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2019
09-20

干細(xì)胞培養(yǎng)制造技術(shù)新進(jìn)展！
干細(xì)胞培養(yǎng)制造技術(shù)新進(jìn)展！干細(xì)胞是一種能夠長期存活，且具有不斷自我繁殖能力和多向化潛能，幾乎存在于所有組織中的原始細(xì)胞。近年來隨著科學(xué)家們研究的深入，干細(xì)胞在血液系統(tǒng)疾病、神經(jīng)系統(tǒng)疾病、心血管疾病、自身免疫系統(tǒng)疾病以及內(nèi)分泌疾病等各種疾病的治療上讓人們看到了希望。干細(xì)胞技術(shù)是當(dāng)今醫(yī)學(xué)研究前沿也是熱門的方向之一，近年來發(fā)展迅猛，也取得了令人興奮的成果；同時科學(xué)家們在干細(xì)胞的培養(yǎng)制造上也取得了巨大的成就，近日刊登在CellStemCell上的一項研究報告中，來自麻省總醫(yī)院的科學(xué)家就開發(fā)出了一種新程序
2019
09-19

細(xì)胞培養(yǎng)中主要過程說明
1.準(zhǔn)備工作準(zhǔn)備工作的內(nèi)容包括器皿的清洗、干燥與消毒，培養(yǎng)基與其他試劑的配制、分裝及滅菌，無菌室或超凈臺的清潔與消毒，培養(yǎng)箱及其他儀器的檢查與調(diào)試等。2.取材在無菌環(huán)境下從機體取出某種組織細(xì)胞（視實驗?zāi)康亩ǎ?，?jīng)過一定的處理（如消化分散細(xì)胞、分離等）后接入培養(yǎng)器血中，這一過程稱為取材。如是細(xì)胞株的擴大培養(yǎng)則無取材這一過程。機體取出的組織細(xì)胞的培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)。理論上講各種動物和人體內(nèi)的所有組織都可以用于培養(yǎng)，實際上幼體組織（尤其是胚胎組織）比成年個體的組織容易培養(yǎng)，分化程度低的組織比分化高的容
2019
09-18

細(xì)胞凍存與復(fù)蘇的實驗方案
實驗原理：凍存和復(fù)蘇的原則：慢凍快融。當(dāng)細(xì)胞冷到零度以下，可以產(chǎn)生以下變化：細(xì)胞器脫水，細(xì)胞中可溶性物質(zhì)濃度升高，并在細(xì)胞內(nèi)形成冰晶。如果緩慢冷凍，可使細(xì)胞逐步脫水，細(xì)胞內(nèi)不致產(chǎn)生大的冰晶；相反，結(jié)晶就大，大結(jié)晶會造成細(xì)胞膜、綱胞器的損傷和破裂。復(fù)蘇過程應(yīng)快融，目的是防止小冰晶形成大冰晶，即冰晶的重結(jié)晶。復(fù)蘇細(xì)胞應(yīng)采用快速融化的方法，這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時間內(nèi)即融化，避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對細(xì)胞造成損傷。實驗材料15ml離心管、培養(yǎng)皿、滴管、酒精燈、培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)
2019
09-16

影響細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的6大因素
轉(zhuǎn)染是將外源性基因?qū)爰?xì)胞內(nèi)的一種專門技術(shù)。分為物理介導(dǎo)方法：電穿孔法、顯微注射和基因槍；化學(xué)介導(dǎo)方法：如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法、和多種陽離子物質(zhì)介導(dǎo)的技術(shù)；生物介導(dǎo)方法：有較為原始的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)染，和現(xiàn)在比較多見的各種病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)。理想細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法，應(yīng)該具有轉(zhuǎn)染效率高、細(xì)胞毒性小等優(yōu)點。病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)，是目前轉(zhuǎn)染效率快的方法，同時具有細(xì)胞毒性很低的優(yōu)勢。但是病毒轉(zhuǎn)染方法的準(zhǔn)備程序復(fù)雜，常常對細(xì)胞類型有很強的選擇性，在一般實驗室中很難普及。其它物理和化學(xué)介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染方法，則各
2019
09-12

