INTERFERin® siRNA/miRNA體外轉染試劑
- 公司名稱 翌圣生物科技（上海）股份有限公司
- 品牌 Polyplus
- 型號
- 產地
- 廠商性質 生產廠家
- 更新時間 2023/3/15 9:02:09
- 訪問次數(shù) 3939
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企業(yè)簡介
翌圣生物科技（上海）股份有限公司【Yeasen Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd.】是一家以蛋白質改造和酶進化技術為驅動，聚焦生命科學產業(yè)鏈上游核心原料，從事分子、蛋白和細胞三大品類生物試劑的研發(fā)、生產與銷售的高新技術企業(yè)，通過打通分子酶、蛋白、抗體、核酸、細胞的技術開發(fā)路徑，成為國內少數(shù)同時覆蓋三大品類生物試劑、兼?zhèn)浜诵募夹g自主研發(fā)能力和規(guī)?；a能力的高新技術企業(yè)，產品廣泛應用于生命科學研究領域、診斷與檢測領域和生物醫(yī)藥領域。
主營業(yè)務
公司憑借在蛋白質改造和酶進化領域的技術優(yōu)勢和深耕生物試劑行業(yè)多年積累的豐富經驗，構建了品質優(yōu)良、類型齊全、種類豐富的產品管線。自公司成立以來，公司研發(fā)、生產和銷售的生物試劑超過3000種，涵蓋分子、蛋白、細胞三大品類的生物試劑，能夠滿足客戶多種類型生物試劑的一體化采購需求。公司核心產品覆蓋qPCR系列、NGS系列、逆轉錄系列、核酸提取與純化系列、PCR系列、分子克隆系列、體外轉錄系列、抗體、蛋白純化系列、蛋白分析系列、重組蛋白、細胞分析系列、細胞培養(yǎng)系列、細胞轉染系列、報告基因檢測系列等多個品類的生物試劑，廣泛應用于生命科學研究、診斷檢測和生物醫(yī)藥等領域。
發(fā)展歷程
榮譽資質
翌圣生物通過申請商標和軟件著作權的方式保障核心技術和市場競爭力，不斷加強公司品牌建設。截至2022年3月31日，公司已經獲得授權18項（其中發(fā)明14項、實用新型1項、外觀設計3項）和45項與生物試劑相關的軟件著作權，擁有經國家知識產權局商標局核準的注冊商標權37項以及4項境外注冊商標，是國家高新技術企業(yè)和上海市專精特新企業(yè)。
創(chuàng)新平臺
經過多年的產品研發(fā)技術經驗的沉淀以及持續(xù)的研發(fā)創(chuàng)新，翌圣生物積極開展“產學研”合作，與擁有生物催化與酶領域國家重點實驗室的湖北大學、擁有教育部工業(yè)生物領域重點研究基地的江南大學展開合作，優(yōu)化生物試劑關鍵原料的生產和表達工藝。翌圣生物以基因工程技術、生物信息技術、細胞生物學技術、免疫學技術、生化分析技術等生命科學領域的共性生物技術為基礎，建立了六大核心技術平臺——雙向分子酶理性設計與定向進化平臺、密度發(fā)酵與超潔凈純化平臺、分子診斷試劑關鍵原料研發(fā)平臺、高通量測序建庫試劑創(chuàng)新研發(fā)平臺、高性能單克隆抗體研發(fā)平臺和mRNA醫(yī)藥應用研發(fā)平臺，目前已經自主研發(fā)出20項核心技術，打通分子酶、蛋白、抗體、核酸、細胞的技術開發(fā)路徑，覆蓋技術研發(fā)、產品升級、規(guī)模生產和質量控制等生物試劑研發(fā)和生產的各關鍵環(huán)節(jié)。
工業(yè)化生產
翌圣生物擁有按照準GMP 標準建設運營的工業(yè)化生產基地，配有噸級發(fā)酵線、工業(yè)級 AKTA 純化線和全自動包裝線。同時，公司通過了ISO 13485:2016質量管理體系認證，從原料控制、生產管理、質檢管控、倉儲運輸?shù)葘ιa線進行360度管理監(jiān)督，保證產品過程的可控制性及可追溯性，竭盡全力為您提供可靠的產品。
