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免疫熒光標(biāo)記染色探討2023/08/01: 熒光標(biāo)記所依賴的化合物稱為熒光物質(zhì)。熒光物質(zhì)是指具有共軛雙鍵體系化學(xué)結(jié)構(gòu)的化合物，受到紫外光或藍(lán)紫光照射時(shí)，可激發(fā)成為激發(fā)態(tài)，當(dāng)從激發(fā)態(tài)恢復(fù)基態(tài)時(shí)，發(fā)出熒光。熒光標(biāo)記技術(shù)指利用熒光物質(zhì)共價(jià)結(jié)合或物理吸附在所要研究分子的某個(gè)基團(tuán)上，利用它的熒光特性來(lái)提供被研究對(duì)象的信息。熒光標(biāo)記的無(wú)放射物污染，操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)，使得熒光標(biāo)記物在許多研究領(lǐng)域的應(yīng)用日趨廣泛。熒光標(biāo)記物質(zhì)在蛋白的功能研究、藥物篩選等領(lǐng)域也有著廣泛的應(yīng)用。人們利用利用熒光標(biāo)記的多肽來(lái)檢測(cè)目標(biāo)蛋白的活性，并將其發(fā)展的高通量活性篩選方法應(yīng)用于

胎牛血清的作用及主要技術(shù)指標(biāo)2023/07/24: 一般而言，胎牛血清是指懷孕5-8個(gè)月的母牛被屠宰后，發(fā)育未wan全的胎牛心臟穿刺采血后，通過(guò)一系列工藝處理zui終獲得。此時(shí)胎牛血中含有特殊的生長(zhǎng)發(fā)育因子，一旦胚胎發(fā)育wan全這些因子自動(dòng)消失。胎牛血清具有極為重要的作用，其包括：1.提供對(duì)維持細(xì)胞指數(shù)生長(zhǎng)的激素，基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒(méi)有或量很少的營(yíng)養(yǎng)物，以及主要的低分子營(yíng)養(yǎng)物。2.提供結(jié)合蛋白，能識(shí)別維生素、脂類、金屬和其他激素等，能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。3.有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合，起到解毒作用。4.是細(xì)胞貼壁、鋪展在塑

滴定分析法的滴定方式注釋2023/07/17: 滴定分析法是將一種標(biāo)準(zhǔn)溶液滴加到被測(cè)物質(zhì)的溶液中，直到所加試劑與被測(cè)物質(zhì)按化學(xué)計(jì)量關(guān)系定量反應(yīng)為止，然后根據(jù)所加標(biāo)準(zhǔn)溶液與被測(cè)物質(zhì)的濃度和體積計(jì)算出被測(cè)物質(zhì)的含量的分析方法。1、直接滴定法：凡能滿足滴定分析要求的反應(yīng)都可用標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液直接滴定被測(cè)物質(zhì)。例如用NaOH標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液可直接滴定HCl、等試樣。2、返滴定法：返滴定法（又稱回滴法）是在待測(cè)試液中準(zhǔn)確加入適當(dāng)過(guò)量的標(biāo)準(zhǔn)溶液，待反應(yīng)wan全后，再用另一種標(biāo)準(zhǔn)溶液返滴剩余的第一種標(biāo)準(zhǔn)溶液，從而測(cè)定待測(cè)組分的含量。這種滴定方式主要用于滴定反應(yīng)速度

免疫熒光技術(shù)（IF）實(shí)驗(yàn)操作步驟2023/07/10: 免疫熒光技術(shù)是根據(jù)抗原抗體反應(yīng)的原理，先將已知的抗原或抗體標(biāo)記上熒光素，制成熒光抗體，再用這種熒光抗體（或抗原）作為探針檢測(cè)組織或細(xì)胞內(nèi)的相應(yīng)抗原（或抗體）。在組織或細(xì)胞內(nèi)形成的抗原抗體復(fù)合物上含有標(biāo)記的熒光素，利用熒光顯微鏡觀察標(biāo)本，熒光素受外來(lái)激發(fā)光的照射而發(fā)生明亮的熒光（黃綠色或橘紅色），可以看見(jiàn)熒光所在的組織細(xì)胞，從而確定抗原或抗體的性質(zhì)、定位，以及利用定量技術(shù)測(cè)定含量。一、準(zhǔn)備好試劑與儀器：磷酸鹽緩沖鹽水、熒光標(biāo)記的抗體溶液、緩沖甘油、搪瓷桶三只、有蓋搪瓷盒一只、熒光顯微鏡、玻片架、濾