貼壁細(xì)胞傳代的培養(yǎng)技巧
如何傳代貼壁細(xì)胞？細(xì)胞在培養(yǎng)瓶長成致密單層后，已基本上飽和，為使細(xì)胞能繼續(xù)生長，同時也將細(xì)胞數(shù)量擴大，就必須進(jìn)行傳代（再培養(yǎng)）。傳代培養(yǎng)也是一種將細(xì)胞種保存下去的方法。同時也是利用培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行各種實驗的必經(jīng)過程。懸浮型細(xì)胞直接分瓶就可以，而貼壁細(xì)胞需經(jīng)消化后才能分瓶。一般使用蛋白水解酶（比如胰蛋白酶）消化貼壁細(xì)胞成單個細(xì)胞，也可加入乙二胺四乙酸（EDTA）提高消化能力，EDTA是一種二價離子的螯合劑，能抑制細(xì)胞膜上的Ca2+和Mg2+。常用的細(xì)胞消化液一般含有0.25%(w/v)的胰酶和0.03
2019
09-10

原代細(xì)胞分離與培養(yǎng)方法介紹
凡是來源于胚胎、組織器官及外周血，經(jīng)特殊分離方法制備而來的原初培養(yǎng)的細(xì)胞稱之為原代細(xì)胞。原代細(xì)胞的培養(yǎng)也叫初代培養(yǎng)是從供體取得組織細(xì)胞在體外進(jìn)行的培養(yǎng)，是建立細(xì)胞系的DI一步，是一項基本技術(shù)。原代細(xì)胞接近和能反映體內(nèi)生長特性，適宜用于藥物敏感性試驗、細(xì)胞分化等實驗研究。方法1.組織塊培養(yǎng)法組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶（或皿）中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長。2.消化培養(yǎng)法組織消化法是
2019
09-09

使用血清應(yīng)該注意的事項
關(guān)于血清使用的幾點建議1、血清必須貯存-20℃，如存放于4℃，請勿超過兩周，對于某些單位一次無法用完一瓶，可在無菌條件下將其40-45ml分裝于無菌50ml離心管中（或血清瓶中），由于血清解凍時體積會增加10％，必須預(yù)留此膨脹體積的空間，否則易發(fā)生污染或容器凍裂的情形。2、一般公司所提供的血清一般為200ml和500ml裝量，因此建議在使用中宜采取逐步解凍的方法解凍血清：-20℃→4℃冰箱或冷庫溶解24小時→室溫下全溶后再分裝，一般以50ml無菌離心管中分裝40-45ml。使用過程中要特別注意，
2019
09-03

增加你的科研文章影響力的8招
增加你的科研文章影響力的八招看到中國的論文數(shù)已經(jīng)，但引用量仍舊不盡人意。怎樣提高文章的引用量越來越引起人們的重視，因為引用量從一個角度反映出文章影響科學(xué)同行的程度，雖然正負(fù)影響都有可能。我不是大牛，自己文章的引用率也不算高。這里我談?wù)勛约簻\薄的想法和體會，希望能拋磚引玉，共同促進(jìn)我國科學(xué)的發(fā)展和影響力。1.酒香不怕巷深，好文不怕沒人看。很明顯，重要的是文章的質(zhì)量。很多諾貝爾獎級的文章并不是發(fā)表在《Nature》或《Science》上的。好文章發(fā)表在二流雜志上剛開始沒人注意，但只要被人發(fā)現(xiàn)它的真正
2019
09-02