客戶服務
翌圣生物憑借優(yōu)質穩(wěn)定的產品質量、高效及時的響應能力、快速穩(wěn)定的交付能力和周到完備的售后服務獲得了眾多科研用戶和工業(yè)用戶的認可，為檢測公司、治療公司、工具類公司和科學研究實驗室提供應用于科學研究、體外診斷、基因測序、生物醫(yī)藥等的生物試劑。與中國科學院、清華大學、北京大學、復旦大學、上海交通大學、浙江大學等頂尖科研院所和華大基因、恒瑞醫(yī)藥、藥明康德、之江生物、圣湘生物、斯微生物、金斯瑞、思路迪等工業(yè)客戶建立了穩(wěn)定、緊密的合作關系，公司產品被多次使用在Nature、Science、Cell等國際頂級期刊論文發(fā)表中。
公司企業(yè)文化
幫助客戶創(chuàng)造價值，讓世界更健康更快樂
◎ 成為生命科學工具領域全球Top⑩
◎ 具備驅動產業(yè)變革的技術創(chuàng)新能力
◎ 擁有一支持續(xù)學習型的翌圣鐵軍
翌圣生物始終秉承“幫助客戶創(chuàng)造價值，讓世界更健康更快樂”的使命，專注于技術創(chuàng)新和產品升級，不斷拓展核心技術的應用領域，為客戶提供更為的產品與服務，助力我國打造自主可控的生物試劑產業(yè)鏈。同時，翌圣生物將進一步推進國際化戰(zhàn)略，繼續(xù)布局和拓展海外市場，為全球生物試劑產業(yè)發(fā)展貢獻力量。
分子生物學試劑，細胞生物學試劑，免疫學試劑，蛋白組學試劑等
| 供貨周期 | 一周 | 應用領域 | 生物產業(yè) |
|---|
INTERFERin®in vitro siRNA/miRNA transfection reagent
INTERFERin® siRNA/miRNA體外轉染試劑
產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規(guī)格 | 價格（元） |
INTERFERin®in vitro siRNA/miRNA transfection reagent INTERFERin® siRNA/miRNA體外轉染試劑 | 409-01 | 0.1 mL | 655.00 |
409-10 | 1 mL | 3135.00 |
產品描述
INTERFERin®是Polyplus公司提供的一款非脂質體PEI陽離子、兩性分子轉染試劑，專門為將siRNA/miRNA轉染到哺乳動物細胞中而開發(fā)。這種轉染試劑包裹siRNA或miRNA形成陽離子復合物，該復合物與細胞表面帶負電的蛋白聚糖相互作用吸附在細胞表面，通過內吞進入細胞，形成內含體。該轉染試劑具有質子海綿的作用，能夠吸收溶酶體中的H+，質子的不斷流入，導致復合體腫脹破裂，從而使外源siRNA或miRNA釋放到細胞質中。
INTERFERin®可在廣泛的細胞系中，實現(xiàn)1 nM的siRNA超過90%的表達效率，避免了脫靶效應。適用于多種細胞轉染，包括Hela、MCF-7、NIH-3T3等貼壁細胞；對于難以轉染的懸浮細胞系，如K562或THP-1細胞，siRNA終濃度為5nM時，可達到80%的沉默效率；同時還可以轉染原代人成纖維細胞和原代人肝細胞等，可達到80%的沉默效率。除此之外，也可根據(jù)轉染的細胞系、核酸種類、轉染時間等，登錄Polyplus公司的網///址，搜索該產品引文數(shù)據(jù)庫。Polyplus數(shù)據(jù)庫提供了400多種的轉染條件數(shù)據(jù)可供參考，Polyplus：w/w/w.polyplus transfection.c/o/m.