ELISA實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線的技術(shù)解答2023/07/03: ELISA原理：免疫分析是一種利用特定抗體與抗原或半抗原發(fā)生的高選擇性高特異性識(shí)別和結(jié)合原理，對(duì)待測(cè)抗體或者抗原進(jìn)行分析測(cè)定的方法，酶聯(lián)免疫吸附分析（下稱ELISA）是免疫分析的一種，分三個(gè)部分組成：免疫識(shí)別，信號(hào)輸出和數(shù)據(jù)處理。標(biāo)準(zhǔn)曲線做的好與壞會(huì)直接影響到ELISA實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，甚至是關(guān)系到實(shí)驗(yàn)的成敗。那么在ELISA實(shí)驗(yàn)中，這一方面該如何處理呢？下面對(duì)ELISA實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線的技術(shù)解答內(nèi)容：1.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品的標(biāo)準(zhǔn)濃度范圍要有一個(gè)比較大的跨度，并且要能涵蓋你所要檢測(cè)實(shí)驗(yàn)樣品的濃度，即樣品的濃

把控細(xì)胞凍存必看事項(xiàng)2023/06/27: 細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的主要方法之一，也是保持細(xì)胞活性和增殖能力的重要手段。細(xì)胞可以通過(guò)被暫時(shí)休眠（凍存），等到需要時(shí)再被輕輕喚醒（復(fù)蘇）。低溫下，活細(xì)胞中的生物和化學(xué)反應(yīng)都會(huì)大大降低，為細(xì)胞長(zhǎng)期凍存提供了可能。冷凍對(duì)大多數(shù)活生物體都是致命的，細(xì)胞凍存是利用冷凍保護(hù)劑來(lái)降低冰點(diǎn)，緩慢凍結(jié)細(xì)胞的過(guò)程中，細(xì)胞內(nèi)水分透出細(xì)胞，使細(xì)胞凍結(jié)中冰晶形成減少，從而避免了由于冰晶形成對(duì)細(xì)胞中生命活性物質(zhì)的一系列損傷。細(xì)胞凍存時(shí)利用低溫降低細(xì)胞代謝，使細(xì)胞處于停止生長(zhǎng)的“休眠”狀態(tài)，等需要使用的時(shí)候再進(jìn)行復(fù)蘇操作。細(xì)

挑選優(yōu)質(zhì)血清的方法綜述2023/06/05: 血清是一種純天ran培養(yǎng)基，含有細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖所需的多種營(yíng)養(yǎng)成分，如蛋白質(zhì)、多肽等，多用于細(xì)胞培養(yǎng)、生物制品及診斷試劑的。血清的主要成分是蛋白質(zhì)，血清的組成成分與含量常常與供血?jiǎng)游镄詣e、年齡、生理?xiàng)l件和營(yíng)養(yǎng)條件有關(guān)。那么，如何挑選適合細(xì)胞生長(zhǎng)的血清？總結(jié)幾點(diǎn)方法如下：1.看產(chǎn)地不同產(chǎn)地的胎牛血清，品質(zhì)也是相差甚遠(yuǎn)。值得注意的是，胎牛血清是動(dòng)物源生物制品，我國(guó)對(duì)于動(dòng)物源制品的進(jìn)口一直有很嚴(yán)格的規(guī)定，目前我國(guó)批準(zhǔn)進(jìn)口的胎牛血清來(lái)源是澳大利亞、新西蘭和烏拉圭，合法正規(guī)途徑進(jìn)口的胎牛血清必須在產(chǎn)品包裝上標(biāo)

