1. 尼氏染色的應(yīng)用

（1）觀察神經(jīng)元內(nèi)的細(xì)胞結(jié)構(gòu)；

（2）通過尼氏染色后對(duì)尼氏體的觀察來了解神經(jīng)元的損傷；

（3）檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腦區(qū)損毀或埋藏電極的位置

2. 尼氏染色操作步驟

（1）樣品處理

①石蠟切片

    二甲苯中脫蠟5－10分鐘，共3次。 無水乙醇5分鐘， 90%乙醇2分鐘， 70%乙醇2分鐘，蒸餾水2分鐘。

②冰凍切片

    蒸餾水2分鐘。

③培養(yǎng)細(xì)胞

    用4%多聚甲醛固定10分鐘以上， 蒸餾水洗滌2分鐘，換用新鮮的蒸餾水，再洗滌2分鐘。

（2）染色

    尼氏（Nissl）染色液染色3－10分鐘（可以根據(jù)染色結(jié)果和要求調(diào)整時(shí)間，染色時(shí)溫度提高到37－50℃對(duì)于25－50微米等較厚的切片可以使染色更均勻）。 蒸餾水洗滌2次（每次數(shù)秒鐘即可）。

（3）脫水、透明、封片

95%乙醇脫水2分鐘，換用新鮮的95%乙醇再脫水2分鐘。 二甲苯透明5分鐘， 換用新鮮的二甲苯，再透明5分鐘。 用中性樹膠或其它封片劑封片。

（4）鏡檢

    顯微鏡下觀察，細(xì)胞呈現(xiàn)斑駁的藍(lán)紫色染色。

（5）其它染色

    如果進(jìn)行免疫熒光染色，或進(jìn)行 Hoechst 等熒光染料的染色，在 Nissl 染色液染色后： 70％乙醇洗滌2次，每次2分鐘。PBS 或生理鹽水或TBS或TBST等用于免疫染色或熒光 染料染色的溶液浸泡5分鐘。然后就可以進(jìn)行免疫熒光染色或其它熒光染料的染色了。

注意事項(xiàng)： 默認(rèn)拍照一張，多拍請(qǐng)?zhí)崆罢f明，請(qǐng)明確拍照部位及拍照倍數(shù)(一般為40X、100X、200X、400X)。