摘要：機(jī)體免疫功能受抑制時(shí)，單核細(xì)胞或巨噬細(xì)胞內(nèi)潛伏的或持續(xù)存在的人類巨細(xì)胞病毒（HCMV）感染會(huì)重新激活。我們研究了甘草甜素，環(huán)孢霉素A,和腫瘤壞死因子α對U-９３７細(xì)胞和MRC－５細(xì)胞中感染的人類巨細(xì)胞病毒（HCMV）的病毒DNA合成和抗原表達(dá)的作用。雖然在本研究中，根據(jù)流式細(xì)胞儀和免疫熒光分析的結(jié)果，甘草甜素對人類單核細(xì)胞系U-９３７細(xì)胞和人類胚胎肺細(xì)胞系MRC－５細(xì)胞中的人類巨細(xì)胞病毒（HCMV）的抗原表達(dá)都有抑制作用，用聚和酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)方法仍可檢測到超早期的人類巨細(xì)胞病毒（HCMV）DNA。環(huán)孢霉素A,和腫瘤壞死因子對U-９３７細(xì)胞和MRC－５細(xì)胞中感染的人類巨細(xì)胞病毒（HCMV）沒有抑制作用。U-９３７細(xì)胞和MRC－５細(xì)胞中人類巨細(xì)胞病毒（HCMV）感染的模型不僅有助于闡明持續(xù)感染的機(jī)制，而且也有助于闡明抗人類巨細(xì)胞病毒（HCMV）的化學(xué)因子的作用機(jī)制。J.Leukoc.Biol.５５：２４－２８；１９９４。

關(guān)鍵詞：巨細(xì)胞病毒，甘草甜素，U-９３７細(xì)胞，MRC－５細(xì)胞，聚和酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)

引言

雖然人類巨細(xì)胞病毒（HCMV）感染在人的一生中任何時(shí)候均會(huì)出現(xiàn)，每次感染的臨床特征卻各不相同。人類巨細(xì)胞病毒（HCMV）感染zui常見的是引起先天的和圍生期的感染，但它在輸血獲得性感染方面也占重要地位，在器官移植病人，接受免疫移植劑化療的病人，接受大劑量皮質(zhì)醇激素治療的病人，或人類免疫缺陷病毒１型（HIV-1）感染的患者的發(fā)病率和死亡率方面也有舉足輕重的作用〔１〕。巨細(xì)胞病毒原發(fā)感染通常是個(gè)良性的過程，但是從此病毒就會(huì)在宿主細(xì)胞中潛伏下來或持續(xù)存在。一旦宿主的免疫功能受抑制時(shí)，這些潛伏或持續(xù)的感染就會(huì)被重新激活，產(chǎn)生多種多樣的臨床表現(xiàn)。單核－巨噬細(xì)胞系的細(xì)胞似乎是人類巨細(xì)胞病毒（HCMV）潛伏或持續(xù)感染的主要場所〔２，３〕。但是，在體外很難使人類巨細(xì)胞病毒（HCMV）感染單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。在無癥狀的病毒攜帶者的外周血細(xì)胞中，檢測不到巨細(xì)胞病毒的基因表達(dá)〔４－６〕。我們成功地使該病毒的AD１６９株感染了人類單核細(xì)胞系U-９３７細(xì)胞，并獲得了一個(gè)人類巨細(xì)胞病毒（HCMV）的臨床分離株〔７〕。為了研究抗巨細(xì)胞病毒因子對人類巨細(xì)胞病毒（HCMV）感染的U-９３７細(xì)胞中病毒重新激活的抑制作用。因此，我們研究了甘草甜素，環(huán)孢霉素A,和腫瘤壞死因子α對U-９３７細(xì)胞和MRC－５細(xì)胞中感染的人類巨細(xì)胞病毒（HCMV）的病毒DNA合成和抗原表達(dá)的作用。

