸浮細(xì)胞的分離方法組織材料若來(lái)自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘，若懸液量大，可適當(dāng)延長(zhǎng)離心時(shí)間，但速度不能太高，延時(shí)也不能太長(zhǎng)，以避免擠壓或機(jī)械損傷細(xì)胞，離心沉淀用無(wú)鈣、鎂PBS洗兩次，用培養(yǎng)基洗
2019
12-24

轉(zhuǎn)染的選購(gòu)指南
1、質(zhì)粒轉(zhuǎn)染ThermoFisher可提供種類齊全的陽(yáng)離子脂質(zhì)轉(zhuǎn)染試劑，產(chǎn)品性能出眾，可將質(zhì)粒轉(zhuǎn)入多種細(xì)胞中。2、轉(zhuǎn)染試劑ThermoFisher可提供種類齊全的陽(yáng)離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑，產(chǎn)品性能出眾，可用于DNA、Sirna、寡核苷酸和RNA導(dǎo)入。下表列出了一小部分ThermoFisher提供的陽(yáng)離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑。3、RNAi轉(zhuǎn)染RNA干擾（rnai）技術(shù)在生物學(xué)發(fā)現(xiàn)和驗(yàn)證領(lǐng)域掀起了一場(chǎng)革命。通過(guò)RNAI技術(shù)，可以“關(guān)閉”或降低基因表達(dá)，從而更好地了解該基因的功能及其在疾病中的作用。高效轉(zhuǎn)染是進(jìn)
2019
12-24

動(dòng)物血清的常見(jiàn)問(wèn)題及處理方法
動(dòng)物血清的常見(jiàn)問(wèn)題及處理方法！近在培養(yǎng)細(xì)胞中使用胎牛血清,由于發(fā)現(xiàn)有沉淀,不知是否變質(zhì),在查閱相關(guān)文獻(xiàn)也沒(méi)有得到確切的答案.因此不敢再用原來(lái)的血清,導(dǎo)致浪費(fèi).在這提醒大家做細(xì)胞培養(yǎng)時(shí),要注意血清的分裝.血清是細(xì)胞培養(yǎng)中重要的元素之一。在實(shí)驗(yàn)室操作中要注意的事項(xiàng)及處理方法如下：1.血清保存:建議血清應(yīng)保存在-5至-2O。然而，若存放于4時(shí)，請(qǐng)勿超過(guò)一個(gè)月。若您一次無(wú)法用完一瓶，建議您無(wú)菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi)，再放回冷凍。2.解凍血清的方法:建議您將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8冰箱使之融解
2019
12-20

小牛血清與胎牛血清有何區(qū)別？
小牛血清與胎牛血清之間的區(qū)別：這兩種血清的成份，總體沒(méi)有什么明顯差別，只是有一些成分與其生存環(huán)境有關(guān)。此外，因生長(zhǎng)發(fā)育的需要，有些成分在小牛出生后會(huì)發(fā)生一些變化。不過(guò)還沒(méi)有搞清楚它與其它的血清之間的差別。有一點(diǎn)可以肯定，胎牛血清中的部分功能蛋白與小牛血清中的含量有差別。血清保存和使用須注意：血清應(yīng)保存在-5℃至-20℃，若存放在4℃不可超過(guò)一個(gè)月。解凍血清時(shí)，應(yīng)先將血清至于2-8℃冰箱，并經(jīng)常搖勻使之溶解，然后至室溫放置使之升溫，不可將冷凍的血清直接放入37℃水浴或者溫箱中，如放在37℃解凍，顏
2019
12-17

SCI期刊拒稿率高，寫(xiě)作難，投稿難，那么發(fā)表文章應(yīng)該注意哪些事項(xiàng)？
SCI期刊拒稿率高，寫(xiě)作難，投稿難，那么發(fā)表文章應(yīng)該注意哪些事項(xiàng)？1.吸引力的題目，思路清晰的摘要，漂亮的圖大多數(shù)審稿人審稿的方法是快速看一下文章題目，摘要和圖，所以這三點(diǎn)一定要吸睛。2.標(biāo)題要簡(jiǎn)潔明確，有力字句要簡(jiǎn)明扼要，用詞要準(zhǔn)確恰當(dāng)，多角度考量。3.摘要里不要充斥大量數(shù)字不要自以為或急于表達(dá)而犯錯(cuò)，對(duì)審稿人而言那些可能都是無(wú)足輕重的。4.能用圖盡量用圖表示(包括各種統(tǒng)計(jì)圖)圖片可以很直觀的讓審稿人看到你想要表達(dá)的內(nèi)容，有文字和表格代替不了的作用。SCI期刊一般要求圖片為T(mén)IFF格式，并存為
2019
12-16

