Alexa Fluor 680-Streptavidin,關(guān)于偶聯(lián)技術(shù)的原理
試劑簡介
Alexa Fluor 680是一種遠紅外熒光染料,激發(fā)波長為679 nm,發(fā)射波長702 nm,適用于需要長波長檢測的實驗(如避免生物樣本自發(fā)熒光干擾)。
其與鏈霉親和素(Streptavidin)的偶聯(lián)物Alexa Fluor 680-Streptavidin結(jié)合了以下特性:
鏈霉親和素特性:四聚體蛋白(分子量約60-66 kDa),非糖基化且電荷中性(pI≈6.0-6.8),與生物素結(jié)合親和力較高,耐受條件(如pH 2-13、95℃高溫)。
熒光染料優(yōu)勢:Alexa Fluor 680 光穩(wěn)定性強、水溶性高,量子產(chǎn)率高于傳統(tǒng)染料(如Cy5.5),適合長時間成像或多色流式分析。
偶聯(lián)技術(shù)原理
Alexa Fluor 680通過化學交聯(lián)(如NHS酯反應(yīng))共價結(jié)合到Streptavidin的賴氨酸殘基上,形成熒光標記復合物。關(guān)鍵特性包括:
標記效率:通常標記比為每分子Streptavidin偶聯(lián)4-6個染料分子,平衡熒光強度與蛋白活性。
水溶性:磺酸化結(jié)構(gòu)確保偶聯(lián)物無需有機溶劑溶解,可直接用于生物體系。
應(yīng)用兼容性:適用于Western blot、流式細胞術(shù)、免疫組化等多種平臺。
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