靶向蛋白定量：PRM技術(shù)如何在多肽水平實現(xiàn)精準分析？檢測技術(shù)服務詳情介紹

dànbáizhì組學研究中，如何對感興趣蛋白進行準確、可重復的定量分析，是疾病機制解析、藥物靶點確認及臨床轉(zhuǎn)化研究的關(guān)鍵需求。而由于dànbáizhì復雜性及其表達水平的高度動態(tài)范圍，直接進行dànbáizhì層面定量往往面臨巨大挑戰(zhàn)。因此，多肽層面的定量策略成為主流路徑。PRM技術(shù)（Parallel Reaction Monitoring）作為bǎxiàngdàn白定量質(zhì)譜分析的重要工具，憑借其高選擇性與高靈敏度，正在多肽層面實現(xiàn)qiánsuǒwèiyǒu的jīngzhǔn定量。本文將系統(tǒng)闡述PRM技術(shù)在多肽定量中的關(guān)鍵機制、技術(shù)優(yōu)勢與優(yōu)化路徑，并介紹百泰派克生物科技的解決方案。

一、PRM技術(shù)多肽水平定量的基本原理

dànbáizhì經(jīng)酶解后轉(zhuǎn)化為一系列肽段，這些肽段作為特征性離子，代表其來源蛋白的表達水平。多肽層面的定量，實質(zhì)上是通過質(zhì)譜技術(shù)對特定肽段進行選擇性檢測，并以其峰面積或強度為基礎進行定量推斷。