縮寫：ATCC，American Type Culture Collection；CMV 巨細(xì)胞病毒；CsA 環(huán)孢霉素A；EA 早期抗原；GL甘草甜素；HCMV 人類巨細(xì)胞病毒；HIV-1 ，人類免疫缺陷病毒１型；HLA,人類白細(xì)胞抗原；IEA，超早期抗原；IFA，免疫熒光分析；IgG，免疫球蛋白G；LA晚期抗原；mAb，單克隆抗體；MOI，多重感染指數(shù)；PBS，磷酸鹽緩沖液；PCR，聚和酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)；PKC，蛋白激酶C；TNF-α,腫瘤壞死因子-α；VZA，水痘－帶狀皰疹病毒

重印許可：日本，Hokkaido,Sapporo 醫(yī)科大學(xué)，臨床醫(yī)學(xué)院，兒科系

材料和方法

細(xì)胞系和人類巨細(xì)胞病毒（HCMV）的擴(kuò)增：

U-９３７細(xì)胞單核細(xì)胞系是從美國類型培養(yǎng)樣品庫（American Type Culture　Collection,ATCC）獲得的，并于加有１０％加熱滅活的胎牛血清、２mM左旋谷氨酸、２５０U/ml青霉素和２５０ug/ml鏈霉素的RPMI１６４０培養(yǎng)基（Gibco產(chǎn)品）制成懸浮液（２x１０^５到２x１０^６）。整個(gè)實(shí)驗(yàn)使用的都是從ATCC獲得的人類巨細(xì)胞病毒（HCMV）的AD１

６９實(shí)驗(yàn)室株。這一病毒在人類胚胎肺細(xì)胞（MRC－５細(xì)胞）中進(jìn)行擴(kuò)增，采集為細(xì)胞相關(guān)的。人類巨細(xì)胞病毒（HCMV）的計(jì)數(shù)通過MRC－５細(xì)胞的噬菌斑分析而獲得。為了增加感染率，我們將５x１０^５U-９３７細(xì)胞用聚凝胺（２ug/ml）置于５mlRPMI培養(yǎng)基中預(yù)處理２０分鐘。然后將細(xì)胞進(jìn)行離心分離，并重新懸浮于0.5ml無細(xì)胞的AD１６９病毒株中以1.0的多重感染指數(shù)（MOI）維持三小時(shí)。然后將細(xì)胞進(jìn)行再次離心，以除去未結(jié)合的病毒，用新鮮培養(yǎng)基沖洗三遍后再次進(jìn)行離心，然后再次懸浮于新鮮培養(yǎng)基中。在２４小時(shí)的間隔期內(nèi)，細(xì)胞受到病毒攻擊，并在新鮮培養(yǎng)基中再次懸浮。在其中的一些實(shí)驗(yàn)中，培養(yǎng)基中含有不同濃度的甘草甜素，環(huán)孢霉素A,和腫瘤壞死因子α，下面將進(jìn)一步解釋。這樣，在多種培養(yǎng)基中，多次進(jìn)行離心和用新鮮培養(yǎng)基懸浮，使細(xì)胞得到清洗。0.1MOI的AD１６９株還被接種于１－打蘭培養(yǎng)瓶中，后者帶有１２毫米直徑的鋪有一層MRC－５細(xì)胞的蓋玻片。將培養(yǎng)瓶在室溫下以７００g進(jìn)行離心，然后培育三小時(shí)，以磷酸鹽緩沖液（PBS）清洗三次以除去為結(jié)合的病毒，然后在３７℃下培育４８小時(shí)。培育后，將培養(yǎng)瓶用MicroTrak巨細(xì)胞病毒培育鑒定試劑染色（CA,Palo Alto,Syva公司生產(chǎn)）。感染的MRC－５細(xì)胞的比例通過間接免疫熒光分析方法（IFA）檢測〔８〕。在含有甘草甜素，環(huán)孢霉素A,和腫瘤壞死因子α的培養(yǎng)與作為對照的（不含藥物的AD１６９接種的U-９３７細(xì)胞）培養(yǎng)中，免疫熒光染色人類巨細(xì)胞病毒（HCMV）超早期抗原（IEA）和早期抗原（EA）陽性細(xì)胞的比例被進(jìn)行了比較。