細(xì)胞培養(yǎng)新手應(yīng)該注意的地方
培養(yǎng)細(xì)胞是醫(yī)學(xué)研究生的基本功。細(xì)胞嬌貴，一不小心容易出問題。作為新手培養(yǎng)細(xì)胞要注意那些呢。1、不要燒瓶口。大多數(shù)人都喜歡在酒精燈的火焰上關(guān)瓶子，覺得這樣可以避免污染。不知道大家是不是有培養(yǎng)基怎么越用越發(fā)紫的困惑？知道為什么嗎？燒瓶口燒的。培養(yǎng)基一般都是用碳酸/碳酸氫跟作緩沖體系。瓶口在火焰上的時候，熾熱的空氣進(jìn)入瓶內(nèi)。塞緊塞子放入冰箱后，空氣變冷，壓力驟降，培養(yǎng)基中的碳酸就會轉(zhuǎn)化成二氧化碳，釋放出來。培養(yǎng)基中的碳酸少了，當(dāng)然會變堿。如果不燒瓶口的話，你會發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液變堿的速度會大大減慢。（當(dāng)然多多
2019
08-30

細(xì)胞培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染
細(xì)胞培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染1.細(xì)胞培養(yǎng)(HEK293T)1)顯微鏡下觀察細(xì)胞，細(xì)胞生長狀態(tài)良好，去上清；2)加入預(yù)熱的PBS3ml,溫柔地清洗細(xì)胞,棄去PBS；3)用胰蛋白酶消化細(xì)胞，通常75cm2培養(yǎng)瓶的貼壁細(xì)胞用3ml胰蛋白酶于37oC處理5min；4)待細(xì)胞脫落后，加入5mlDMEM培養(yǎng)液(含10%FBS)以終止消化反應(yīng)，并將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移入15ml或50ml離心管中；5)1000rpm離心5min，去除上清；6)加入10mlDMEM培養(yǎng)液(含10%FBS)，重新懸浮細(xì)胞，使細(xì)胞充分打散；7)進(jìn)行細(xì)胞計
2019
08-29

科研實驗室無菌操作
（一）無菌操作前的準(zhǔn)備工作培養(yǎng)材料接種時的無菌操作過程除上述各項操作外，還需完成以下無菌操作步驟，從而獲得接種的無菌培養(yǎng)材料。工作人員無菌操作前需用肥皂刷洗雙手及手臂，并用流水沖凈，并對手臂**后穿戴好**工作服、工作帽和口罩，更換拖鞋，才能進(jìn)入無菌操作區(qū)。如進(jìn)入層流操作室進(jìn)行實驗操作，應(yīng)完成緩沖準(zhǔn)備區(qū)內(nèi)的淋浴、一次更換**衣帽、拖鞋；手臂**、二次更換**防護(hù)衣帽、手套、拖鞋等；再在風(fēng)淋區(qū)進(jìn)行無菌風(fēng)淋后方可進(jìn)入層流操作室。進(jìn)入無菌操作區(qū)后，再用70%～75%的酒精擦拭雙手和前臂，完成無菌操作準(zhǔn)
2019
08-28

影響培養(yǎng)基滅菌效果的因素
培養(yǎng)基滅菌是否*，直接影響科研檢測數(shù)據(jù)，影響培養(yǎng)基滅菌的因素很多，除了培養(yǎng)基內(nèi)雜菌的種類和數(shù)量，滅菌時間長短和溫度高低，還取決于以下幾點營養(yǎng)成分的保持濕熱滅菌時，微生物被殺死的同時，培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分也遭到了一定的破壞，特別是氨基酸和維生素。如在121℃，僅20min，就有59%的賴氨酸和精氨酸及其他堿性氨基酸被破壞，蛋氨酸和色氨酸也有相當(dāng)數(shù)量被破壞。在熱的作用下某些營養(yǎng)成分還可能因受熱而相互之間發(fā)生反應(yīng)，造成培養(yǎng)基中原有營養(yǎng)成分的數(shù)量變化，因而影響培養(yǎng)基質(zhì)量。微生物的耐熱性細(xì)菌芽孢的熱阻較大，滅
2019
08-27