支原體污染細(xì)胞清除方案2023/05/29: 支原體細(xì)胞污染是最麻煩的，通常來(lái)源有這幾個(gè)：1、已受污染的細(xì)胞2、操作人員的疏失3、已受污染的培養(yǎng)基、血清4、操作環(huán)境不良、實(shí)驗(yàn)器具不潔等。由于支原體為人體口腔中之正常菌叢，實(shí)驗(yàn)室之操作人員的污染亦可能為污染源，須十分注意。而萬(wàn)一細(xì)胞已受支原體污染時(shí)，最佳的處理原則為將細(xì)胞高壓滅菌后丟棄，以免污染其它潔凈的細(xì)胞株。支原體污染細(xì)胞后，必須要清除支原體，清除方案有以下：1、對(duì)于非重要的細(xì)胞，如培養(yǎng)中的細(xì)胞、WCB的細(xì)胞等，將培養(yǎng)物與用過(guò)的培養(yǎng)基滅活后丟棄即可。對(duì)于較為重要的細(xì)胞，如來(lái)源珍貴或?qū)嶒?yàn)室中

ELISA試驗(yàn)操作對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響分析2023/05/24: 酶聯(lián)免疫吸附法(enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA)是一種特殊的試劑分析方法，在免疫酶技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種新型的免疫測(cè)定技術(shù)，其試劑易于保存、結(jié)果判斷較為客觀，是目前實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)抗原抗體*經(jīng)濟(jì)、*普遍的試驗(yàn)診斷方法。ELISA試驗(yàn)操作對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響分析如下：1、試劑的準(zhǔn)備試劑的質(zhì)量如抗原抗體的純度及親和力、標(biāo)記物的比活性、滴度及特異性等直接影響檢測(cè)結(jié)果，為保證檢測(cè)質(zhì)量，所有試劑必需經(jīng)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局注冊(cè)批準(zhǔn)、批檢測(cè)合格，臨床評(píng)估特異性、敏感性、

PCR常見(jiàn)類型及PCR反應(yīng)基本步驟2023/05/15: 聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)（Polymerasechainraction,PCR）是一種在體外擴(kuò)增特定DNA片段的方法，具有特異、敏感、產(chǎn)率高、快速、簡(jiǎn)便、重復(fù)性好、易自動(dòng)化等突出優(yōu)點(diǎn)，可用很短時(shí)間使目的基因或某一片段擴(kuò)增十萬(wàn)乃至幾百萬(wàn)倍。一、PCR常見(jiàn)類型常規(guī)PCR：直接PCR是指直接從樣品擴(kuò)增目標(biāo)DNA，無(wú)需進(jìn)行核酸分離純化。熱啟動(dòng)PCR：熱啟動(dòng)PCR常用于增強(qiáng)PCR擴(kuò)增的特異性。該方法主要利用抗體、親合配體、適體或化學(xué)修飾物等酶修飾酶，來(lái)抑制室溫下的DNA聚合酶的活性。這種修飾使得在PCR體系配制階

原代細(xì)胞純化酶解聚方法分享2023/05/05: 原代細(xì)胞分離的方法有多種，常用的是機(jī)械解離細(xì)胞法、酶學(xué)解離細(xì)胞法以及螯合劑解離細(xì)胞法，下面介紹酶解聚方法獲得純化的原代細(xì)胞。1、胰蛋白酶純化法●在去除不需要的組織后，使用無(wú)菌的解剖刀和剪子把剩余的組織切成3~4mm小片，通過(guò)懸浮在無(wú)鈣鎂的平衡鹽溶液中清洗組織碎片。讓組織碎片沉淀，去除上清液。重復(fù)清洗2到3次?！駥⑹⒂薪M織碎片的容器置于冰上，去除殘留的上清液。加入0.25%溶解在無(wú)鈣鎂的平衡鹽溶液中的胰蛋白酶（100mg組織加入1ml胰蛋白酶）。●在4℃孵育6到18小時(shí)，使幾乎沒(méi)有胰蛋白酶活性的酶

逆轉(zhuǎn)錄酶（RT-PCR）實(shí)驗(yàn)操作流程及注意事項(xiàng)2023/04/23: 逆轉(zhuǎn)錄酶(RT-PCR)是存在于RNA病毒體內(nèi)的依賴RNA的DNA聚合酶。RT-PCR實(shí)驗(yàn)中的逆轉(zhuǎn)錄酶需要具有以下三種活性：1.依賴RNA的DNA聚合酶活性：以RNA為模板合成cDNA的第一條鏈；2.Rnase水解活性：水解Rnase雜合體中的RNA;3.依賴DNA的DNA聚合酶活性：以一條DNA鏈為模板合成互補(bǔ)的雙鏈DNA。在選擇逆轉(zhuǎn)錄酶時(shí)，建議選擇無(wú)RNaseH①活性（RNaseH-）的逆轉(zhuǎn)錄酶。具有RNaseH活性的逆轉(zhuǎn)錄酶的RNaseH活性會(huì)與聚合酶活性競(jìng)爭(zhēng)RNA模板與DNA引物（或cD

