產(chǎn)品介紹：

提取冷凍的抗凝血的DNA

產(chǎn)品及特點(diǎn)

血液 DNA 是重要的研究材料，但是血液 DNA 在常溫下存放的時間很短，

因此很多血液樣品都是凍凝存放。由于凍存過程中形成的冰晶會刺破細(xì)胞膜，釋

放出 DNA，因此從凍存血液中高效提取 DNA 一直是個棘手的問題。本產(chǎn)品就

專門用于從凍存血液中提取 DNA 的試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：

1. 適用于各種動物血液，包括禽類和昆蟲。

2. 微量提取，每次可處理 400 μL 血液。

3. DNA 完整性好，純化后長度在 20-50 Kb 之間。

4. DNA 純凈，OD260/OD280 在 1.8-2.0 之間，可直接用于 PCR、酶切、

雜交等實(shí)驗。DNA 產(chǎn)量一般在 10 μg/mL 血液。

5. 操作簡單，整個過程約 20 分鐘，室溫操作，適合大規(guī)模樣品處理。

運(yùn)輸及保存 常溫運(yùn)輸和保存，有效期一年。

自備試劑

使用方法 1. 從-20℃或更低的冰箱中取出血液樣品，室溫下靜置融化。

2. 將 400 μL 解凍的血液轉(zhuǎn)移到一個 1.5 mL 的塑料離心管中，加入 400 μL

溶液 A，充分震蕩混勻。如果是禽類血液，則少加 10 倍，只加 40 μL。

3. 在混合液中加入 400 μL 溶液 B 和 200 μL ，振蕩 1 分鐘。由

于離心管比較滿，所以需要確保管底溶液轉(zhuǎn)動起來，否則只是液面振動而已。

4. 4℃12000 g 離心 10 分鐘，小心將上清轉(zhuǎn)移至一新的 1.5 mL 塑料離心管

中。注意：不要室溫離心，如果室溫離心，則離心后部分樣品的中間白

色層可能會很厚，只能得到很少的上清。

5. 將約 0.7-0.8 mL 上清轉(zhuǎn)移到 10-15 mL 塑料離心管中（不要使用玻璃離心

管，否則 DNA 會吸附到管壁上。常用的培養(yǎng)提質(zhì)粒用的細(xì)菌的培養(yǎng)管即可）。

6. 加入 2.5 倍上清體積的溶液 C（2 mL），立即搖晃混勻。

7. 將混合液分多次轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中，每次 0.7 mL 左右，轉(zhuǎn)移后靜置 2-5

分鐘，以使 DNA 與膜充分結(jié)合，然后室溫 12000 g 離心 30 秒，棄收集管

中的廢液，然后再加入 0.7 mL，重復(fù)上述操作，直到全部混合液掛柱。

8. 在離心吸附柱中加入 0.7 mL 通用洗柱液，室溫 12000 g 離心 30 秒，棄收

集管中的廢液。

9. 在離心吸附柱中再加入 0.3 mL 通用洗柱液，室溫 12000 g 離心 30 秒，棄

收集管中的廢液。

10. 室溫 12000 g 離心 30 秒，去盡殘留液體（此步驟十分重要，不要省略，

否則殘留的含乙醇的通用洗柱液將抑制后續(xù)的酶反應(yīng)）。

11. 將離心吸附柱置于一新的 1.5 mL 塑料離心管中，加入 50 μL DNA 洗脫液

2.0，室溫放置 2 分鐘。如果將 DNA 洗脫液 2.0 在 65℃預(yù)熱后再使用，洗

脫 DNA 的效果更佳。

12. 室溫 12000 g 離心 30 秒，離心管底部溶液即 DNA 溶液，可立即使用或

-20℃長期保存。

13. 本產(chǎn)品所用離心吸附柱吸附能力比較強(qiáng)，如果再次用 DNA 洗脫液 2.0 洗脫，

還能洗脫下一些血液 DNA。

疑難解答 Q：保存血液樣品時溫度越低越好嗎？

A： 不是。Tegelstrom 曾經(jīng)比較了分別在-70℃, -20℃, 4℃保存了 6 個月的蛙

血，發(fā)現(xiàn)保存溫度越低，血液 DNA 的斷裂越嚴(yán)重（詳見 Tegelstrom, 1989.

Cold room Storage of blood may be better than storage at -70℃.

Fingerprint News, 4:5-6）。

Q: 本產(chǎn)品是否可以用于放量操作？

A: 可以在大的離心管中進(jìn)行放量操作，如每次處理 5-100 mL 血液，只是客戶

需要單獨(dú)購買紅細(xì)胞裂解液，并按比例增加溶液 A 和溶液 B 的用量。

Q: 冷凍血液為何 DNA 產(chǎn)量很低？

A: 冷凍過程中形成的冰晶刺破了細(xì)胞膜和細(xì)胞核膜，紅細(xì)胞裂解液處理時釋放

的 DNA 將進(jìn)入上清并丟失，所以后得到的 DNA 是沒有被冰晶刺破的細(xì)胞

的 DNA。