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PCR反應(yīng)擴增條帶問題全方面解析2025/03/03

PCR(PolymeraseChainReaction)-聚合酶鏈式反應(yīng)，可以選擇性擴增一段DNA序列。其基本步驟是，首先將待擴增的模板DNA變性使之成為單鏈，DNA樣品中，特異性的引物能夠與其互補的序列雜交，在dNTPs和Taq酶存在時，就可以合成模板DNA的互補鏈，反應(yīng)完成后，將反應(yīng)混合物加熱使DNA雙鏈變性，溫度下降后，過量的引物又可以開始第二輪的合成反應(yīng)。這種延伸-變性-退火-延伸的循環(huán)可以重復(fù)多次，使所需要的DNA片段得到特異性的擴增。PCR反應(yīng)擴增條帶分析?主要包括對不同條帶的識別、

細胞系與細胞株的建立解讀2025/02/25

一、概念1、細胞系（CellLine）：原代培養(yǎng)舞經(jīng)首ci傳代成功即成細胞系，由原先存在于原代培養(yǎng)物中的細胞世系（LineageofCells）所組成。2、細胞株（CellStrain）：通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標志物稱為細胞株。細胞株的特殊性質(zhì)或標志必須在整個培養(yǎng)期間始終存在。如果不能繼續(xù)傳代或傳代數(shù)有限，稱為有限細胞株（finitecellstrain）；如果可以連續(xù)傳代，稱為連續(xù)細胞株（continuouscellstrain）。對于人類腫瘤細胞，在體

酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA) 操作步驟詳解2025/02/18

酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)即將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面，使酶標記的抗原抗體反應(yīng)在固相表面進行的技術(shù)。該技術(shù)可用于檢測大分子抗原和特異性抗體等，具有快速、靈敏、簡便、載體易于標準化等優(yōu)點。免疫分析是一種利用特定抗體與抗原或半抗原發(fā)生的高選擇性高特異性識別和結(jié)合原理，對待測抗體或者抗原進行分析測定的方法，酶聯(lián)免疫吸附分析是免疫分析的一種，分三個部分組成：免疫識別，信號輸出和數(shù)據(jù)處理。保證ELISA檢測結(jié)果準確可靠的必要條件有優(yōu)質(zhì)的試劑，良好的儀器和正確的操作。嚴格遵照使用說明規(guī)定操作，

細胞爬片免疫熒光實驗技術(shù)具體步驟2025/02/14

細胞免疫熒光主要用于蛋白定位研究和細胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，細胞免疫熒光技術(shù)是利用免疫技術(shù)和熒光標記技術(shù)相結(jié)合，原理就是利用抗原-抗體反應(yīng)之后，采用熒光標記，標記完成后，顯微鏡下觀察細胞內(nèi)某種抗原成分的多少，從而做出一個定位研究，也可以為細胞內(nèi)信號傳導(dǎo)提供一個明確的指導(dǎo)，細胞免疫熒光具有敏感性強、特異性高、速度快的特點，是目前比較常用的組織學(xué)技術(shù)，也是比較精確的。在進行細胞免疫熒光過程中，需要用到細胞爬片，通過將爬片浸在細胞培養(yǎng)基內(nèi)，細胞在爬片上生長，進而進行細胞的免疫熒光。細胞爬片免疫熒光實驗技術(shù)具體步

PCR引物設(shè)計全方面解讀2025/02/06

PCR引物設(shè)計的目的是為了找到一對合適的核苷酸片段，使其能有效地擴增模板DNA序列。因此，引物的優(yōu)劣直接關(guān)系到PCR的特異性與成功與否。要設(shè)計引物首先要找到DNA序列的保守區(qū)。同時應(yīng)預(yù)測將要擴增的片段單鏈是否形成二級結(jié)構(gòu)。如這個區(qū)域單鏈能形成二級結(jié)構(gòu)，就要避開它。如這一段不能形成二級結(jié)構(gòu)，那就可以在這一區(qū)域設(shè)計引物?，F(xiàn)在可以在這一保守區(qū)域里設(shè)計一對引物。一般引物長度為15~30堿基，擴增片段長度為100~600堿基對。讓我們先看看P1引物。一般引物序列中G+C含量一般為40%~60%。而且四種堿