購(gòu)買試劑時(shí)應(yīng)注意事項(xiàng)
1、購(gòu)買后，請(qǐng)務(wù)必確認(rèn)標(biāo)簽上的注意事項(xiàng)。2、做好預(yù)防顛倒，摔壞的措施和管理體制。3、必須戴好防護(hù)用具，小心翼翼進(jìn)行操作。4、在使用前再次確認(rèn)標(biāo)簽上的注意事項(xiàng)，做好必要的安全對(duì)策。5、對(duì)沒(méi)有標(biāo)明其危險(xiǎn)特性，有害特性的，也要慎重地進(jìn)行操作。6、對(duì)于使用后的廢棄物，不要或舊的試劑，應(yīng)按照相關(guān)法律法規(guī)正當(dāng)處理。7、操作者并非專業(yè)技術(shù)人員，必須在專業(yè)人士的指導(dǎo)監(jiān)督下進(jìn)行操作。8、請(qǐng)參照相關(guān)法規(guī)，文獻(xiàn)，MSDS等信息，理解并掌握好其特性，再進(jìn)行安全操作。9、通常購(gòu)買試劑時(shí)要想到一次性用完，若估算不足有剩余的
2019
12-13

干細(xì)胞的分類和不同功能
細(xì)胞（stem-cell）即為起源細(xì)胞，是指尚未發(fā)育成熟的細(xì)胞，它具有多分化潛能和自我復(fù)制的功能，在特定條件下，可以分化成不同的功能細(xì)胞，形成多種組織和器官。這是繼藥物治療和手術(shù)治療后有又一場(chǎng)醫(yī)療革命，被稱之為醫(yī)學(xué)上的奇跡。根據(jù)其分化潛能不同，可分為全能干細(xì)胞、多能干細(xì)胞、單能干細(xì)胞。1、全能干細(xì)胞：具有自我更新和分化形成任何類型細(xì)胞的能力，有形成完整個(gè)體的分化潛能，如胚胎干細(xì)胞，目前許多研究工作都是以小鼠胚胎干細(xì)胞為研究對(duì)象展開(kāi)的，在生產(chǎn)克隆動(dòng)物、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物、等方面都有重要意義。國(guó)內(nèi)對(duì)于人類胚
2019
12-12

澳洲源胎牛血清質(zhì)量檢定指標(biāo)
1、澳洲源胎牛血清內(nèi)毒素檢測(cè)：凝膠法和動(dòng)態(tài)濁度法要求內(nèi)毒素含量≤10EU/ml。2、化學(xué)檢定：包括滲透壓(240~340)、pH(7.0~8.0)、總蛋白含量(3.5~5.0%)、血紅蛋白(≤0.02%)。3、澳洲源胎牛血清微生物檢查：細(xì)菌和真菌——直接培養(yǎng)法、噬菌體——噬斑法和增殖法支原體——培養(yǎng)法和DNA染色法、牛病毒——細(xì)胞培養(yǎng)法。要求均為陰性。4、促細(xì)胞生長(zhǎng)測(cè)定：(SP2/0-Ag14標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定)a.大增殖濃度≥1.0×106個(gè)/ml、倍增時(shí)間≤20小時(shí)克隆率=(陽(yáng)性孔平均數(shù)/培養(yǎng)孔總數(shù))
2019
12-02

貼壁/懸浮細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染-RFect質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染操作步驟和注意事項(xiàng)
本文以RFectPlasmidDNATransfectionReagent（RFect質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染試劑盒），作為攜帶質(zhì)粒穿膜的載體物質(zhì)，具體介紹DNA轉(zhuǎn)染方法。圖.用本產(chǎn)品4ul轉(zhuǎn)染1ugpEGFP-C2質(zhì)粒到293T細(xì)胞后，綠色熒光蛋白的表達(dá)情況。貼壁/懸浮細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染-RFect質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染方法步驟:一、貼壁/懸浮細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染操作流程（以24孔板轉(zhuǎn)染為例）A.細(xì)胞接種:1.轉(zhuǎn)染前24小時(shí)左右對(duì)細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)接，接種密度約為每孔0.3~1×105個(gè)細(xì)胞；2.過(guò)夜培養(yǎng)。B.RFect/DNA復(fù)合
2019
11-23

細(xì)胞培養(yǎng)中如何防止黑點(diǎn)生成，如果生產(chǎn)如何處理！
1、盡可能地減少血清凍融次數(shù)。2、培養(yǎng)基無(wú)需37℃水浴。3、培養(yǎng)基保持PH值7.0-7.2。4、嚴(yán)格控制配制培養(yǎng)基的水質(zhì)，容器定期刷洗。5、掌握細(xì)胞傳代的時(shí)機(jī)，細(xì)胞切勿生長(zhǎng)過(guò)老。6、一旦您在細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)有黑點(diǎn)生成，首先，要肉眼觀察培養(yǎng)基是否混濁。7、然后，在鏡下觀察細(xì)胞培養(yǎng)生長(zhǎng)的狀態(tài)，黑點(diǎn)是否游動(dòng)。8、如果細(xì)胞被污染，微生物則會(huì)大量繁殖，培養(yǎng)基就會(huì)迅速變黃、變混濁。9、如果在鏡下觀察細(xì)胞，生長(zhǎng)狀態(tài)良好，與黑點(diǎn)出現(xiàn)前相比，沒(méi)有任何變化，那么，黑點(diǎn)的出現(xiàn)可能與以下幾種情況有關(guān)：1)細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)
2019
11-22