ELISA試劑盒試驗(yàn)常見(jiàn)問(wèn)題解析2023/04/20: ELISA試劑盒試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)得到了廣泛的應(yīng)用，但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大，如不注意，有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。我將操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問(wèn)題的原因及解決辦法總結(jié)于下，以期給同行帶來(lái)一些啟發(fā)，提高試驗(yàn)質(zhì)量。ELISA試劑盒試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因及解決辦法分析：1、選擇試劑選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑，嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書進(jìn)行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。2、加樣可能原因：1）血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣；2）手工操作中，加樣板過(guò)多造成加樣

菌種的各種活化方式分辨指南2023/04/10: 菌種活化就是將保藏狀態(tài)的菌種放入適宜的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，逐級(jí)擴(kuò)大培養(yǎng)是為了得到純而壯的培養(yǎng)物，即獲得活力旺盛的、接種數(shù)量足夠的培養(yǎng)物。菌種發(fā)酵有一般需要2-3代的復(fù)壯過(guò)程，因?yàn)楸４鏁r(shí)的條件往往和培養(yǎng)時(shí)的條件不相同，所以要活化,讓菌種逐漸適應(yīng)培養(yǎng)環(huán)境。要明白菌種活化的情況就需要了解菌種保藏的方式和方法。目前國(guó)際國(guó)內(nèi)常用的菌種保存方法包括：定期移植法、液體石蠟法、沙土管法、真空冷凍干燥法、80℃冰箱凍結(jié)法、液氮超低溫凍結(jié)法。對(duì)于不同的保存方式活化的方式也不同：1、定期移植法的菌種復(fù)蘇較簡(jiǎn)單，直接轉(zhuǎn)接即可

細(xì)胞不貼壁的一些原因及對(duì)策2023/03/20: 細(xì)胞貼壁細(xì)胞（除腫瘤細(xì)胞外）在體外培養(yǎng)條件下，完成貼壁后均為單層生長(zhǎng)，原因是貼壁細(xì)胞有接觸性抑制的特點(diǎn)。一般認(rèn)為接觸抑制是細(xì)胞間的一種識(shí)別作用，對(duì)于動(dòng)物細(xì)胞的形態(tài)形成與穩(wěn)定具有重要性的作用。由于貼壁細(xì)胞的一面是緊貼在培養(yǎng)瓶上的，如果其上方存在細(xì)胞與其相粘附，那么下方的細(xì)胞很快就會(huì)缺乏營(yíng)養(yǎng)---餓死。不貼壁的一些原因：1.胰酶消化時(shí)間把控不當(dāng)：消化不夠細(xì)胞本身就是成團(tuán)的；若胰酶處理太久，容易造成細(xì)胞膜蛋白損傷，使細(xì)胞貼壁不緊，顯微鏡下觀察立體感不強(qiáng)，嚴(yán)重的時(shí)候甚至?xí)斐杉?xì)胞死亡。2.缺少貼壁因子：

PCR反應(yīng)假陰性結(jié)果分析研究2023/03/13: 假陰性，不出現(xiàn)擴(kuò)增條帶PCR反應(yīng)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)有①模板核酸的制備，②引物的質(zhì)量與特異性，③酶的質(zhì)量，④PCR循環(huán)條件。尋找原因亦應(yīng)針對(duì)上述環(huán)節(jié)進(jìn)行分析研究。一、模板：①模板中含有雜蛋白質(zhì)，②模板中含有Taq酶抑制劑，③模板中蛋白質(zhì)沒(méi)有消化除凈，特別是染色體中的組蛋白，④在提取制備模板時(shí)丟失過(guò)多，或吸入酚。⑤模板核酸變性不徹di。在酶和引物質(zhì)量好時(shí)，不出現(xiàn)擴(kuò)增帶，極有可能是標(biāo)本的消化處理，模板核酸提取過(guò)程出了毛病，因而要配制有效而穩(wěn)定的消化處理液，其程序亦應(yīng)固定不宜隨意更改。酶失活：需更換新酶，或新舊