表面抗原的流式細(xì)胞儀分析：

細(xì)胞表面抗原的分析是通過流式細(xì)胞儀進(jìn)行分析的，使用了下列結(jié)合有熒光素的單克隆抗體（mAbs）：CD３,CD４,CD８,CD45R,Leu-15（Mac-1）,Leu-Mi,HLA-DR,和免疫球蛋白G的Fc段（CA,Mountain View ,Becton Dickinson公司生產(chǎn)）。對每個(gè)樣品都用相應(yīng)的同位素特異的對照抗體進(jìn)行分析。我們使用了對數(shù)－線性轉(zhuǎn)換表對每個(gè)熒光色譜圖與其對應(yīng)的合適的熒光素標(biāo)記的同位素對照（IgG1-FITC;Becton Dickinson公司生產(chǎn)）進(jìn)行了比較。在染色過程中，使用了人類巨細(xì)胞病毒（HCMV）超早期抗原和晚期抗原的單克隆抗體（CA,Temecula,化工公司生產(chǎn)）。

藥物：

甘草甜素由東京Minophagen 制藥公司提供。用0.01M磷酸鹽緩沖液溶解后，用１N的氫氧化鈉，調(diào)節(jié)PH為７．２。本實(shí)驗(yàn)使用的環(huán)孢霉素A是東京Sandoz公司贈(zèng)送的。腫瘤壞死因子－α是從Sigma化工公司購買的。藥物對MRC－５細(xì)胞和U-９３７細(xì)胞的細(xì)胞毒性是通過對宿主細(xì)胞DNA的抑制，見前面所述〔９〕。宿主細(xì)胞DNA合成的CD５０是定義為：減少５０％的對照細(xì)胞培養(yǎng)中結(jié)合的〔３H〕胸腺嘧啶核苷所需的藥物濃度。

通過聚和酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測人類巨細(xì)胞病毒（HCMV）DNA

如前所述進(jìn)行聚和酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）〔１０〕。用SS－苯基－氯仿提取蛋白質(zhì)后的，再用乙醇沉淀DNA。在聚和酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）中，我們使用了合成的單核苷引物來擴(kuò)增人類巨細(xì)胞

圖１.   甘草甜素對人類巨細(xì)胞病毒（HCMV）的抑制作用。在AD１６９病毒株感染的MRC－５細(xì)胞的培養(yǎng)基中加入了不同濃度的甘草甜素。將細(xì)胞培育４８小時(shí)后，免疫熒光顯示人類巨細(xì)胞病毒（HCMV）的超早期抗原和早期抗原陽性的細(xì)胞數(shù)與對照細(xì)胞（培養(yǎng)基中不含甘草甜素）數(shù)進(jìn)行比較。以免疫熒光顯示含有甘草甜素的細(xì)胞數(shù)除以免疫熒光顯示不含有甘草甜素的細(xì)胞數(shù)，所得結(jié)果即為細(xì)胞百分?jǐn)?shù)。方塊，圓圈和三角符號代表三組不同的實(shí)驗(yàn)。

