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化工儀器網(wǎng)>產(chǎn)品展廳>試劑標物>行業(yè)專用試劑>生化與分子生物學用試劑> CD3/CD28人T細胞活化/擴增磁珠

CD3/CD28人T細胞活化/擴增磁珠

參考價4500.00
具體成交價以合同協(xié)議為準
規(guī)格
1ml4500.00元100 個 可售

聯(lián)系我們時請說明是化工儀器網(wǎng)上看到的信息,謝謝!


上海聯(lián)贏生物科技有限公司是一家實驗室產(chǎn)品專業(yè)服務(wù)商,致力于為生命科學、生物技術(shù)、藥物研究、醫(yī)學診斷、醫(yī)療器械等領(lǐng)域提供專業(yè)技術(shù)服務(wù)。我們的產(chǎn)品主要包括分析儀器、實驗室設(shè)備、試劑、耗材和軟件等,期待與志同道合的行業(yè)精英共同合作,技術(shù)創(chuàng)新,為中國生命科學領(lǐng)域研究者提供更好的綜合解決方案。

分析儀器、實驗室設(shè)備、試劑、耗材

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 1ml
貨號 CS-21001-1 應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥/生物制藥,綜合
產(chǎn)品介紹

T細胞活化和擴增需要同時提供CD3/TCR信號和CD28共刺激信號。東嶺生物經(jīng)過長期優(yōu)化,推出CD3/ CD28人T細胞活化/擴增磁珠產(chǎn)品,該磁珠通過在4.5μm粒徑磁珠表面偶聯(lián)抗CD3和抗CD28單克隆抗體,可在體外模擬體內(nèi)抗原提呈細胞對T細胞進行高效的活化與擴增。

產(chǎn)品特點

與進口和國產(chǎn)同類產(chǎn)品相比,磁珠活化效率更高,病毒感染效率更高,擴增倍數(shù)更多


其他本試劑盒未提供但需用的重要試劑和組分

培養(yǎng)基

胎牛血清

磷酸鹽緩沖液PBS

EDTA


使用說明

(請詳細閱讀使用說明后再開始相關(guān)實驗)

A. CD3/CD28 單抗偶聯(lián)磁珠的準備

使用前,需要洗去磁珠的保存液。

1.在使用前,將磁珠懸浮液震蕩重懸30秒,以獲得均一的懸浮液;

2.根據(jù)需要,轉(zhuǎn)移適量磁珠懸浮液至Eppendorf管中;

3.加入等體積的清洗液,或至少1ml磁珠清洗液,通過震蕩5秒或反復(fù)吹打10次均勻混合;

4.將管子置于磁力架3分鐘,在分離過程中,不要將管子從磁力架上取下;

注:請勿使用低于推薦的時間,以免磁珠脫落損失。

5.用移液器將管中上清液移除(此時管置于磁力架上);

6.重復(fù)洗一次(步驟3-4),然后將磁珠重懸于緩沖液或培養(yǎng)基備用;

B. 人T細胞的活化

1.按照標準程序獲得純化的2×106個T細胞;

2.加入20μL本品磁珠,以獲得1:1的磁珠與細胞比例(不同細胞量參考培養(yǎng)體積建議表);

3.根據(jù)特定實驗要求,在37℃的CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

4.收集活化的T細胞,直接用于進一步分析。

5.對于流式細胞儀應(yīng)用,在染色前應(yīng)去除磁珠。將細胞懸液收集至Eppendorf管中,置于磁力架1-2分鐘,將含有細胞的上清液轉(zhuǎn)移至新Eppendorf 管中,棄磁珠。

C. 人T細胞的擴增

1.以1×106個純化的T細胞/ mL的濃度將細胞接種于合適的組織培養(yǎng)板或組織培養(yǎng)瓶中;

2.按照每1×106個純化的T細胞加入10 μL本品磁珠,確保磁珠與細胞的比例為1:1;

3.培養(yǎng)基中加入30 U/mL 重組人IL-2;

4.根據(jù)特定實驗要求,在37℃的CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

5.每日檢查細胞培養(yǎng)物,觀察細胞大小和形狀;

6.*重懸后,每兩天計數(shù)細胞;

7.當細胞密度超過2.5×106個細胞/ml或當培養(yǎng)基變成黃色時,將細胞適當擴孔。


注意事項

1.在使用前,必須將磁珠充分混勻重懸;

2.切勿使用低于推薦劑量的磁珠;

3.使用過程中避免產(chǎn)生氣泡;

4.在流式細胞儀分析之前,應(yīng)去除磁珠以及與磁珠結(jié)合的細胞。T細胞激活后的2-3天,一些細胞會牢固地與磁珠結(jié)合,可通過移液*重懸磁珠/細胞懸液,在磁力架上分離磁珠和細胞,收集含有T細胞的上清液。

5.當使用細胞進行蛋白質(zhì)組學或基因表達等分子水平研究時,在去除磁珠之前需先裂解細胞。


附錄

規(guī)格

2×105T細胞

1×106T細胞

50×106T細胞

培養(yǎng)板/培養(yǎng)瓶的規(guī)格

96孔板

24孔板

175cm2培養(yǎng)瓶

CD3/CD28 單抗偶聯(lián)磁珠

2μl

10μl

500μl

rlL-2

30 U/ml

30 U/ml

30 U/ml

培養(yǎng)基體積

100-200μl

1-2ml

50-100ml

表1. 磁珠:細胞=1:1時培養(yǎng)基及磁珠體積推薦表


數(shù)據(jù)展示

圖1:使用東嶺

CD3/CD28人T細胞活化/擴增磁珠活化人CD3+T細胞,磁珠與細胞比例1:1,活化24小時后顯微鏡拍照記錄T細胞克隆形成明顯。

圖2:使用東嶺

CD3/CD28人T細胞活化/擴增磁珠活化人CD3+T細胞,磁珠與細胞比例1:1,活化24小時后流式染色CD25/CD69鑒定T細胞活化優(yōu)秀。

圖3:使用東嶺CD3/CD28人T細胞活化/ 擴增磁珠活化人CD3+T細胞,磁珠與細胞比例1:1,活化24小時后感染GFP慢病毒,MOI=1.0(即病毒顆粒與T細胞數(shù)目比例為1:1),感染效率達~60%之多。

圖4:使用東嶺CD3/CD28人T細胞活化/ 擴增磁珠活化培養(yǎng)人CD3+T細胞,磁珠與細胞比例1:1,10天內(nèi)擴增達100倍以上。




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