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2019
11-04

實(shí)用哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)手冊(cè)（下）
細(xì)胞培養(yǎng)所用玻璃及塑料制品的清洗與消毒清洗在組織細(xì)胞培養(yǎng)中，體外細(xì)胞對(duì)任何有害物質(zhì)都非常敏感。微生物產(chǎn)品附帶雜物，上次細(xì)胞殘留物及非營養(yǎng)成分的化學(xué)物質(zhì)，均能影響培養(yǎng)細(xì)胞的生長。因此對(duì)新使用玻璃器皿和重新使用的培養(yǎng)器皿都要嚴(yán)格*的清洗，且要根據(jù)器皿的組成材料不同，選擇不同的清洗方法。玻璃器皿的清洗組織細(xì)胞培養(yǎng)中，使用量大的是玻璃器皿，故工作大的是玻璃器皿的清洗。一般玻璃器皿的清洗包括浸泡、刷洗、浸酸和沖洗四個(gè)步驟。清洗后的玻璃器皿不僅要求干凈透明無油跡，而且不能殘留任何物質(zhì)。（1）浸泡：初次使用和
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10-28

實(shí)用哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)手冊(cè)（中）
細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境1、實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)細(xì)胞培養(yǎng)是一種無菌操作技術(shù)，要求工作環(huán)境和條件必須保證無微生物污染和不受其它有害因素的影響。細(xì)胞培養(yǎng)室和設(shè)計(jì)原則是防止微生物污染和有害因素影響，要求工作環(huán)境清潔、空氣清新，干燥和無煙塵。細(xì)胞培養(yǎng)室的設(shè)計(jì)原則一般是無菌操作區(qū)設(shè)在室內(nèi)較少走動(dòng)的內(nèi)側(cè)，常規(guī)操作和封閉培養(yǎng)于一室，而洗刷消毒在另一室。2、常用設(shè)施及設(shè)備（1）超凈工作臺(tái)：也稱凈化工作臺(tái)，分為側(cè)流式、直流式和外流式三大類。（2）無菌操作間：一般由更衣間、緩沖間和操作間三部分組成。操作間放置凈化工作臺(tái)及二氧化碳培養(yǎng)箱、
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實(shí)用哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)手冊(cè)（上）
細(xì)胞培養(yǎng)基本概念細(xì)胞培養(yǎng)是指從體內(nèi)組織取出細(xì)胞在體外模擬體內(nèi)環(huán)境下，使其生長繁殖，并維持其結(jié)構(gòu)和功能的一種培養(yǎng)技術(shù)。細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)物可以是單個(gè)細(xì)胞，也可以是細(xì)胞群。細(xì)胞培養(yǎng)目的與用途1、科學(xué)研究：藥物研究開發(fā)與基礎(chǔ)研究藥物研究與開發(fā)(1)新藥篩選：如化學(xué)合成藥物藥效研究、中藥有效成分篩選與鑒定等。(2)疫苗研究與開發(fā)：如病毒性疫苗的研究與開發(fā)（肝炎病毒疫苗、艾滋病疫苗等）、腫瘤疫苗(多肽疫苗)等。(3)基因工程藥物研究與開發(fā)：如干擾素研究與開發(fā)，細(xì)胞生長因子研究與開發(fā)等。(4)細(xì)胞工程藥物研究與
2019
10-22

原代細(xì)胞培養(yǎng)中常遇到的誤區(qū)
原代細(xì)胞培養(yǎng)中常遇到的誤區(qū)原代細(xì)胞（primaryculturecell）是指從機(jī)體取出后立即培養(yǎng)的細(xì)胞。有人把培養(yǎng)的第1代細(xì)胞與傳10代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。原代細(xì)胞不僅廣泛應(yīng)用于分子、細(xì)胞生物學(xué)和生物醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)研究，如蛋白質(zhì)組學(xué)、基因組學(xué)、細(xì)胞株（系）研究、DNA，RNA和遺傳學(xué)研究等，還可應(yīng)用于當(dāng)今熱門的生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)如藥物篩選、藥物代謝和毒理研究、癌癥藥物的研究等。原代細(xì)胞在生物醫(yī)藥領(lǐng)域有不可替代性作用，市場前景廣闊。原代細(xì)胞的培養(yǎng)是指直接從機(jī)體取下細(xì)胞、組織和器官后立即進(jìn)行培養(yǎng)。因
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10-21