病毒（HCMV）中編碼主要超早期（IE）抗原（US３）的DNA序列。設(shè)計(jì)了下面的單核苷作為PCR的引物：PIE－１（５'CAAGAGAAAGATGGACCCTGAT３'，核苷９８０－１００１）。其序列和位點(diǎn)在AD１６９HindIII片斷E上。用作探針的合成單核苷是用Milligan７５００DNA合成儀制備的，并用高壓液體組織化學(xué)攝影法純化。CDNA，引物和試劑均在１００℃下加熱６分鐘，然后加入2.5U Taq多聚酶（Perkin-Elmer Cetus公司生產(chǎn)），zui終的體積為１００ul。操作循環(huán)記錄如下：１－３０個(gè)循環(huán)是使用一個(gè)DNA熱循環(huán)器（Perkin-Elmer Cetus公司生產(chǎn)）進(jìn)行，在９４℃下進(jìn)行５分鐘（變性），５５℃下進(jìn)行２分鐘（退火），再在７２℃下進(jìn)行２分鐘（延伸）。然后取10－２０ul PCR試劑混合物在３％NuSieve試劑和１％Seakem agarose試劑（FMC公司生產(chǎn)）中進(jìn)行分析。凝膠用溴化二氨乙苯啡啶染色，并在印入Nytrand 膜（NH,Schleicher & Schuell公司生產(chǎn)）中前進(jìn)行檢查。該膜依次用３２P和５'末端標(biāo)記的單核苷標(biāo)記。引物標(biāo)記的活性特定為１０^８－１０^９cpm/ug。在５０℃下雜交一小時(shí)。將膜用溫水清洗１５分鐘，并用５５℃的水沖洗１５分鐘，然后進(jìn)行自放射分析。該人類巨細(xì)胞病毒（HCMV）DNA引物的特異性和敏感性已在我實(shí)驗(yàn)室確立。

結(jié)果

用IFA和PCR方法分析的甘草甜素，環(huán)孢霉素A和腫瘤壞死因子α對U-９３７細(xì)胞和MRC－５細(xì)胞中感染的人類巨細(xì)胞病毒（HCMV）的作用

用間接免疫熒光分析（IFA）方法分析可得，甘草甜素在1.0mg/ml的濃度時(shí)對AD１６９感染MRC－５細(xì)胞有抑制作用，在10.0mg/ml的濃度時(shí)則對AD１６９感染MRC－５細(xì)胞有*抑制作用（參見圖１）。MRC－５細(xì)胞中甘草甜素的CD５０是15.0mg/ml。圖２A顯示了有或無AD１６９病毒株感染的MRC－５細(xì)胞中人類巨細(xì)胞病毒（HCMV）IE DNA的擴(kuò)增過程。培養(yǎng)４８小時(shí)后，從加有0.5到12.0mg/ml的各濃度甘草甜素的培養(yǎng)中，用PCR法均可在人類巨細(xì)胞病毒（HCMV）接種的MRC－５細(xì)胞中檢測到病毒IE DNA。圖２B顯示了人類巨細(xì)胞病毒（HCMV）的U-９３７細(xì)胞中病毒IE DNA的檢測結(jié)果。U-９３７細(xì)胞中甘草甜素的CD５０是3.0mg/ml。培養(yǎng)３小時(shí)后，從加有0.5到2.5mg/ml的各濃度甘草甜素的培養(yǎng)中，用PCR法均可在人類巨細(xì)胞病毒（HCMV）接種的U-９３７細(xì)胞中檢測到病毒IE DNA。MRC－５細(xì)胞中環(huán)孢霉素的CD５０是５０ug/ml。１０到１０００U/ml的腫瘤壞死因子－α對有或無人類巨細(xì)胞病毒（HCMV）感染的MRC－５細(xì)胞的生存能力均無作用（數(shù)據(jù)未顯示）。間接免疫熒光分析法和PCR法都沒有證實(shí)環(huán)孢霉素或腫瘤壞死因子－α對巨細(xì)胞病毒（HCMV）感染的MRC－５細(xì)胞有作用。