關(guān)鍵點包括：

（1）選擇代表性肽段（proteotypic peptides），需具備dútè性、高響應性和穩(wěn)定性。

（2）確保肽段在不同樣本中酶解效率一致，且無翻譯后修飾干擾。

（3）利用穩(wěn)定同位素標記肽（SIL peptides）作為內(nèi)標校準，有效消除樣本間及儀器漂移造成的偏差。

二、PRM技術(shù)在多肽定量中的原理與優(yōu)勢

PRM是一種基于高分辨率質(zhì)譜儀（如Orbitrap）實現(xiàn)的bǎxiàngdàn白定量掃描技術(shù)，其核心優(yōu)勢在于：

1、全碎片離子監(jiān)測：相比SRM需預設1~2對transition，PRM可同時采集所有碎片離子，提高特異性與定量靈活性。

2、高分辨率降低干擾：通過jīngquè質(zhì)量篩選（通常為0.005~0.01 Da），有效過濾背景噪聲，保障低豐度肽段的檢測準確性。

3、后處理可調(diào)整定量策略：研究者可根據(jù)數(shù)據(jù)質(zhì)量靈活選擇zuì佳定量離子，提高結(jié)果穩(wěn)定性。

三、影響多肽定量精度的關(guān)鍵因素

1、肽段選擇與合成：應避免肽段中含有修飾位點、錯義氨基酸或易降解序列。

2、內(nèi)標肽設計與添加：內(nèi)標肽需嚴格匹配目標肽序列，僅在末端引入同位素標簽；添加時機應在酶解前，確保全過程校準。

3、色譜分離性能：良好的峰形和保留時間穩(wěn)定性是實現(xiàn)線性定量的基礎。

4、質(zhì)譜參數(shù)設置：包括孤立窗口（1~2 Da）、zuì大注入時間、掃描周期等，均需優(yōu)化至靶標響應zuì佳。

5、背景抑制與信號強化：采用多階段洗脫、梯度優(yōu)化、離線分級（如SPE）以減少共洗脫干擾。

四、PRM vs SRM/MRM：在多肽定量中的對比優(yōu)勢

百泰派克生物科技搭建了基于Orbitrap Exploris 480的PRMbǎxiàngdàn白定量平臺，具備以下核心技術(shù)能力：

1、高通量靶點篩選服務：結(jié)合DIA數(shù)據(jù)與in silico預測，構(gòu)建靶標肽段候選庫。

2、SIL肽定制與質(zhì)量控制體系：支持多肽級穩(wěn)定同位素內(nèi)標定制，嚴格驗證純度與定量準確性。

3、自動化PRM技術(shù)開發(fā)流程：依托Skyline平臺，實現(xiàn)從靶標選擇到參數(shù)優(yōu)化的全流程標準化。

4、復雜樣本適配能力：可處理血漿、組織勻漿、腦脊液等高背景樣本，提供多維富集與清潔化方案。

多肽定量的智能化發(fā)展路徑 隨著機器學習算法與AI輔助方法的引入，未來PRM數(shù)據(jù)處理將更加智能化：

1、自動識別zuì佳定量離子組合

2、動態(tài)調(diào)整采集窗口提升靈敏度

3、多樣本跨批次標準化分析

此外，結(jié)合中等通量自動化平臺與多肽靶點數(shù)據(jù)庫，將加速疾病標志物的驗證效率，為jīngzhǔn醫(yī)學研究提供高質(zhì)量證據(jù)支持。PRM技術(shù)已成為多肽層面jīngzhǔnbǎxiàngdàn白定量的重要手段，尤其在面對低豐度、復雜背景與高重復性要求的科研場景中表現(xiàn)出顯著優(yōu)勢。百泰派克生物科技將繼續(xù)以zhuānyè的質(zhì)譜平臺與定制化服務，助力科研客戶實現(xiàn)更高精度、更強可重復性的bǎxiàngdàn白定量分析。

百泰派克生物科技特色項目

一、蛋白測序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統(tǒng)對dànbáizhì序列進行分析，提供基于質(zhì)譜的蛋白測序分析服務，包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析，Nduāncèxù，Cduāncèxù和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務。對于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務，對蛋白序列進行分析。

※服務優(yōu)勢：

1.采用目前世界上*的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實現(xiàn)對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;

4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測;

6.測序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、dànbáizhì組學

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺結(jié)合Nano-LC，提供定量dànbáizhì組學、靶向dànbáizhì組學、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種dànbáizhì組學分析服務。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學服務，助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫(yī)學及高通量修飾組學等研究工作。

※服務優(yōu)勢：

1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規(guī)模實驗分析，發(fā)現(xiàn)新的生物標記物;

2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標記方法，適用于分析組織、細胞、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高，實驗結(jié)果重復度高;

4.可檢測較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學分析，分析更系統(tǒng)準確。

三、單細胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進行單細胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析，采用金屬元素標記物（通常是金屬元素標記的特異抗體）標記細胞表面和內(nèi)部的分子，然后用流式細胞原理分離單個細胞，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個細胞的原子質(zhì)量譜，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細胞表面和內(nèi)部的信號分子表達量。

※服務優(yōu)勢：

1.技術(shù)*，*技術(shù)空白

采用金屬標記抗體技術(shù)，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問題。可在單細胞層面上對多種指標同時進行表征，百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。

2.分析數(shù)量大，成本較低

單細胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個左右，而流式質(zhì)譜技術(shù)一次（單樣本）就可分析至少10^5的細胞，實現(xiàn)了數(shù)量級的提高，且成本不高于單細胞RNAseq。

3.應用前景大

①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標簽技術(shù)與其他技術(shù)結(jié)合會有新應用方向。除常規(guī)蛋白外，質(zhì)譜流式細胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測細胞存活率、細胞大小、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現(xiàn)10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析，可從zuì小的樣品材料中進行可重復的識別和定量。該服務可以應用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術(shù)，MALDI TOF，高效色譜分離技術(shù)，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結(jié)構(gòu)分析，到產(chǎn)品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì)。

百泰派克生物科技七大檢測平臺

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質(zhì)譜多組學優(yōu)質(zhì)服務商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導原則，通過CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認證，建立了完備的質(zhì)量體系，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份，設備定期計量/期間核查，軟件審計追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術(shù)服務，支持新藥研發(fā)、藥物申報注冊和生產(chǎn)放行。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎的CRO檢測分析服務；

2.獲國家CNAS實驗室認可，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務；

3.業(yè)務范圍覆蓋dànbáizhì組學、多肽組學、代謝組學、生物藥物表征、單細胞分析、單細胞質(zhì)譜流式、生信云分析以及多組學生物質(zhì)譜整合分析等；

4.七大質(zhì)量控制檢測平臺，滿足您一站式服務需求；

5.服務3000+企業(yè)，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務!

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