Caspase 3 活性檢測試劑盒/Caspase 3 Activity Assay Kit   BB-4106

使用方法：

• 裂解緩沖液和檢測緩沖液配制

根據(jù)待測樣品數(shù)準(zhǔn)備裂解緩沖液和檢測緩沖液，每1ml緩沖液中加入10ul DTT。

• 樣品處理
• 細(xì)胞樣品

1. 收集2-5×10⁶個(gè)細(xì)胞，在4℃，500×g條件下離心2-3分鐘，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干，收集細(xì)胞。
2. 用冷PBS洗滌細(xì)胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。
3. 在細(xì)胞中加入100μl冷的裂解緩沖液，高速渦旋振蕩15秒。
4. 置冰上15分鐘，每隔5分鐘高速渦旋振蕩15秒。
5. 在4℃，500×g條件下離心5分鐘。
6. 快速將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，置于冰上或-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/span>

 組織樣品

1. 取適量組織樣本剪碎，按照50mg/100μl冷的裂解緩沖液，用組織勻漿器勻漿至無明顯肉眼可見固體（或用液氮研磨），冰上靜置15分鐘，小心將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管。

1. 在4℃，500×g條件下離心5分鐘。
2. 快速將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，置于冰上或-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/span>

• 對(duì)上述處理過的上清用Bradford法進(jìn)行蛋白定量。

• Caspase 3活性檢測
  1. 取10ul大約含20-50ug蛋白的裂解上清，加入90ul檢測緩沖液。
  2. 再加入10ul Ac-DEVD-pNA （使用前請(qǐng)混勻），在37℃下避光反應(yīng)1-2小時(shí)，有黃色顏色產(chǎn)生即可進(jìn)行檢測，如果顏色變化不明顯，時(shí)間可以延長，甚至孵育過一晚。部分樣品中激活的caspase-3水平較低，顏色變化不明顯，直接上機(jī)檢測，與對(duì)照組樣品產(chǎn)品變化即可。
  3. 測定A405nm或A400nm。

根據(jù)凋亡誘導(dǎo)的細(xì)胞的吸光值與空白對(duì)照細(xì)胞的吸光值的比值計(jì)算相對(duì)的Caspase 3活性程度。

Caspase 3 活性檢測試劑盒/Caspase 3 Activity Assay Kit   BB-4106

   BB-4106