對表面標(biāo)記的的流式細(xì)胞儀研究：

本研究中，U-９３７細(xì)胞被分為兩個(gè)主要的亞群（G１亞群和G２亞群），如前所述。培養(yǎng)三天后，按有或無甘草甜素分別分析U-９３７細(xì)胞表面的抗原表達(dá)。G１亞群中的細(xì)胞主要表達(dá)Leu-M１和HLA-DR,而另一亞群（G２亞群）的細(xì)胞主要表達(dá)CD４，CD45R，Leu-１５，Leu-M１和HLA-DR。加入的甘草甜素濃度較低時(shí)（0.5mg/ml）時(shí)，CD４陽性的細(xì)胞數(shù)是降低的，而甘草甜素濃度較高時(shí)（1.5mg/ml）時(shí)，CD４陽性的細(xì)胞數(shù)是輕度升高的（結(jié)果未顯示）。AD１６９病毒株接種的U－９３７細(xì)胞中的人類巨細(xì)胞病毒（HCMV）超早期抗原和晚期抗原

圖２. （A） AD１６９病毒株感染的MRC－５細(xì)胞中的人類巨細(xì)胞病毒（HCMV）超早期DNA的擴(kuò)增結(jié)果，其中培養(yǎng)基中含有不同濃度的甘草甜素。第I道和第II道顯示的是未感染的MRC－５細(xì)胞和甘草甜素濃度為12.0mg/ml時(shí)的未感染MRC－５細(xì)胞的結(jié)果。第２，３，４，５，６，７，８，９道和第１０道分別顯示的是甘草甜素濃度分別為０，0.5，1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0，和12.0mg/ml時(shí)，巨細(xì)胞病毒（HCMV）接種的MRC－５細(xì)胞的擴(kuò)增帶。第１２道和第１３道分別顯示的是陽性對照AD１６９病毒株DNA和分子量標(biāo)記物的結(jié)果。（B）經(jīng)過三天含甘草甜素0.5到2.5 mg/ml的培養(yǎng)基培養(yǎng)后 ，AD１６９病毒株感染的U-９３７細(xì)胞中的人類巨細(xì)胞病毒（HCMV）超早期DNA的擴(kuò)增結(jié)果。第３，４，５，６，７，８，９道和第１０道分別顯示的是甘草甜素濃度分別為０，0.5，1.0，1.5，2.0，和2.5mg/ml時(shí)，巨細(xì)胞病毒（HCMV）接種的U-９３７細(xì)胞的擴(kuò)增帶。第２道和第９道分別顯示的是未感染的U-９３７細(xì)胞和甘草甜素濃度為2.5mg/ml時(shí)的未感染U-９３７細(xì)胞的結(jié)果。第１０道，第I道和第II道分別顯示的是陽性對照（AD１６９病毒株DNA）和分子量標(biāo)記物的結(jié)果。

通過標(biāo)記單克隆抗體，以流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測，如表１所示。在兩個(gè)組中，人類巨細(xì)胞病毒（HCMV）超早期抗原和晚期抗原都是通過標(biāo)記單克隆抗體以流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測的，甘草甜素濃度均僅為0.5mg/ml。在含有甘草甜素的培養(yǎng)基中與AD１６９病毒株一起培育三天后，G１亞群的細(xì)胞數(shù)降低了，而G２亞群的細(xì)胞數(shù)則升高了。培養(yǎng)基中甘草甜素濃度高于1.0mg/ml時(shí)，用流式細(xì)胞儀技術(shù)對人類巨細(xì)胞病毒（HCMV）接種的U-９３７細(xì)胞中超早期抗原和晚期抗原均檢測不到。對U-９３７細(xì)胞環(huán)孢霉素A的CD５０是10.0ug/ml。１０到１０００U/ml的腫瘤壞死因子－α對有或無人類巨細(xì)胞病毒（HCMV）感染的MRC－５細(xì)胞的生存能力均無作用（數(shù)據(jù)未顯示）。用環(huán)孢霉素A或腫瘤壞死因子處理后，U-９３７細(xì)胞表面抗原的表達(dá)與zui初未處理的U-９３７細(xì)胞沒有差別。有或無AD１６９病毒株感染的U-９３７細(xì)胞表面抗原的表達(dá)也很類似，只是CD４＋的細(xì)胞數(shù)不同。AD１６９病毒株感染的U-９３７細(xì)胞中，CD４＋的細(xì)胞數(shù)稍微少一些。表２顯示的是環(huán)孢霉素A或腫瘤壞死因子對人類巨細(xì)胞病毒（HCMV）AD１６９病毒株感染的U-９３７細(xì)胞（尤其是CD４＋和CD８＋細(xì)胞）的作用。環(huán)孢霉素A或腫瘤壞死因子對U-９３７細(xì)胞中的人類巨細(xì)胞病毒（HCMV）沒有抑制作用。培養(yǎng)基中含環(huán)孢霉素A或腫瘤壞死因子時(shí)，在CD４＋和CD８＋的U-９３７細(xì)胞中可以檢測到人類巨細(xì)胞病毒（HCMV）的超早期抗原。