原代細(xì)胞鑒定技術(shù)
一、形態(tài)學(xué)鑒定1.在倒置顯微鏡中直接觀察活細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特征2.細(xì)胞染色檢查：a)將無菌玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，加細(xì)胞懸液后培養(yǎng)；b)待細(xì)胞長滿玻片后取出，用PBS清洗，之后放于載玻片上，待其自然干燥；c)用PBS/甲醇（1:1）固定15分鐘；d)棄固定液，加合適的染色液染色；e)染色完畢后用清水洗凈，置于空氣中干燥，f)干燥后，用二甲苯透明，光學(xué)樹脂封片后觀察。二、免疫組織細(xì)胞化學(xué)鑒定1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片；2.PBS清洗標(biāo)本3次，各1分鐘；3.4
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原代細(xì)胞傳代技術(shù)
一、貼壁細(xì)胞的消化法傳代1、吸除或倒掉瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液。2、加入1ml左右消化液（胰蛋白酶或與EDTA混合液）輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)瓶，使瓶底細(xì)胞都浸入溶液中。3、消化2-5分鐘后把培養(yǎng)瓶放置在顯微鏡下進(jìn)行觀察，發(fā)現(xiàn)原貼壁的細(xì)胞逐漸趨于圓形，在還未漂起時(shí)，棄去消化液，加入培養(yǎng)液終止消化。4、用吸管將貼壁的細(xì)胞吹打成懸液，分別接種到另外兩到三個(gè)培養(yǎng)瓶中，置37℃培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。第二天觀察貼壁生長情況。二、懸浮細(xì)胞的傳代1、直接傳代①讓懸浮細(xì)胞慢慢沉淀在瓶底后，將上清吸掉1/2-2/3。②用吸管吹打形成細(xì)胞懸液
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10-17

細(xì)胞凍存技術(shù)介紹
細(xì)胞凍存技術(shù)實(shí)驗(yàn)室低溫保存設(shè)備包括：液氮保存箱、液氮罐、-140℃/-150℃深冷低溫保存箱、-86℃超低溫冰箱、程控降溫儀、低溫冰箱（-20℃、-30℃、-40℃）、藥品保存箱、疫苗保存箱、血庫冰箱、層析柜、防爆冰箱、防火冰箱等。檢驗(yàn)冰箱可靠性和制冷能力的方法：1、常規(guī)冰箱放置溫度計(jì)；2、超低溫冰箱放置加熱器、大量樣品或反復(fù)開門1.凍存保護(hù)劑很多化合物都可以作為凍存保護(hù)劑，它們既可以單獨(dú)使用也可以聯(lián)合使用，例如糖、血清和去污劑。雖然凍存沒有的準(zhǔn)則，但是大家普遍認(rèn)為二甲基亞砜（DMSO）和甘油是
2019
10-16

細(xì)胞培養(yǎng)中的常見污染類型
凡是混入細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境中對(duì)細(xì)胞生存有害的成分和造成細(xì)胞不純的異物都可視為污染。細(xì)胞污染可分為三大類：微生物污染、細(xì)胞間交互污染和化學(xué)污染。微生物污染：包括真菌、細(xì)菌、支原體和病毒污染。細(xì)胞間交互污染：指的是非同種的其他細(xì)胞污染化學(xué)污染：指影響細(xì)胞生存的非細(xì)胞所需的化學(xué)成分。一、微生物污染細(xì)菌和真菌污染是較容易發(fā)現(xiàn)的，而病毒、支原體和其他細(xì)胞系的污染是不容易被察覺的。1.細(xì)菌污染時(shí)培養(yǎng)液pH值改變，溶液變渾濁。細(xì)菌的大量增殖導(dǎo)致細(xì)胞液中營養(yǎng)大量消耗，并產(chǎn)生毒素抑制細(xì)胞的生長，終導(dǎo)致細(xì)胞崩解死亡。在有
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10-15