運輸與保存方法
冰袋（wet ice）運輸。產品4 ºC保存，一年有效。不可冷凍！
注意事項
1）整個實驗過程使用無RNA酶和無熱原性的材料，如離心管、槍頭、緩沖液。
2）轉染前，確保siRNA/miRNA是經過PAGE純化和脫鹽處理過的，高純度的siRNA或者miRNA有助于獲得較高的轉染效率。
3）INTERFERin®轉染試劑應該在4 ºC保存，要注意避免多次反復長時間開蓋，否則可能會導致轉染試劑揮發(fā)，降低轉染效率。
4）轉染前一天，確保接種貼壁細胞密度在30%-50%，對于一些小細胞和生長緩慢的細胞，接種密度可適當擴大2倍。
5）轉染前，確保siRNA/miRNA基因沉默表達不會影響細胞活力。
6）該產品只適合體外轉染，不能用于體內轉染。
操作流程
一．貼壁細胞轉染（以24孔板和轉染1 nM siRNA為例，其他培養(yǎng)板加樣體積請參考表1）
為了提高轉染效率，建議在轉染前一天接種細胞，接種細胞密度建議30%-50%，建議初次使用時設置梯度進行優(yōu)化//佳使用量。
【注】：由于靶基因、細胞類型、siRNA效價、靶mRNA的半衰期和靶蛋白的周轉率等因素，均會影響siRNA的轉染效率。建議選取siRNA濃度在1 nM到10 nM之間。轉染試劑的體積應根據(jù)siRNA濃度和培養(yǎng)皿的大小進行調整，請參見下表1。
表1 siRNA終濃度為1 nM時，轉染試劑、培養(yǎng)基的用量參考值
培養(yǎng)皿 | siRNA物質的量(pmoles) | 每孔siRNA的含量（ng） | INTERFERin®轉染試劑體積（µL） | siRNA-INTERFERin®復合物的體積V1（µL） | *培養(yǎng)基的體積V2 | 終體積（V=V1+V2） |
96孔板 | 0.17 | 2.4 | 0.75 ± 0.5 | 50 | 125 µL | 175 µL |
24孔板 | 0.6 | 8.4 | 2 ± 1 | 100 | 500 µL | 600 µL |
12孔板 | 1.2 | 17 | 4 ± 2 | 200 | 1 mL | 1.2 mL |
6孔板 | 2.2 | 31 | 8 ± 4 | 200 | 2 mL | 2.2 mL |
25 cm2培養(yǎng)瓶 | 4.4 | 62 | 15 ± 5 | 400 | 4 mL | 4.4 mL |
75 cm2培養(yǎng)瓶 | 10.5 | 147 | 40 ± 10 | 500 | 10 mL | 10.5 mL |
表2 siRNA終濃度為10~50 nM時，轉染試劑、培養(yǎng)基的用量參考值
培養(yǎng)皿 | INTERFERin®轉染試劑體積（µL） | siRNA-INTERFERin®復合物的體積V1（µL） | *培養(yǎng)基的體積V2 | 終體積V（V=V1+V2） |
96孔板 | 1 ± 0.5 | 50 | 125 µL | 175 µL |
24孔板 | 3 ± 1 | 100 | 500 µL | 600 µL |
12孔板 | 6 ± 2 | 200 | 1 mL | 1.2 mL |
6孔板 | 12 ± 4 | 200 | 2 mL | 2.2 mL |
25cm2培養(yǎng)瓶 | 20 ± 5 | 400 | 4 mL | 4.4 mL |
二．懸浮細胞轉染（以24孔板和轉染5 nM siRNA為例，其他培養(yǎng)板加樣體積請參考表4）
接種細胞
1.為了優(yōu)化懸浮細胞轉染條件，與貼壁細胞相比，需要降低懸浮細胞的培養(yǎng)基的體積。根據(jù)培養(yǎng)皿大小和完整培養(yǎng)基的體積，推薦的接種懸浮細胞的數(shù)量如下表3所示。
表3 轉染當天，根據(jù)培養(yǎng)皿的大小，接種懸浮細胞數(shù)量參考值
培養(yǎng)皿 | 每孔接種細胞懸浮液體積（μL） | 轉染當天接種細胞數(shù) |
384孔板 | 25 | 5 ×103~1×104 |
96孔板 | 50 | 1×104~ ×104 |
24孔板 | 200 | 1×105 ~ 2×105 |
12孔板 | 500 | 2×105 ~ 4×105 |
6孔板 | 1000 | 5×105 ~ 2×106 |
25 cm2培養(yǎng)瓶 | 2000 | 2×106~ 5×106 |
2.按照以下體系配制siRNA-INTERFERin®復合物：
