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帕金森病動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)

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   上海達(dá)為科生物科技有限公司,位于上海長(zhǎng)江軟件園,公司目前具備較好的生物學(xué)、醫(yī)學(xué)技術(shù)服務(wù)平臺(tái),能夠?yàn)閺V大客戶提供醫(yī)學(xué)科研樣本檢測(cè)、合作研究、開(kāi)發(fā)及生產(chǎn)服務(wù)。

公司擁有專業(yè)的實(shí)驗(yàn)室、先進(jìn)的實(shí)驗(yàn)設(shè)備和經(jīng)驗(yàn)豐富的科研技術(shù)人員。技術(shù)團(tuán)隊(duì)包括研究員(博士后)2人,助理研究員(博士)4人,核心研究員(碩士)15人,主要致力于基因組學(xué)、轉(zhuǎn)錄組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、代謝組學(xué)、生物化學(xué)、病理檢測(cè)、基因檢測(cè)等技術(shù)在科研中的應(yīng)用與推廣。通過(guò)高度細(xì)分、較好的服務(wù)平臺(tái),為廣大客戶提供了完善的技術(shù)解決方案和服務(wù)。目前,,涉及臨床醫(yī)學(xué)、腫瘤生物學(xué)、免疫學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)等生命科學(xué)、醫(yī)學(xué)等諸多領(lǐng)域。

我們的目標(biāo)是為了使您的工作更輕松、更快捷。為了實(shí)現(xiàn)一站式服務(wù)我們不斷更新實(shí)驗(yàn)方法和引進(jìn)新的產(chǎn)品,控制和降低各種成本,為您的研究加油。這既是一項(xiàng)長(zhǎng)期而艱巨的工作,又是一項(xiàng)光榮的工作,同時(shí)也是我們企業(yè)發(fā)展的動(dòng)力源泉。

 

 

 

 

制作動(dòng)物模型 細(xì)胞培養(yǎng) 分子生物學(xué)檢測(cè) 病理學(xué)形態(tài)檢測(cè) 蛋白質(zhì)技術(shù) 免疫學(xué)檢測(cè) 提供培訓(xùn)服務(wù)各種檢驗(yàn)儀器設(shè)備、玻璃儀器及器具、一次性耗材等

自發(fā)現(xiàn)以來(lái),6-OHDA一直在帕金森病的臨床前研究中扮演著重要角色。由Ungerstedt和Arbuthnott在1970年共同創(chuàng)立的單側(cè)注射旋轉(zhuǎn)模型成為了在模式動(dòng)物上被最為廣泛使用的帕金森模型之一。

6-羥多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)是多巴胺的羥基化衍生物,因其化學(xué)結(jié)構(gòu)與DA類似,因此能夠同DA競(jìng)爭(zhēng)攝取位點(diǎn),進(jìn)而被攝入胞內(nèi)。進(jìn)入胞內(nèi)后,6-OHDA能夠被氧化分解,產(chǎn)生活性氧,通過(guò)MAO(單胺氧化酶)進(jìn)一步產(chǎn)生氧自由基,或直接引起線粒體功能障礙,導(dǎo)致DA能神經(jīng)元死亡。

因其造成動(dòng)物的生物化學(xué)和神經(jīng)化學(xué)損傷類似于PD,故常被用于誘導(dǎo)動(dòng)物PD模型。

由于6-OHDA不能穿透血腦屏障,因此為了達(dá)到中樞神經(jīng)系統(tǒng)毀傷的效果,在使用6-OHDA進(jìn)行帕金森造模時(shí),需要直接注射入動(dòng)物腦內(nèi),才能損傷中樞神經(jīng)元。

通過(guò)使用腦li體定wei注射技術(shù)將6-OHDA注射到前腦內(nèi)側(cè)束(其向前腦傳遞多巴胺能和5-羥色胺能投射)或紋狀體靶向黑質(zhì)紋狀體多巴胺能途徑來(lái)獲得帕金森模型大鼠?!揪唧w的注射位點(diǎn)可以是黑質(zhì)致密部(substantia nigra pars compacta, SNpc)、紋狀體(striatum)或者位于二者之間的前腦內(nèi)側(cè)束(MFB)。】

可以進(jìn)行單側(cè)造模與雙側(cè)造模,其中單側(cè)造??梢蕴岣邉?dòng)物耐受力,并可以將正常側(cè)作為內(nèi)部控制組與造模側(cè)進(jìn)行對(duì)照研究,以便于更好地區(qū)分正常與異常運(yùn)動(dòng)區(qū)并評(píng)估損傷引起的運(yùn)動(dòng)缺陷。


帕金森病動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)方法:


①SD大鼠適應(yīng)一周后,腹腔麻醉,將麻醉后大鼠固定于腦li體定向儀上。

②剪開(kāi)頭皮后用棉簽輕輕擦拭顱骨表面,將前囟(bregma)和后囟(lambda)點(diǎn)暴露出來(lái)。

③調(diào)節(jié)立li定wei儀,將前囟和后囟點(diǎn)的高度調(diào)節(jié)到一致。以前囟(Bregma)點(diǎn)為原點(diǎn),找到注射位點(diǎn)所在的坐標(biāo)

④用顱骨zuan沿注射坐標(biāo)位點(diǎn)鉆孔,以保證微量注射器進(jìn)針時(shí)不碰到孔壁。使用微量注射器吸取6-OHDA(注意避光),緩慢插入注射位點(diǎn),以0.5ul/min的速度將6-OHDA注射到目標(biāo)腦區(qū),注射劑量為4μl。



帕金森病動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證

由于動(dòng)物行為特異性差異,判斷大鼠帕金森病模型是否成功,通常以動(dòng)物出現(xiàn)旋轉(zhuǎn)行為的次數(shù)為標(biāo)準(zhǔn),一般超過(guò)7轉(zhuǎn)/min即為成功的帕金森病模型,否則為不成功模型。

這類模型優(yōu)點(diǎn)是注射靶位選取靈活,注射劑量可調(diào),動(dòng)物行為變化穩(wěn)定可靠,檢測(cè)量化性好,多用于PD的臨床前藥物研究和藥理療效判定、神經(jīng)保護(hù)、細(xì)胞移植和基因治療等方面的研究。

缺點(diǎn)是①神經(jīng)元的毀損出現(xiàn)的較早,這與臨床PD病人的中腦黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元的漸進(jìn)性死亡不同;②近距離的毀損很難把握毀損的程度,這使得采用這種方法獲取部分損毀的模型的成功率很低;③小鼠在異常不自主運(yùn)動(dòng)嚴(yán)重程度方面表現(xiàn)出較大的變異性,這會(huì)加大實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的不穩(wěn)定性。

在建模過(guò)程中,研究者需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪x擇合適的模型,并嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)條件,以確保模型的可靠性和有效性。最新的研究進(jìn)展表明,基因編輯技術(shù)在構(gòu)建帕金森

病模型方面展現(xiàn)出了巨大的潛力,尤其是在非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物模型中,這些模型能夠更好地模擬人類帕金森病的復(fù)雜病理過(guò)程。此外,通過(guò)超聲影像等技術(shù)可以對(duì)

模型的腦內(nèi)病變進(jìn)行評(píng)估,提高模型的應(yīng)用價(jià)值。


參考:

[1]    張思妍,王寶,陶凱,等. 帕金森病大鼠模型的建立及超聲影像評(píng)價(jià)[J]. 中華超聲影像學(xué)雜志,2020,29(06):540-544.




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