逆轉(zhuǎn)錄實驗過程問題解析2025/01/21

逆轉(zhuǎn)錄（reversetranscription），也被稱為反轉(zhuǎn)錄，是一種在某些生命過程中自然發(fā)生的過程，其中DNA被用作模板來合成RNA。這與我們通常看到的DNA到RNA的轉(zhuǎn)錄過程相反，因此得名“逆轉(zhuǎn)錄”。這個過程需要逆轉(zhuǎn)錄酶，這是一種特殊的酶，能夠讀取DNA的信息，并將其轉(zhuǎn)化為RNA。逆轉(zhuǎn)錄實驗步驟：1、獲得DNA模板：首先，需要獲得含有要轉(zhuǎn)錄的DNA序列的模板。這可以通過提取樣品中的DNA或從細胞中獲取mRNA來實現(xiàn)。2、合成互補DNA（cDNA）：然后，逆轉(zhuǎn)錄酶使用DNA模板合成cDNA

抗體結(jié)構(gòu)及抗原抗體反應(yīng)概述2025/01/14

抗體的結(jié)構(gòu):抗體是能與抗原特異性結(jié)合的免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)。Ig分五類，即IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。與免疫測定有關(guān)的Ig主要為IgG和IgM。Ig由兩個輕鏈（L）和兩個重鏈（H）的單體組成。Ig的輕鏈是相同的，有κ（kappa）和λ（Lambda）兩種型別。五類Ig的重鏈結(jié)構(gòu)不同，這決定了它們的抗原性也不同。IgG和IgM的重鏈分別稱為γ（gamma）鏈和μ（mu）鏈。重鏈和輕鏈的N端的氨基酸排列順序因各種抗體而異，稱為可變區(qū)，分別用VH和VL表示。兩者

蛋白質(zhì)印跡（WB）實驗操作步驟2025/01/07

WB，蛋白質(zhì)印跡(Westernblotting)又稱免疫印跡(immunoblotting)，是根據(jù)抗原抗體的特異性結(jié)合檢測復(fù)雜樣品中的某種蛋白的方法。該法是在凝膠電泳和固相免疫測定技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新的免疫生化技術(shù)，具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫測定的高特異性和敏感性，現(xiàn)已成為蛋白分析的一種常規(guī)技術(shù)。免疫印跡常用于鑒定某種蛋白，并能對蛋白進行定性和半定量分析。WB實驗操作步驟：1、收集蛋白樣品蛋白提取的質(zhì)量直接決定著WB結(jié)果的好壞，因此，根據(jù)標本類型和檢測類型選擇合適的蛋白制

抗體特異性及交叉反應(yīng)分析2024/12/24

抗體（antibody，Ab）是機體在體內(nèi)存在的外來分子、微生物等抗原物質(zhì)刺激下，由B淋巴細胞或記憶細胞增殖分化成的漿細胞所產(chǎn)生的、可與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合的免疫球蛋白（immunoglobulins，Ig），主要分布在血清中，也分布于組織液及外分泌液中?？贵w特異性鑒定是免疫化學(xué)技術(shù)中，確?？乖?抗體反應(yīng)專一性的基礎(chǔ)。從根本上驗證特異性，投稿國際期刊，常常需要準備這方面數(shù)據(jù)。鑒定抗體的特異性有四種基本方法：分子遺傳法、獨立抗體驗證法、正交法和標簽蛋白法。四種方法并非必須同時采用。通常，根據(jù)實驗

土壤檢測項目及一般流程2024/12/17

自然界的土壤由有機質(zhì)、礦物質(zhì)、土壤空氣和土壤水分三相物質(zhì)所組成，所以土壤檢測前需要的準備工作有檢測儀器、土壤取樣器、樣品制備、土壤檢測等基本方法。如果要檢測一塊苗圃的土地，需要選擇一塊具有代表性的土壤進行檢測，以便保證檢測結(jié)果的準確性，土壤檢測一般按以下六個流程：（1）前期采樣：根據(jù)背景資料與現(xiàn)場考察結(jié)果，采集一定數(shù)量的樣品分析測定。（2）正式采樣：按照監(jiān)測方案，實施現(xiàn)場采樣。（3）補充采樣：正式采樣測試后，發(fā)現(xiàn)布設(shè)的樣點沒有滿足總體設(shè)計需要，則要進行增設(shè)采樣點補充采樣。（4）在樣品交接單送樣者