討論

雖然已經(jīng)知道人類巨細(xì)胞病毒（HCMV）可以感染人類淋巴細(xì)胞中的T細(xì)胞和B細(xì)胞，自然殺傷細(xì)胞，和巨噬細(xì)胞，人類巨細(xì)胞病毒（HCMV）潛伏感染和持續(xù)感染的實(shí)際部位和再激活的機(jī)制仍有爭議〔２，１１－１３〕。在一項(xiàng)原位雜交的研究中，結(jié)果顯示在血清學(xué)陽性的健康個(gè)體的單核細(xì)胞和單個(gè)核細(xì)胞中檢測到了病毒的核酸〔５〕。單核－巨噬細(xì)胞系被認(rèn)為是人類巨細(xì)胞病毒（HCMV）潛伏感染的部位〔３〕。也有報(bào)道指出，單核細(xì)胞zui終分化為組織巨噬細(xì)胞對人類巨細(xì)胞病毒（HCMV）感染的進(jìn)入是必要的〔３，１４〕。U-９３７細(xì)胞中巨細(xì)胞病毒基因組的表達(dá)是多變的，這可能可以用細(xì)胞個(gè)體的差異來解釋〔１５〕。一些體外實(shí)驗(yàn)表明，人類巨細(xì)胞病毒（HCMV）在一些外周血單個(gè)核細(xì)胞中的復(fù)制只限于超早期蛋白的

表１.在有或無甘草甜素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)７２小時(shí)后，用流式細(xì)胞儀檢測到的U-９３７細(xì)胞中人類巨細(xì)胞病毒（HCMV）抗原的表達(dá)。

表２.          培養(yǎng)三天后，用流式細(xì)胞儀檢測到的CD４＋或CD８＋的U-９３７細(xì)胞中人類巨細(xì)胞病毒（HCMV）超早期抗原（CD４＋或CD８＋細(xì)胞中超早期抗原陽性的百分?jǐn)?shù)）。