無血清培養(yǎng)基、血清培養(yǎng)基與間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)對比
近來，國家的干細(xì)胞的政策是一個接一個。對應(yīng)的，來自用戶的咨詢也是一個接一個。大多數(shù)的問題是：現(xiàn)在都在說無血清培養(yǎng)基，無血清培養(yǎng)基和血清培養(yǎng)基到底有什么差別？差別很大，從用途方面簡單說下你感受的可能更具體。如果你是提供間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）藥物的，差別在于：1.你拿到產(chǎn)品注冊證的可能性更大、需要提供的資料更少、花的時間更少。2.你的干細(xì)胞產(chǎn)品更安全。3.你的干細(xì)胞產(chǎn)品性能更*。4.你的干細(xì)胞產(chǎn)品質(zhì)量更穩(wěn)定。5.你的細(xì)胞產(chǎn)品干性更好。如果你是做間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）存儲與應(yīng)用的，差別在于：1.你有更
2019
08-23

血清的選擇應(yīng)注意那些事項
1、胎牛血清的選擇市場上的胎牛血清種類繁多，魚龍混雜，很多科研工作者，特別是剛接觸細(xì)胞培養(yǎng)的人，難以分辨血清質(zhì)量的優(yōu)劣。根據(jù)鄙人十多年來血清生產(chǎn)銷售的經(jīng)驗來看一、外觀拿到血清，zui先接觸的是血清外觀，對于缺少細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗的人來說，外觀的判斷尤為重要1、顏色根據(jù)血紅蛋白含量的不同，胎牛血清可表現(xiàn)出黃色或紅色，我國的細(xì)胞培養(yǎng)用血清標(biāo)準(zhǔn)是不高于20mg/dl，實際上，血紅蛋白含量的高低對血清并無直接影響，這個指標(biāo)的意義在于能體現(xiàn)出采血過程的嚴(yán)謹(jǐn)規(guī)范程度，良好的操作能降低血清的溶血。國產(chǎn)血清的采血點很
2019
08-23

細(xì)胞不貼壁、生長緩慢、生長不好、甚至死亡的可能原因及解決方法
在細(xì)胞培養(yǎng)過程中會出現(xiàn)這樣或那樣的問題，客戶遇到的問題從細(xì)胞生長角度來說，針對細(xì)胞不貼壁、生長緩慢、生長不好，甚至死亡的原因，我們做以下分析并提出相對應(yīng)的解決方法。一、培養(yǎng)細(xì)胞不貼壁可能原因：●胰蛋白酶消化過度●支原體污染●培養(yǎng)基pH值過堿（NaHCO3分解）●細(xì)胞老化●接種細(xì)胞起始濃度太低或太高解決方法：●縮短胰蛋白酶消化時間或降低胰蛋白酶濃度●分離培養(yǎng)物，檢測支原體。清潔支架或培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物。●使用無菌醋酸溶液調(diào)整pH值或充入無菌CO2●啟用新的保種細(xì)胞●調(diào)節(jié)接種細(xì)胞濃
2019
08-19

紅細(xì)胞形態(tài)學(xué)診斷技巧（2）
4．特異性紅細(xì)胞形態(tài)改變：（1）刺（棘）狀細(xì)胞或鋸形細(xì)胞（AcaNtbocyte，BurrCells）：在血細(xì)胞表面呈不規(guī)則的、較多的刺狀突出，呈鋸齒狀或刺狀。加EDTA-Na2更顯著。此細(xì)胞由膜質(zhì)改變所致；見于吸收不良反應(yīng)、肝病、脾切除后、PK缺乏性貧血、先天性缺乏β-脂蛋白血癥。（2）刺毛細(xì)胞（Echinocyte）：整個細(xì)胞表面有棘突狀突起，從皺縐圓盤形發(fā)展或皺縮球形，直至棘突消失，見于尿毒癥、PK缺乏癥、輸注低鉀庫血、胃癌、胃潰瘍出血等.（3）裂細(xì)胞（Schlzocyte）：為大小不等、
2019
08-19

