如何選擇合適的蛋白質(zhì)定量技術(shù)：iTRAQ vs SILAC檢測技術(shù)服務(wù)詳情介紹

在dànbáizhì組學(xué)研究中，準(zhǔn)確的dànbáizhì定量技術(shù)是揭示生物過程變化的核心。iTRAQ和SILAC作為兩種廣泛應(yīng)用的dànbáizhì定量方法，各自具備dútè優(yōu)勢與局限。理解兩者的技術(shù)原理、適用場景與關(guān)鍵差異，對于制定高效可靠的實(shí)驗(yàn)方案至關(guān)重要。

一、iTRAQ與SILAC的基本原理解析

1、iTRAQ技術(shù)簡介

iTRAQ（Isobaric Tags for Relative and Absolute Quantitation）是基于同位素標(biāo)記的定量策略，通過在dànbáizhì酶解后的肽段上進(jìn)行化學(xué)標(biāo)記，使不同樣本中的同一肽段在質(zhì)譜中產(chǎn)生不同質(zhì)量的報告離子。通過測量報告離子強(qiáng)度，可以推算出各樣本中dànbáizhì的相對豐度。iTRAQ支持4-plex、8-plex甚至16-plex標(biāo)記，適合多樣本同時分析。

2、SILAC技術(shù)簡介

SILAC（Stable Isotope Labeling by Amino acids in Cell culture）則是一種代謝性標(biāo)記技術(shù)，通過向細(xì)胞培養(yǎng)基中添加含穩(wěn)定同位素的必需氨基酸，使細(xì)胞在生長過程中將標(biāo)記氨基酸自然整合到dànbáizhì中。輕重肽段在質(zhì)譜檢測時表現(xiàn)出可區(qū)分的質(zhì)量差異，實(shí)現(xiàn)樣本間的相對定量。SILAC標(biāo)記效率高、實(shí)驗(yàn)流程簡潔，特別適用于動態(tài)變化分析。

二、iTRAQ與SILAC的應(yīng)用特性比較

1、樣本類型適用性

• iTRAQ適用于各種類型的dànbáizhì樣本，包括細(xì)胞、組織、血漿、血清及臨床樣本。由于標(biāo)記在肽段水平進(jìn)行，不依賴于細(xì)胞培養(yǎng)，可靈活應(yīng)用于各種生物材料。

• SILAC則主要用于可以體外培養(yǎng)的細(xì)胞系，例如HeLa、293T等人源細(xì)胞。對于不可培養(yǎng)或難以標(biāo)記的樣本，如組織切片或血液樣本，SILAC不適用。

2、定量精度與信號一致性

• iTRAQ在復(fù)雜樣本中可能出現(xiàn)比值壓縮（Ratio Compression）現(xiàn)象，即低豐度信號被背景噪聲稀釋，導(dǎo)致實(shí)際差異低估。但借助高分辨質(zhì)譜儀器與優(yōu)化分離技術(shù)，可以有效減輕這一影響。

• SILAC因標(biāo)記在細(xì)胞生長階段完成，避免了酶解或后處理過程中的人為偏差，定量結(jié)果高度準(zhǔn)確，適合追蹤微小的表達(dá)變化。

3、實(shí)驗(yàn)通量與數(shù)據(jù)規(guī)模

• iTRAQ支持高通量分析，一次性處理4-16個樣本，大幅提高了數(shù)據(jù)生成速度，適合多組別、多變量的大規(guī)模項(xiàng)目，如藥物篩選、時間序列分析。

• SILAC通常處理2-3個條件組（輕、中、重標(biāo)簽），適合處理簡單的實(shí)驗(yàn)設(shè)計，例如藥物處理前后或敲除/過表達(dá)實(shí)驗(yàn)，但在處理復(fù)雜實(shí)驗(yàn)時存在一定限制。

三、選擇dànbáizhì定量技術(shù)的關(guān)鍵考量因素

1、研究目標(biāo)與實(shí)驗(yàn)設(shè)計

• 若需要比較多個實(shí)驗(yàn)組，如多劑量梯度、多時間點(diǎn)采樣或多臨床樣本分析，iTRAQ憑借高通量能力更能勝任。

• 若研究關(guān)注動態(tài)生物過程，如細(xì)胞信號通路響應(yīng)、dànbáizhì翻譯后修飾變化等，且樣本為可培養(yǎng)細(xì)胞，SILAC以其高準(zhǔn)確性和低變異性更具優(yōu)勢。

2、樣本來源與制備條件

• 當(dāng)實(shí)驗(yàn)材料為血清、血漿、組織或固定樣本，可以選擇iTRAQ。iTRAQ不依賴細(xì)胞代謝活性，因此能覆蓋更廣泛的樣本類型。

• 對于體外培養(yǎng)且能耐受同位素標(biāo)記培養(yǎng)基的細(xì)胞系，SILAC可以實(shí)現(xiàn)近乎無偏差的內(nèi)源標(biāo)記，適合高精度需求的基礎(chǔ)研究。

3、數(shù)據(jù)分析需求與技術(shù)挑戰(zhàn)