哪些原因讓抗體具有良好的穩(wěn)定性？2023/03/06: 抗體在室溫、37℃保存與-20℃保存具有一樣的活性與穩(wěn)定性。之所以這種抗體具有這樣良好的穩(wěn)定性，主要原因有四個(gè)方面：1.抗體純度高純度的抗體產(chǎn)品，去除了包括各種蛋白酶在內(nèi)的雜質(zhì)，保證了抗體的穩(wěn)定性。采用先進(jìn)的抗體純化技術(shù)，確保抗體產(chǎn)品的高純度，保障其抗體產(chǎn)品的穩(wěn)定性。2.抗體濃度高濃度的抗體產(chǎn)品可減少容器表面吸附造成的物質(zhì)損失。撫生抗體產(chǎn)品中，93%的濃度大于0.5mg/ml。抗體產(chǎn)品濃度普遍大于業(yè)內(nèi)水平。3.抗體的穩(wěn)定性是自然界長(zhǎng)期進(jìn)化的結(jié)果抗體是免疫系統(tǒng)中最重要的分子之一，其穩(wěn)定性是自然進(jìn)化

小鼠膠原ELISA檢測(cè)試劑盒檢測(cè)方法2023/02/28: ELISA的檢測(cè)方法有直接發(fā)、間接法、競(jìng)爭(zhēng)法基雙抗夾心法，其中直接法和競(jìng)爭(zhēng)法應(yīng)用較少，應(yīng)有最多的是雙抗夾心法，其在敏感性基因、特異性上有明顯的優(yōu)勢(shì)。直接法：將抗原固定于ELISA板上，然后用酶標(biāo)抗體直檢測(cè)抗原。相較于其他類型的ELISA實(shí)驗(yàn)，直接ELISA實(shí)驗(yàn)步驟少，檢測(cè)速度快，不需要用到二抗，避免了交叉反應(yīng)，檢測(cè)結(jié)果不容易出錯(cuò)，但是由于直接ELISA的抗原不是特異性固定的，樣本中的靶蛋白及其他雜質(zhì)蛋白都會(huì)與ELISA版結(jié)合，實(shí)驗(yàn)背景會(huì)比較高，而且直接ELISA每種靶蛋白都需要準(zhǔn)備能夠與其特異性

抗體檢測(cè)的方法小結(jié)2023/02/20: 抗體是哺乳動(dòng)物適應(yīng)性免疫系統(tǒng)對(duì)抗病原體的核心，它是在病原體刺激下由漿細(xì)胞（效應(yīng)B細(xì)胞）所分泌的一種免疫球蛋白，能夠識(shí)別并結(jié)合特異的病原體抗原，隨后通過(guò)介導(dǎo)中和作用、調(diào)理作用、效應(yīng)T細(xì)胞殺傷等來(lái)清除病原體?？贵w檢測(cè)的三種方法：1、直接免疫熒光法(IIF)這種的實(shí)驗(yàn)辦法可以對(duì)人體內(nèi)含有的抗體和試劑里面含有的反響物產(chǎn)生化學(xué)反響，專業(yè)術(shù)語(yǔ)是熒光反響，這是一種對(duì)人體目前具有的抗體數(shù)量和類型的有用的實(shí)驗(yàn)辦法，可以很好的對(duì)抗核抗體、抗胞漿抗體進(jìn)行有用的篩選。2、免疫雙擴(kuò)散法(ID)這種實(shí)驗(yàn)辦法首要針對(duì)的是人體

ELISA實(shí)驗(yàn)間接法試劑及試劑配制2023/02/15: ELISA實(shí)驗(yàn)間接法試劑及試劑配制：1.抗原及酶標(biāo)記抗體①抗原：IgG②酶標(biāo)抗抗體：羊抗鼠IgG-HRP2.包被液（CBS）：Na2CO30.8g，NaHCO31.46g，水溶解，定容500ml。3.封閉液（3％BSA+CBS或5％牛奶+CBS）：含3％牛血清白蛋白（BSA）：10mLCBS中加入0.3gBSA。含5％荷蘭牛奶：10mLCBS中加入0.5g牛奶。4.洗滌液（PBST10*）：KH2PO44g，Na2HPO4·12H2O58g，NaCl160g，KCl4g，Tween-2010mL

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