PCR技術(shù)實驗干貨分享2024/12/09

聚合酶鏈反應(yīng)（polymerasechainreaction簡稱PCR）基因擴增技術(shù)又稱無細胞分子克隆系統(tǒng)或特異性DNA序列體外引物定向酶促擴增法，是基因擴增技術(shù)的一次重大革新?？蓪O微量的靶DNA特異地擴增上百萬倍，從而大大提高對DNA分子的分析和檢測能力，能檢測單分子DNA或?qū)γ?0萬個細胞中僅含1個靶DNA分子的樣品，因而此方法立即在分子生物學(xué)、微生物學(xué)、醫(yī)學(xué)及遺傳學(xué)等多領(lǐng)域廣泛應(yīng)用和迅速發(fā)展。由于PCR具有敏感性高、特異性強、快速、簡便等優(yōu)點，已在病原微生物學(xué)領(lǐng)域中顯示出巨大的應(yīng)用價值和

PCR反應(yīng)條件及循環(huán)闡述2024/12/09

PCR反應(yīng)在生物體外大量擴增特定DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù)，其特點是可以以微量的DNA為模板，快速擴增得到大量拷貝。一、PCR反應(yīng)條件的控制：1.PCR反應(yīng)的緩沖液提供合適的酸堿度與某些離子。2.鎂離子濃度總量應(yīng)比dNTPs的濃度高，常用1.5mmol/L。3.底物濃度dNTP以等摩爾濃度配制，20～200umol/L。4.TaqDNA聚合酶2.5U(100ul）。5.引物濃度一般為0.1～0.5umol/L。6.反應(yīng)溫度（1）變性溫度和時間95℃，30s。（2）退火溫度和時間低于引物Tm值5℃

BCA蛋白濃度測定試劑盒實驗測定方法2024/12/03

BCA蛋白定量法是一種快速靈敏、穩(wěn)定可靠的蛋白定量測定方法，其測定范圍是10－2000ug/ml，是比Lowry法更優(yōu)的專用于檢測總蛋白質(zhì)含量的產(chǎn)品。BCA法測定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學(xué)物質(zhì)的影響。其在562nm處有最大的吸收值，通過與標準曲線對比，即可計算待測蛋白的濃度。原理:BCA(bicinchoninincacid)與二價銅離子的硫酸銅等其他試劑組成的試劑，混合一起顯示為蘋果綠色，即BCA工作試劑。在堿性條件下，BCA與蛋白質(zhì)結(jié)合時，蛋白質(zhì)將Cu2+還原為Cu+，一個Cu+螯合二

酶聯(lián)接免疫吸附劑測定(ELISA）的洗滌優(yōu)化2024/11/25

ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測定(Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay)的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術(shù)。ELISA免疫分析是一種利用特定抗體與抗原或半抗原發(fā)生的高選擇性高特異性識別和結(jié)合原理，對待測抗體或者抗原進行分析測定的方法。優(yōu)化ELISA的重點之一在于洗滌。洗滌步驟可降低未結(jié)合抗體所引起的背景信號，從而增加分析的信噪比。每一步之間的洗滌確保只有特異的結(jié)合事件被保留，在最后一步產(chǎn)生信號。不充分的洗滌會導(dǎo)致差異和高背景，從而帶來不理