細(xì)胞轉(zhuǎn)染：脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的幾個(gè)實(shí)驗(yàn)方法
實(shí)驗(yàn)原理脂質(zhì)體(LR)試劑是陽(yáng)離子脂質(zhì)體DOTMA和DOPE的混合物(1：1)。它適用于把DNA轉(zhuǎn)染入懸浮或貼壁培養(yǎng)細(xì)胞中，是目前條件下方面的轉(zhuǎn)染方法之一。轉(zhuǎn)染率高，優(yōu)于磷酸鈣法，比它高5-100倍，能把DNA和RNA轉(zhuǎn)染到各種細(xì)胞。用LR進(jìn)行轉(zhuǎn)染時(shí)，首先需要優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件，應(yīng)找出該批LR對(duì)轉(zhuǎn)染某一特定細(xì)胞適合的用量、作用時(shí)間等，對(duì)每批LR都要做。先要固定一個(gè)DNA的量和DNA/LR混合物與細(xì)胞相互作用的時(shí)間，DNA可從1-5ug和孵育時(shí)間6h，開(kāi)始，按這兩個(gè)參數(shù)繪出相應(yīng)LR需用量的曲線，再選用L
2019
11-21

細(xì)胞計(jì)數(shù)與存活測(cè)試實(shí)驗(yàn)介紹
實(shí)驗(yàn)材料0.4%w/vtrypanblue(GibcoBRL15250-061)Erythosinbluishstain取0.1gramErythrosinbluish(SigmaE-9259)及0.05grampreservativemethylparaben(SigmaH-3647)溶于100mlCa/Mgfreesaline血球計(jì)數(shù)盤(pán)及蓋玻片(Hemocytometerａndcoverslip)計(jì)數(shù)器(counter)低倍倒立顯微鏡粒子計(jì)數(shù)器(Coultercounter,CoulterE
2019
11-20

細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)介紹
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)習(xí)和掌握外源基因?qū)胝婧思?xì)胞的主要方法——脂質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染。了解外源基因進(jìn)入的一般性方法，觀測(cè)外源蛋白的表達(dá)（綠色熒光蛋白），為染色準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)材料。二、實(shí)驗(yàn)原理上圖所示是脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染的示意圖，它顯示了外源質(zhì)粒進(jìn)入細(xì)胞的一般過(guò)程。外源基因進(jìn)入細(xì)胞主要有四種方法：電擊法、磷酸鈣法和脂質(zhì)體介導(dǎo)法和病毒介導(dǎo)法。電擊法是在細(xì)胞上短時(shí)間暫時(shí)性的穿孔讓外源質(zhì)粒進(jìn)入；磷酸鈣法和脂質(zhì)體法是利用不同的載體物質(zhì)攜帶質(zhì)粒通過(guò)直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因進(jìn)入細(xì)胞；病毒法是利用包裝了外源基因的病毒感染
2019
11-19

細(xì)胞株與細(xì)胞系的區(qū)別介紹
一、細(xì)胞株細(xì)胞株（CellStrain）：也就是說(shuō)，細(xì)胞株是用單細(xì)胞分離培養(yǎng)或通過(guò)篩選的方法，由單細(xì)胞增殖形成的細(xì)胞群。細(xì)胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個(gè)培養(yǎng)期間始終存在。原代培養(yǎng)物經(jīng)傳代成功后即為細(xì)胞系(cellline)，由原先存在于原代培養(yǎng)物中的細(xì)胞世系所組成。如果不能繼續(xù)傳代，或傳代次數(shù)有限，可稱為有限細(xì)胞系(finitecellline)，如可以連續(xù)培養(yǎng)，則稱為連續(xù)細(xì)胞系(continuouscellline)，培養(yǎng)50代以上并無(wú)限培養(yǎng)下去。所以細(xì)胞株是通過(guò)選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物
2019
11-18