細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)知識(shí)
1.液體培養(yǎng)基的保存是冷藏好？還是冷凍好？要冷藏！因?yàn)橐后w培養(yǎng)基經(jīng)冷凍后再經(jīng)溶化時(shí)，其溶液的PH值會(huì)發(fā)生改變，溶液往往變堿，某些成分溶解也會(huì)受到影響對(duì)細(xì)胞生長不利。故液體培養(yǎng)基一定要存放在冷藏箱中，通常液體培養(yǎng)基在冷藏條件下可存放6個(gè)月~一年。2.液體培養(yǎng)基中谷氨酰胺的作用，及使用方法。幾乎所有的細(xì)胞對(duì)谷氨酰胺有較高的要求，細(xì)胞需要谷氨酰胺合成蛋白質(zhì)，在缺少谷氨酰胺時(shí)，細(xì)胞生長不良而死亡。所以，各種培養(yǎng)液中都含有較大量的谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定，應(yīng)置-20?C冰凍保存，用前加入培養(yǎng)基中
2019
10-14

STR細(xì)胞鑒定意義
導(dǎo)讀：新買到的細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)室傳了幾代的細(xì)胞，又或者儲(chǔ)存于超低溫冰箱幾年不用的細(xì)胞，被污染了么？鑒定正確么？用它做研究會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果么？沒有經(jīng)過相應(yīng)的細(xì)胞鑒定，使用了被污染的細(xì)胞，經(jīng)過大量的實(shí)驗(yàn)，寫出一篇論文，但是結(jié)論被推翻，論文被召回，大量的時(shí)間、物力和人力被浪費(fèi)，一切都要從頭再來。背景介紹應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域的哺乳動(dòng)物細(xì)胞被錯(cuò)誤鑒定和交叉污染的問題，一直是一個(gè)普遍存在的突出問題。據(jù)統(tǒng)計(jì)，國外實(shí)驗(yàn)室有20%左右的細(xì)胞株被錯(cuò)誤鑒定和交叉污染，NIH和ATCC近兩年都對(duì)此發(fā)出呼吁，要求研究者對(duì)細(xì)胞進(jìn)
2019
10-11

細(xì)胞株和細(xì)胞系的區(qū)別
人教版（2002年審定通過的全一冊(cè)）高中生物教材中細(xì)胞株和細(xì)胞系的概念內(nèi)涵與浙科版的概念內(nèi)涵不同甚至*相反。人教版2004年審定通過的《現(xiàn)代生物技術(shù)專題》高中教材就沒有出現(xiàn)這二個(gè)概念。據(jù)資料記載是因?yàn)檫@二個(gè)概念一度混用，導(dǎo)致概念不清。人教版高中生物細(xì)胞株概念強(qiáng)調(diào)結(jié)束原代培養(yǎng)并可以進(jìn)行傳代培養(yǎng)的細(xì)胞群，并不強(qiáng)調(diào)細(xì)胞群的純度；浙科版的細(xì)胞株概念強(qiáng)調(diào)細(xì)胞群的純度，認(rèn)為細(xì)胞株是克隆的結(jié)果。人教版高中生物細(xì)胞系概念強(qiáng)調(diào)這些細(xì)胞已發(fā)生部分遺傳物質(zhì)的改變，帶有癌變的可以傳代培養(yǎng)的細(xì)胞群；浙科版的細(xì)胞系概念強(qiáng)調(diào)
2019
10-09

細(xì)胞株培養(yǎng)過程中常見的問題
細(xì)胞株是用單細(xì)胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法，由單細(xì)胞增殖形成的細(xì)胞群。細(xì)胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個(gè)培養(yǎng)期間始終存在。然而，細(xì)胞株在體外培養(yǎng)的過程中會(huì)出現(xiàn)一些問題，比如：細(xì)胞株無法在培養(yǎng)皿上貼壁生長，細(xì)胞株生長緩慢，細(xì)胞株死亡等。那么該如何解決呢？一、細(xì)胞株無法在培養(yǎng)器皿上貼壁生長1.細(xì)胞株胰酶消化過度：縮短胰酶消化時(shí)間或減少胰酶用量。2.支原體污染：隔離細(xì)胞株，檢測(cè)是否感染支原體；清洗通風(fēng)廚和培養(yǎng)箱，如細(xì)胞株被污染，滅菌處理后丟棄。3.培養(yǎng)基中無附著因子：如果使用的是無血清配方，應(yīng)確保含有附著
2019
10-08