微生物實驗室滅菌方法匯總2024/11/18

微生物實驗室是進行微生物研究的場所，對環(huán)境要求很高，應(yīng)該保證實驗室內(nèi)的環(huán)境潔凈安全，嚴格的消毒滅菌工作非常重要，影響著實驗室順利研究實驗的順利進行，同時嚴格的消毒滅菌也為實驗室工作人員提供一個清潔而良好的工作環(huán)境。目前，常用的消毒滅菌方法多采用物理方法(如，干熱滅菌法、濕熱滅菌法、過濾除菌法、射線殺菌法等)和化學(xué)方法兩大類。1.干熱滅菌法是利用恒溫干燥箱內(nèi)120℃-150℃的高熱，并保持90-120分鐘，殺死細菌和芽孢，達到滅菌目的的一種方法。主要適用于不易被高溫損壞的玻璃器皿、金屬器械以及不能

中性、堿性土壤速效磷含量檢測試劑盒實驗分析2024/11/13

植物吸收的磷主要是H2PO4-的形態(tài)，因此土壤中速效磷含量是評價土壤對作物磷供應(yīng)能力的一種手段，對于施肥有著直接的指導(dǎo)意義。用弱堿法提取堿溶性磷和吸附態(tài)磷，鉬藍與磷酸根生成880nm有特征吸收峰的物質(zhì)，通過測定880nm光吸收，即可計算磷含量。一、正式實驗：1、若預(yù)實驗測定吸光值超出標準吸光值線性范圍：高于最高值建議將樣本適當稀釋后再進行測定，低于低值建議適當增加樣本質(zhì)量W后再進行測定，并將改變后的W和D代入公式計算；2、確定好最適實驗條件后，正式實驗樣本制備同預(yù)實驗樣本制備；3、正式實驗按照預(yù)

ELISA檢測試劑盒操作過程技巧匯總2024/10/28

ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測定(Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay)的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術(shù)。在檢測時，受檢標本（測定其中的抗原）與固相載體表面的抗體反應(yīng)。洗滌后加入酶標記的抗體，通過反應(yīng)結(jié)合在固相載體上。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析。ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測定。但ELISA測定中影響因素較多，而且其操作中有一定的技術(shù)

抗體保存相關(guān)問題解答2024/10/21

抗體（antibody，Ab）是機體在體內(nèi)存在的外來分子、微生物等抗原物質(zhì)刺激下，由B淋巴細胞或記憶細胞增殖分化成的漿細胞所產(chǎn)生的、可與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合的免疫球蛋白（immunoglobulins，Ig），主要分布在血清中，也分布于組織液及外分泌液中?？贵w保存得當與否，直接決定了抗體的活性和使用效果！如果抗體保存得當，大部分抗體活性都可以維持數(shù)月甚至數(shù)年。請謹記無論何時請按照說明書推薦的保存條件正確保存抗體.一、一般抗體的保存方法1.收到抗體后請務(wù)必在12000rpm離心1-5分鐘后再打開

ELISA實驗各種檢測方法及條件選擇指南2024/10/14

ELISA可用于測定抗原，也可用于測定抗體。這種測定方法中有3種必要的試劑：1.固相的抗原或抗體；2.酶標記的抗原或抗體；3.酶作用的底物。根據(jù)試劑的來源和標本的性狀及檢測的具備條件，可設(shè)計出各種不同類型的檢測方法。1.雙抗體夾心法測抗原針對抗原分子上兩個不同抗原決定簇的單克隆抗體分別作為固相抗體和酶標抗體。適用于測定二價或二價以上的大分子抗原，不適用于測定半抗原及小分子單價抗原，因其不能形成兩位點夾心。2.競爭法測抗原首先將特異性抗體包被于固相載體表面，經(jīng)洗滌后分成兩組：一組加酶標記抗原和被測

聚合酶鏈式反應(yīng)（PCR）常見的種類簡介2024/10/08

PCR是聚合酶鏈式反應(yīng)（PolymeraseChainReaction）的簡稱，是一種體外擴增特定DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù)。PCR的常見種類分述如下：1、普通PCR普通PCR即一代PCR，使用普通PCR擴增儀擴增靶基因，并通過瓊脂糖凝膠電泳對產(chǎn)物進行定性分析。2、實時熒光定量PCR（QuantitativeReal-timePCR,qPCR）實時熒光定量PCR，也叫Real-TimePCR，即二代PCR，是指在PCR擴增反應(yīng)體系中加入熒光染料或者熒光基團，在整個PCR過程中通過收集熒光信號實時