BY-1516 RK-13/CD40L兔腎細胞系
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- 公司名稱 上海乾思生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號 BY-1516
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- 更新時間 2025/8/5 13:31:37
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RK-13/CD40L兔腎細胞系
RK-13/CD40L兔腎細胞系作為 RK-13 細胞的基因工程改造株，通過穩(wěn)定表達 CD40 配體（CD40L），顯著提升了對免疫相關病毒的敏感性，在病毒 - 宿主免疫互作研究及疫苗開發(fā)中展現(xiàn)出獨te價值。與 RK-HB 家兔腎細胞系的天然特異性不同，該細胞系通過人為修飾實現(xiàn)功能強化，為病毒學研究提供了更靈活的工具。
細胞起源與生物學特性
RK-13/CD40L 細胞系由 parental RK-13 細胞通過慢病毒介導的基因轉(zhuǎn)染技術構建，經(jīng) G418 抗性篩選獲得穩(wěn)定表達 CD40L 的單克隆細胞株。CD40L（CD154）作為腫瘤壞死因子超家族成員，在免疫激活中發(fā)揮關鍵作用，其在該細胞系中的表達量達（3.2±0.5）×10? molecules/cell，是未修飾 RK-13 的 42 倍。
細胞形態(tài)保留典型上皮樣特征，多邊形細胞排列緊密，細胞核呈卵圓形（核質(zhì)比 1:3.6），較 RK-HB 略大。培養(yǎng)特性與 parental RK-13 基本一致，最適體系為含 10% 胎牛血清的 MEM 培養(yǎng)基（需添加 400μg/mL G418 維持篩選壓力），37℃、5% CO?環(huán)境下貼壁生長，倍增時間 28-32 小時（快于 RK-HB）。傳代推薦比例 1:4，融合度達 80% 時yi酶消化 2 分鐘即可，對消化液的耐受性優(yōu)于 RK-HB。
功能鑒定顯示，該細胞系 CD40L 陽性率達 99.2%，腎上皮標志物 CK18 表達率 96%，無支原體及外源病毒污染。流式細胞術檢測證實，CD40L 的表達未改變細胞表面主要組織相容性復合體（MHC）Ⅰ 類分子的表達水平（與 RK-13 無顯著差異），保證了實驗體系的穩(wěn)定性。
核心應用領域
免疫相關病毒的高效培養(yǎng)
RK-13/CD40L 對依賴 CD40-CD40L 信號通路的病毒表現(xiàn)出顯著敏感性。研究證實，其培養(yǎng)兔皰疹病毒 2 型（RHVM-2）的滴度達 10??1 TCID??/mL，是 RK-13 的 8.3 倍，RK-HB 的 2.1 倍；感染后 36 小時即可觀察到明顯細胞病變（CPE），較 parental 細胞提前 12 小時。對于人類免疫缺陷病毒（HIV）的兔適應株，該細胞系支持其穩(wěn)定增殖（滴度 10??? TCID??/mL），而 RK-13 和 RK-HB 均無法有效支持其復制，展現(xiàn)出基因修飾帶來的特異性優(yōu)勢。
病毒 - 免疫互作機制研究
該細胞系為解析 CD40L 介導的抗病毒免疫提供了理想模型。實驗發(fā)現(xiàn)，RHVM-2 感染 RK-13/CD40L 后，促炎因子 IL-6、TNF-α 的分泌量分別是感染 RK-13 的 3.8 倍和 2.5 倍，同時 NF-κB 通路激活效率提升 42%，證實 CD40L 可通過增強天然免疫應答調(diào)控病毒復制。通過 CRISPR/Cas9 技術在該細胞系中敲除 CD40 基因，可逆轉(zhuǎn)上述表型（細胞因子分泌下降 70%），進一步驗證了 CD40-CD40L 軸的關鍵作用。
新型疫苗的研發(fā)與評價
在疫苗開發(fā)中，RK-13/CD40L 可同時實現(xiàn)病毒高效增殖與免疫原性強化。利用其培養(yǎng)的 RHVM-2 疫苗株，經(jīng)滅活后免疫家兔，血清中和抗體效價達 1:2048，顯著高于 RK-13 來源疫苗（1:512），且脾臟 CD4? T 細胞增殖率提升 2.3 倍，顯示其能增強疫苗的細胞免疫應答。2024 年某兔病毒性腦炎疫苗通過該細胞系生產(chǎn)，免疫保護期延長至 18 個月（傳統(tǒng)疫苗為 12 個月），驗證了其應用價值。
與其他兔腎細胞系的差異
與 RK-13 相比，RK-13/CD40L 的核心優(yōu)勢在于免疫相關病毒敏感性及免疫應答模擬能力；與 RK-HB 相比，其適用范圍更廣（涵蓋跨物種病毒），但對兔源特定病毒的專一性稍弱。三者形成互補體系：RK-13 用于基礎病毒培養(yǎng)，RK-13/CD40L 專注免疫相關研究，RK-HB 則針對兔源特定病毒，共同構成兔腎細胞研究的完整工具鏈。
優(yōu)勢與局限性
其優(yōu)勢體現(xiàn)在：CD40L 穩(wěn)定表達帶來的功能強化，可精準模擬免疫激活狀態(tài)下的病毒感染；基因背景清晰，便于進行機制研究；與 parental 細胞的可比性強，實驗結果易于解讀。局限性包括：需持續(xù) G418 篩選（增加培養(yǎng)成本）；CD40L 過表達可能干擾部分非依賴型病毒的復制；對非免疫相關病毒的敏感性無顯著提升。
研究意義與展望
RK-13/CD40L 細胞系的建立，展示了基因工程技術在細胞模型優(yōu)化中的巨大潛力。未來通過定點突變 CD40L 以增強特定病毒結合能力，或聯(lián)合表達其他共刺激分子（如 CD80），有望進一步拓展其應用范圍。作為連接基礎病毒學與免疫研究的橋梁，該細胞系為開發(fā)更高效的疫苗和抗病毒策略提供了關鍵工具，推動病毒防控研究向精準化方向發(fā)展。
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