人正常膀胱上皮細(xì)胞 SV-HUC-1 說明書
人正常膀胱上皮細(xì)胞(SV-HUC-1)細(xì)胞介紹這株細(xì)胞是正常輸尿管組織用SV40病毒轉(zhuǎn)染建株的。反復(fù)用非洲綠猴腎細(xì)胞平板測(cè)試檢測(cè)傳染性SV40的生成，結(jié)果都呈陰性。細(xì)胞特性1)來源：膀胱2)形態(tài)：上皮細(xì)胞3)含量：lxl06個(gè)/mL4)污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性5)規(guī)格：T25瓶或者lmL凍存管包裝運(yùn)輸和保存：使用含有胎牛血清的2ml凍存管發(fā)送存活細(xì)胞。收到細(xì)胞后，可在1000RPM，常溫條件下，離心5min后，于潔凈操作臺(tái)棄去上清，加入推薦使用的培養(yǎng)基后轉(zhuǎn)移至l〇cm培養(yǎng)皿或者T
2019
09-29

培養(yǎng)細(xì)胞為啥總是一言不合就抱團(tuán)
細(xì)胞為啥總是一言不合就抱團(tuán)生長？！是細(xì)胞污染了還是正?，F(xiàn)象？是消化不好了還是鋪板有問題？抱團(tuán)細(xì)胞越來越多，怎么樣才能讓細(xì)胞分開生長？請(qǐng)認(rèn)真閱讀以下干貨，看看能否幫您答疑解惑！細(xì)胞抱團(tuán)一定代表細(xì)胞狀態(tài)不好嗎？細(xì)胞生長的時(shí)候肯定是要相互聯(lián)系，大部分的細(xì)胞都是要成片生長的，應(yīng)該仔細(xì)觀察每種細(xì)胞的狀態(tài)，抱團(tuán)并不一定代表不好：1，若細(xì)胞輪廓清晰，可看清楚一個(gè)個(gè)的細(xì)胞，像葡萄一樣，一串串的，就是狀態(tài)好的，說明細(xì)胞在分裂。2，但大部分細(xì)胞抱團(tuán)不是一件好事！如果輪廓消失，出現(xiàn)細(xì)胞融解或細(xì)胞變灰暗、透光性變差，就
2019
09-27

人靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）
細(xì)胞介紹該細(xì)胞來源于人靜脈內(nèi)皮，可在半固體培養(yǎng)基中形成克隆，在免疫抑制小鼠中不能形成腫瘤。細(xì)胞特性1）來源：人靜脈內(nèi)皮2）形態(tài)：內(nèi)皮細(xì)胞3）含量：1x1064）污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性5）規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝運(yùn)輸和保存：可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式：（1）干冰運(yùn)輸，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復(fù)蘇；（2）存活細(xì)胞，收到后應(yīng)繼續(xù)生長，傳代達(dá)到細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，再進(jìn)行凍存。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。收到細(xì)胞后請(qǐng)拍照，3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染，請(qǐng)及時(shí)拍照
2019
09-26

大鼠腎細(xì)胞（NRK-52E）
細(xì)胞特性1）來源：大鼠，正常腎2）形態(tài)：上皮細(xì)胞樣，貼壁生長3）含量：1x106個(gè)/mL4）污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性5）規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝運(yùn)輸和保存：可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式：（1）干冰運(yùn)輸，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復(fù)蘇；（2）存活細(xì)胞，收到后應(yīng)繼續(xù)生長，傳代達(dá)到細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，再進(jìn)行凍存。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。收到細(xì)胞后請(qǐng)拍照，3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染，請(qǐng)及時(shí)拍照與我們聯(lián)系。細(xì)胞接受后的處理：1）收到細(xì)胞后，請(qǐng)檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況
2019
09-25