1）對于每孔細胞，使用100 μL無血清培養(yǎng)基（如OPTI-MEMⅠ培養(yǎng)基）稀釋21 ng siRNA (1.5 pmols)，混勻。
2）向100 μL的siRNA中加入4 μL的轉染試劑，立刻旋渦10秒，充分混勻。
3）在室溫孵育15 min，使得形成siRNA-INTERFERin®復合物。
【注】：孵育時間不要超過30 min
4）在每孔200 μL細胞懸浮液中，加入100 μL的siRNA-INTERFERin®復合物，輕輕混勻。終體積為300 µL，siRNA終濃度為5 nM。
5）37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)4-6 h后，再加入700 µL*培養(yǎng)基，輕輕搖動培養(yǎng)板使其混勻。
6）繼續(xù)放入培養(yǎng)箱中孵育，直至目的基因表達。建議一般mRNA表達水平通常在24-72 h，蛋白表達水平在48-96 h。
【注】：為了優(yōu)化內源性基因沉默，建議選取siRNA濃度在5 nM到20 nM之間。轉染試劑的體積應根據(jù)siRNA濃度和培養(yǎng)皿的大小進行調整，請參見下表4。
表4 siRNA濃度為5 nM時，在懸浮細胞中的參考值
培養(yǎng)皿 | 懸浮細胞的體積 | siRNA的濃度(pmoles) | 每孔siRNA的含量（ng） | 轉染試劑體積（µL） | siRNA-INTERFERin®復合物的體積（µL） | 轉染4-6h后另加入培養(yǎng)基的體積 |
384孔板 | 25 µL | 0.25 | 3.75 | 1 ± 0.5 | 25 | 0 µL |
96孔板 | 50 µL | 0.5 | 7.5 | 2 ± 1 | 50 | 100 µL |
24孔板 | 200 µL | 1.5 | 21 | 3 ± 2 | 100 | 700 µL |
12孔板 | 500 µL | 3.5 | 49 | 6 ± 4 | 200 | 1 mL |
6孔板 | 1 mL | 6 | 84 | 10 ± 8 | 200 | 2 mL |
25cm2培養(yǎng)瓶 | 2 mL | 12 | 168 | 15 ±10 | 400 | 4 mL |
表5 懸浮細胞中siRNA濃度、轉染試劑的用量參考值
siRNA的終濃度/孔 | 培養(yǎng)皿 | INTERFERin®轉染試劑的體積/孔 |
1 ~ 20 nM
| 386孔板 | 1 ± 0.5 µL |
96孔板 | 2 ± 1 µL | |
24孔板 | 3 ± 2 µL | |
6孔板 | 10 ± 8 µL | |
20 ~ 50 nM | 386孔板 | 1.5 ± 0.5 µL |
96孔板 | 3 ± 1 µL | |
24孔板 | 5 ± 2 µL | |
6孔板 | 15 ± 8 µL |
三．miRNA轉染操作流程
該轉染試劑也適合轉染miRNA，轉染貼壁細胞和懸浮細胞的具體操作請參考siRNA的操作流程。
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產品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 | 價格（元） |
jetPRIME®in vitro DNA & siRNA transfection reagent | 114-01 | 0.1 mL | 835.00 |
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jetOPTIMUS® in vitro DNA transfection reagent | 117-01 | 0.1 mL | 835.00 |
117-15 | 1.5 mL | 6855.00 | |
jetPEI®DNA transfection, HTS application | 101-10N | 1 mL | 4565.00 |
INTERFERin®in vitro siRNA/miRNA transfection reagent | 409-01 | 0.1 mL | 655.00 |
409-10 | 1 mL | 3135.00 |
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