IPS細(xì)胞操作方法
操作規(guī)程一、復(fù)蘇1、事先用Matrix進(jìn)行培養(yǎng)皿/板的包被處理。平時(shí)Matrix保存在-20℃，使用之前放在4℃冰箱或冰上進(jìn)行解凍。待Matrix解凍后，按1：100的比例迅速用PBS液體稀釋。按6孔板每孔加1ml，150px皿加2ml，250px皿加3ml的量加入，加入后迅速搖動(dòng)皿/板，使加入的Matrix*覆蓋整個(gè)皿底。放到37℃培養(yǎng)箱中4小時(shí)，使用前去掉包被液（如果暫時(shí)不使用，用封口膜密封，在4℃冰箱能保存一周）。2、復(fù)蘇前準(zhǔn)備iCell解凍*培養(yǎng)基（iCell解凍液基礎(chǔ)培養(yǎng)基以及iCel
2019
11-12

體外細(xì)胞原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)步驟（1）凍存和復(fù)蘇
一、實(shí)驗(yàn)原理細(xì)胞培養(yǎng)可分為原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)。直接從體內(nèi)獲取的組織細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)為原代培養(yǎng)；當(dāng)原代培養(yǎng)的細(xì)胞增殖達(dá)到一定密度后，則需要做再培養(yǎng)，即將培養(yǎng)的細(xì)胞分散后，從一個(gè)容器以1：2或其他比率轉(zhuǎn)移到另一個(gè)或幾個(gè)容器中擴(kuò)大培養(yǎng)，為傳代培養(yǎng)，傳代培養(yǎng)的累積次數(shù)就是細(xì)胞的代數(shù)。細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融，實(shí)驗(yàn)證明這樣可以大限度的保存細(xì)胞活力。目前細(xì)胞凍存多采用甘油或DMSO作保護(hù)劑，這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對(duì)水的通透性，加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少由于冰
2019
11-11

小鼠子宮頸癌細(xì)胞胞培養(yǎng)步驟說(shuō)明
小鼠子宮頸癌細(xì)胞胞培養(yǎng)步驟培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備1)準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基(DMEM,GIBCO,貨號(hào)11965-092),90%;胎牛血清,10%2)培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37C,培并箱濕度為709%-80%。凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存有1mlL細(xì)抱縣液的凍存管迅速放入37C水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖売解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹
2019
11-09

如何操作可避免血清中產(chǎn)生沉淀！
按以下操作可避免血清沉淀的產(chǎn)生：1、解凍血清時(shí)，請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生。2、血清分裝凍存時(shí)，須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡)，使溫度與成分均一。3、血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無(wú)須做此步驟。4、勿直接由-20℃直接至37℃解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。5、勿將血清置于37℃太久，否則血清會(huì)變得渾濁，同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成份也會(huì)因此受到破壞，從而影響血清的品質(zhì)。6、若必須做血清的熱滅活，請(qǐng)遵守56℃，30分鐘的原則，并
2019
11-08

大鼠原代細(xì)胞分離與培養(yǎng)
一、大鼠神經(jīng)元細(xì)胞（酶消化法）簡(jiǎn)述：新生24h或E18胎鼠，取腦，剝離海馬，剪碎，木瓜酶消化，清洗過(guò)篩后鋪于多聚賴氨酸包被的培養(yǎng)板中。二、大鼠雪旺細(xì)胞（植塊法）簡(jiǎn)述：新生24h大鼠，取坐骨神經(jīng)，剝?nèi)ネ饽ず褪?，剪?mm3的小塊，均勻鋪于培養(yǎng)皿內(nèi)，加少量血清，37℃CO2培養(yǎng)2h后，再加入培養(yǎng)基，24-48h后有細(xì)胞爬出。三、大鼠胰島（酶消化加密度梯度離心）簡(jiǎn)述：SD大鼠，常規(guī)麻醉、固定、消毒、進(jìn)腹、膽總管插管，逆行注入預(yù)冷的１mg/ml膠原酶P溶液10ml。迅速取下胰腺，38℃水浴消化10分鐘
2019
11-06

智能細(xì)胞成像系統(tǒng)
智能細(xì)胞成像系統(tǒng)創(chuàng)新的采用全觸屏控制，可以*替代復(fù)雜的顯微操作，讓實(shí)驗(yàn)室工作從此變得輕松有趣。同時(shí)科研級(jí)成像系統(tǒng)保證了一liu的成像效果，全外殼防水的一體化設(shè)計(jì)實(shí)現(xiàn)了細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)置，在做普通顯微觀察時(shí)可以令整個(gè)操作過(guò)程變得簡(jiǎn)單而流暢。用途：內(nèi)置于CO2培養(yǎng)箱，進(jìn)行細(xì)胞成像應(yīng)用。工作條件;(1)環(huán)境溫度：0-40℃(2)相對(duì)濕度：0-100%RH(3)工作電壓：100-250V強(qiáng)大的配置和功能:(1)配置了內(nèi)置電池模塊，也可通過(guò)電源插口外接電源。(2)內(nèi)置8G數(shù)據(jù)儲(chǔ)存空間，可通過(guò)USB導(dǎo)出數(shù)據(jù)。(

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