紅細(xì)胞形態(tài)學(xué)診斷技巧（1）
1．RBC的Hb、網(wǎng)織RBC、MCV、MCH、MCHC及RBC體積分布寬度（RDW）是判定貧血類型重要依據(jù)：(1)Hb/RBC比值：正常人：Hb/RBC比值為3gHb/L=100萬RBC/μL即3:1。AA、溶血性貧血及繼發(fā)性貧血等屬此類。3:1者即為大細(xì)胞高色素性貧血,(2)網(wǎng)織RBC是新生的RBC，可反映造血機能的好壞。正常情況下為0.5~1.0%,代償性反應(yīng)者多5%。其網(wǎng)織RBC內(nèi)嗜堿性網(wǎng)織增多，代償性功能減低者，低于正常水平。多見于AA，但有不典型AA（1/4）患者可有網(wǎng)織RBC增高。網(wǎng)
2019
08-15

接上期，30年前的無血清培養(yǎng)基里都含啥
三、無血清培養(yǎng)基1979年神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)出現(xiàn)了一個重要進(jìn)展，用化學(xué)添加劑即可維持神經(jīng)細(xì)胞存活與生長而不需要在培養(yǎng)基中添加血清。其工作基礎(chǔ)是用合適的激素、營養(yǎng)物和促貼壁的物質(zhì)的組合置換培養(yǎng)基中的成分，后找到了適合大多數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)的試劑配方，該配方稱為N2，專門用于神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)，早是用在B104大鼠神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系的培養(yǎng)。它的基礎(chǔ)培養(yǎng)基是1：1的DMEM與H12的混合液，添加了胰島素、轉(zhuǎn)鐵蛋白、腐胺和硒。胰島素和胰島素樣生長因子對于大多數(shù)類型細(xì)胞的存活和生長有重要作用，硒是谷胱甘肽產(chǎn)生的合作因子，可能
2019
08-15

深度挖墳，細(xì)胞培養(yǎng)體系的那些老知識
一、基礎(chǔ)培養(yǎng)基絕大多數(shù)培養(yǎng)基是建立在平衡鹽溶液(BSS)基礎(chǔ)上，添加了氨基酸、維生素和其它與血清中濃度相似的營養(yǎng)物質(zhì)。廣泛應(yīng)用的培養(yǎng)基是Eearle`sMEM的混合物，其中含有13種必須氨基酸、8種維生素。而Ham`sF12也包括非必須氨基酸，維生素的范圍亦很廣，另外常規(guī)含有無機鹽和代謝添加劑（例如核苷酸）。MEM/F12這兩種培養(yǎng)基各取1/2，形成神經(jīng)生物學(xué)通用的培養(yǎng)基。Dulbecco`s改良培養(yǎng)基——DMEM，現(xiàn)應(yīng)用于快速生長的細(xì)胞，同MEM含有相同的營養(yǎng)成分，但濃度高出2~4倍。選擇某種
2019
08-14

iPS 優(yōu)化建系方法和安全性
早期建立iPS細(xì)胞的方法為：利用逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)表達(dá)4個Yamanaka因子,然后將細(xì)胞在ES細(xì)胞培養(yǎng)液中培養(yǎng),再用抗性基因篩選多潛能性相關(guān)啟動子的激活，如Oct4和Nanog啟動子，在得到細(xì)胞形態(tài)相似的iPS細(xì)胞后，鑒定iPS細(xì)胞的多潛能性。這些方法構(gòu)建iPS細(xì)胞的效率很低,細(xì)胞多潛能性不均一,而且有內(nèi)在安全問題,如病毒的插入突變c-Myc的致癌性,使其仍無法應(yīng)用于臨床治療。為解決這些安全問題和提高iPS細(xì)胞建系的效率,人們從多方面改進(jìn)構(gòu)建iPS細(xì)胞。1.轉(zhuǎn)座子技術(shù)英國和加拿大科學(xué)家不用病毒載體

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