表達(dá)〔５〕.通常，人類巨細(xì)胞病毒（HCMV）感染的巨噬細(xì)胞的上清液中不含病毒的后代。

用PCR法擴(kuò)增DNA已經(jīng)成功地運(yùn)用于臨床診斷中，以檢測不同標(biāo)本中的人類巨細(xì)胞病毒（HCMV）。然而，從本研究中可以看出，該系統(tǒng)應(yīng)該更準(zhǔn)確地定義為定量PCR，而不是定性PCR。在LA（HBLF４或US１４）基因組附近的大量片斷對于細(xì)胞培養(yǎng)中病毒的復(fù)制是非必須的〔１６〕。Demmler等人〔１７〕評價(jià)了設(shè)置兩個(gè)引物，用于擴(kuò)增人類巨細(xì)胞病毒（HCMV）的超早期抗原和晚期抗原基因的DNA。超早期產(chǎn)物是用來轉(zhuǎn)換病毒基因組的，使其脫離受感染細(xì)胞中限制性表達(dá)的狀態(tài)。人類巨細(xì)胞病毒（HCMV）可以與人類陰莖包皮中的成纖維細(xì)胞表面的一個(gè)受體特異地結(jié)合，結(jié)合能力中等〔１８〕。雖然U-９３７細(xì)胞表面具有Fc和C３的受體，并且缺少表面及細(xì)胞內(nèi)免疫球蛋白〔１９，２０〕，本研究并不能解釋巨細(xì)胞病毒進(jìn)入單核細(xì)胞是通過IgG的Fc段受體介導(dǎo)的。使用流式細(xì)胞儀技術(shù)，可以在CD４＋和CD８＋的U-９３７細(xì)胞中檢測到巨細(xì)胞病毒的超早期抗原，正如前面一項(xiàng)對外周血淋巴細(xì)胞的研究中所述〔２〕。

目前已經(jīng)有一些抗病毒因子，僅表現(xiàn)出抗病毒特異的代謝過程的活性，而沒有細(xì)胞毒性。不幸的是，目前還沒有發(fā)展針對巨細(xì)胞病毒感染的成功治療。甘草甜素是一種抗炎物質(zhì)，同時(shí)具有抗病毒活性〔２１，２２〕。而且，在日本已經(jīng)聲稱甘草甜素對慢性活動(dòng)性肝炎具有一定的治療和預(yù)防作用。還有報(bào)道甘草甜素對單純皰疹病毒和水痘－帶狀皰疹病毒顆粒有滅活作用。甘草甜素還能抑制U-９３７細(xì)胞和MRC－５細(xì)胞中人類巨細(xì)胞病毒的復(fù)制。由于甘草甜素在感染９６小時(shí)后加入仍有效，可能能抑制病毒從感染細(xì)胞中向未感染細(xì)胞中擴(kuò)散（結(jié)果未顯示）。甘草甜素還可對HIV－１的復(fù)制有劑量依賴性的抑制作用〔２１，２２〕。雖然蛋白激酶C（PKC）在HIV－１的復(fù)制過程中的確切作用尚且未得可知，但HIV－１病毒顆粒與細(xì)胞表面受體的結(jié)合似乎需要蛋白激酶C（PKC）的參與，因?yàn)?/span>CD４是由蛋白激酶C（PKC）進(jìn)行磷酸化的〔２３－２５〕。

Baba和Shigeta認(rèn)為，甘草甜素可以抑制水痘－帶狀皰疹病毒顆粒的穿透細(xì)胞，脫去衣殼，或釋放過程。甘草甜素可能也是通過以上的某一項(xiàng)機(jī)制抑制人類巨細(xì)胞病毒在MRC－５細(xì)胞中的復(fù)制。根據(jù)間接免疫熒光分析，流式細(xì)胞技術(shù)和PCR技術(shù)檢測結(jié)果的不同，通過用含有甘草甜素的培養(yǎng)基培養(yǎng)人類巨細(xì)胞病毒（HCMV）感染的U-９３７細(xì)胞和MRC－５細(xì)胞，病毒蛋白的合成和病毒在細(xì)胞間的擴(kuò)散可能會(huì)受到影響。接受環(huán)孢霉素和其他藥物免疫抑制治療的患者存在嚴(yán)重人類巨細(xì)胞病毒（HCMV）感染的危險(xiǎn)。環(huán)孢霉素還可能對HIV－１感染T淋巴細(xì)胞和在其內(nèi)復(fù)制有抑制作用，可能是通過干擾病毒與特異的細(xì)胞受體的結(jié)合而起作用的〔２７〕。除了對腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒作用外，腫瘤壞死因子還有其他的一些生物學(xué)活性，比如抗病毒作用〔２８〕。關(guān)于用甘草甜素對細(xì)胞進(jìn)行預(yù)處理的研究正在進(jìn)行中。