胎牛血清培養(yǎng)血管平滑肌細(xì)胞常用的方法
胎牛血清培養(yǎng)血管平滑肌細(xì)胞常用的方法有貼塊法(explant)和酶解離法(enzymedisperse)。下面一起來看下這兩種方法。1、貼塊法方法：動(dòng)物經(jīng)頸動(dòng)脈放血后，在無菌操作下迅速取出胸腹主動(dòng)脈段，置于含Hank's液的平皿中漂洗3次，將凝塊洗干凈后剝除外膜的纖維脂肪層，然后縱行切開血管，刮除內(nèi)膜即內(nèi)皮細(xì)胞迅速撕下中膜內(nèi)、中層，切成約1mm寬的小條，浸泡在含血清的Hank's液中，并將撕下小組織塊種植于培養(yǎng)瓶壁。置于37℃恒溫箱，2h左右，取出培養(yǎng)瓶加入20%HyClone胎牛血清的培養(yǎng)液，
2019
09-24

收到細(xì)胞后應(yīng)如何正確的處理
您需要準(zhǔn)備好細(xì)胞所要用到的培養(yǎng)基和相關(guān)試劑,雖然所有的貼壁,半貼壁或者懸浮細(xì)胞處理方式差不多,但是不同的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)條件和處理力度還有試劑的批間差這些問題存在,也會(huì)導(dǎo)致對(duì)細(xì)胞處理不當(dāng),或者環(huán)境的不適應(yīng)而造成細(xì)胞的死亡1.收到細(xì)胞,第1時(shí)間要觀察細(xì)胞形態(tài)是否正常,對(duì)于貼壁細(xì)胞則要注意看貼壁情況是否很好,觀察細(xì)胞密度有疑議及時(shí)咨提供細(xì)胞的技術(shù)人員。由于運(yùn)輸?shù)臅r(shí)間或者溫度的變化,很多貼壁細(xì)胞在盛滿培養(yǎng)基的瓶子里生長的狀態(tài)和平時(shí)有點(diǎn)不一樣,主要是貼壁牢固問冋題。比如29紅,平時(shí)貼壁就不是很牢,在裝滿的培養(yǎng)
2019
09-23

膠原酶消化法—培養(yǎng)臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞
人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞具有高度分化潛能，基因穩(wěn)定、不易突變，不會(huì)引起腫瘤；無需配型、無排異，廣泛應(yīng)用于疾病治療及抗衰老研究。目前，在美容行業(yè)及針對(duì)亞健康群體的應(yīng)用，也越來越引人注目。臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞臍帶是由包膜、華通氏膠、臍靜脈、臍動(dòng)脈臍構(gòu)成。臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞存在于華通氏膠中。由于存在數(shù)量少，用膠原酶消化后獲取的細(xì)胞量很少。另外，一般的膠原酶消化法獲取細(xì)胞時(shí)，膠原酶對(duì)細(xì)胞的傷害較大，培養(yǎng)出來的細(xì)胞狀態(tài)差。貼塊方法培養(yǎng)人臍帶間充質(zhì)細(xì)胞是普遍采用的方法，但是，細(xì)胞從組織中爬出來的時(shí)間長（10-20天，甚
2019
09-23

間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)，無血清培養(yǎng)基與血清培養(yǎng)基相比，有何不同？
近來，國家的干細(xì)胞的政策是一個(gè)接一個(gè)。對(duì)應(yīng)的，來自用戶的咨詢也是一個(gè)接一個(gè)。大多數(shù)的問題是：現(xiàn)在都在說無血清培養(yǎng)基，無血清培養(yǎng)基和血清培養(yǎng)基到底有什么差別？差別很大，從用途方面簡單說下你感受的可能更具體。如果你是提供間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）藥物的，差別在于：1.你拿到產(chǎn)品注冊(cè)證的可能性更大、需要提供的資料更少、花的時(shí)間更少。2.你的干細(xì)胞產(chǎn)品更安全。3.你的干細(xì)胞產(chǎn)品性能更*。4.你的干細(xì)胞產(chǎn)品質(zhì)量更穩(wěn)定。5.你的細(xì)胞產(chǎn)品干性更好。如果你是做間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）存儲(chǔ)與應(yīng)用的，差別在于：1.你有更

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