• iTRAQ實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)較大，且由于比值壓縮效應(yīng)，數(shù)據(jù)分析需要使用高效、專門的軟件工具（如Proteome Discoverer），并結(jié)合正交驗(yàn)證方法增加可信度。

• SILAC數(shù)據(jù)相對簡潔，輕重肽段對應(yīng)，便于初步分析和定量，但當(dāng)涉及多重修飾或多狀態(tài)比較時，數(shù)據(jù)處理也需zhuānyè軟件支持，如MaxQuant。

iTRAQ與SILAC作為dànbáizhì定量的兩大主流技術(shù)，各自在不同研究需求中展現(xiàn)出dútè優(yōu)勢。合理評估實(shí)驗(yàn)樣本、研究目標(biāo)、預(yù)算及實(shí)驗(yàn)條件，科學(xué)選擇適合的定量方法，將直接決定項(xiàng)目的效率與數(shù)據(jù)質(zhì)量。在追求jīngzhǔn科學(xué)探索的道路上，百泰派克生物科技致力于為科研人員提供zhuānyè、高效、可信賴的定量蛋白組分析服務(wù)，與您攜手推進(jìn)生命科學(xué)的邊界。

百泰派克生物科技特色項(xiàng)目

一、蛋白測序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統(tǒng)對dànbáizhì序列進(jìn)行分析，提供基于質(zhì)譜的蛋白測序分析服務(wù)，包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析，Nduāncèxù，Cduāncèxù和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務(wù)。對于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務(wù)，對蛋白序列進(jìn)行分析。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1.采用目前世界上優(yōu)良的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實(shí)現(xiàn)對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測定蛋白N端多達(dá) 70個氨基酸序列;

4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測;

6.測序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、dànbáizhì組學(xué)

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺結(jié)合Nano-LC，提供定量dànbáizhì組學(xué)、靶向dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、翻譯后修飾蛋白組學(xué)等多種dànbáizhì組學(xué)分析服務(wù)。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學(xué)服務(wù)，助力微量樣本蛋白組學(xué)、大樣本群醫(yī)學(xué)及高通量修飾組學(xué)等研究工作。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規(guī)模實(shí)驗(yàn)分析，發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)記物;

2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標(biāo)記方法，適用于分析組織、細(xì)胞、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高，實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)度高;

4.可檢測較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學(xué)分析，分析更系統(tǒng)準(zhǔn)確。

三、單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進(jìn)行單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析，采用金屬元素標(biāo)記物（通常是金屬元素標(biāo)記的特異抗體）標(biāo)記細(xì)胞表面和內(nèi)部的分子，然后用流式細(xì)胞原理分離單個細(xì)胞，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個細(xì)胞的原子質(zhì)量譜，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細(xì)胞表面和內(nèi)部的信號分子表達(dá)量。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1.技術(shù)優(yōu)良，*技術(shù)空白

采用金屬標(biāo)記抗體技術(shù)，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問題。可在單細(xì)胞層面上對多種指標(biāo)同時進(jìn)行表征，百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標(biāo)蛋白。

2.分析數(shù)量大，成本較低

單細(xì)胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細(xì)胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個左右，而流式質(zhì)譜技術(shù)一次（單樣本）就可分析至少10^5的細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)了數(shù)量級的提高，且成本不高于單細(xì)胞RNAseq。

3.應(yīng)用前景大

①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細(xì)胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機(jī)制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標(biāo)簽技術(shù)與其他技術(shù)結(jié)合會有新應(yīng)用方向。除常規(guī)蛋白外，質(zhì)譜流式細(xì)胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測細(xì)胞存活率、細(xì)胞大小、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達(dá)量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實(shí)現(xiàn)10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學(xué)分析平臺進(jìn)行免疫肽組學(xué)分析，可從zuì小的樣品材料中進(jìn)行可重復(fù)的識別和定量。該服務(wù)可以應(yīng)用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標(biāo)。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術(shù)，MALDI TOF，高效色譜分離技術(shù)，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結(jié)構(gòu)分析，到產(chǎn)品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務(wù)，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì)。

百泰派克生物科技七大檢測平臺

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質(zhì)譜多組學(xué)優(yōu)質(zhì)服務(wù)商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測和項(xiàng)目驗(yàn)證等zhuānyè服務(wù)。公司實(shí)驗(yàn)室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導(dǎo)原則，通過CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認(rèn)證，建立了完備的質(zhì)量體系，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份，設(shè)備定期計量/期間核查，軟件審計追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術(shù)服務(wù)，支持新藥研發(fā)、藥物申報注冊和生產(chǎn)放行。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的CRO檢測分析服務(wù)；

2.獲國家CNAS實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務(wù)；

3.業(yè)務(wù)范圍覆蓋dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、代謝組學(xué)、生物藥物表征、單細(xì)胞分析、單細(xì)胞質(zhì)譜流式、生信云分析以及多組學(xué)生物質(zhì)譜整合分析等；

4.七大質(zhì)量控制檢測平臺，滿足您一站式服務(wù)需求；

5.服務(wù)3000+企業(yè)，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務(wù)!

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