人主要堿性蛋白（MBP）酶聯(lián)免疫分析試劑盒
使用說明書
                                                                                 
本試劑盒僅供體外研究使用!
預期應用
ELISA法定量測定人血清、血漿或其它相關(guān)生物液體中MBP含量。

實驗原理
用純化的抗體包被微孔板，制成固相載體，往包被抗 MBP抗體的微孔中依次加入標本或標準品、生物素化的抗 MBP抗體、HRP標記的親和素，經(jīng)過*洗滌后用底物 TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的 MBP呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。

試劑盒組成及試劑配制
1. 酶聯(lián)板：一塊（96孔）
2. 標準品（凍干品）： 2瓶，每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml，蓋好后靜置10分鐘以上，然后反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為10 ng/ml，做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋）后，分別稀釋成10 ng/ml，5 ng/ml，2.5 ng/ml，1.25 ng/ml，0.625 ng/ml，0.312 ng/ml，0.156 ng/ml，樣品稀釋液直接作為標準濃度0 ng/ml，臨用前15分鐘內(nèi)配制。如配制5 ng/ml標準品：取0.5ml （不要少于0.5ml ） 10 ng/ml的上述標準品加入含有0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3. 樣品稀釋液：1×20ml。
4. 檢測稀釋液A：1×10ml。
5. 檢測稀釋液B：1×10ml。
6. 檢測溶液A：1×120μl（1:100）臨用前以檢測稀釋液A 1:100稀釋，稀釋前根據(jù)預先計算好的每次實驗所需的總量配制（100μl/孔），實際配制時應多配制 0.1-0.2ml。如10μl檢測溶液A加990μl檢測稀釋液A的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內(nèi)配制。
7. 檢測溶液B：1×120μl/瓶（1:100）臨用前以檢測稀釋液B 1:100稀釋。稀釋方法同檢測溶液A。
8. 底物溶液：1×10ml/瓶。
9. 濃洗滌液：1×30ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10. 終止液：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。
11. 覆膜：5張
12. 使用說明書：1份

自備物品
1.   酶標儀（建議參考儀器使用說明提前預熱）
2.   微量加液器及吸頭，EP管
3.   蒸餾水或去離子水，全新濾紙

標本的采集及保存
1. 血清：全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
2. 血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘，或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
3. 其它生物標本：請1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
4. 樣本處理：血清或血漿標本*稀釋10倍，如：稀釋10倍，取100uL血清或血漿加入900uL樣品稀釋液。標本使用0.1 M 的PBS稀釋（PH=7.0-7.2）。
注：以上標本置4℃保存應小于1周，-20℃或-80℃均應密封保存，-20℃不應超過1個月，-80℃不應超過2個月；標本溶血會影響zui后檢測結(jié)果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。

操作步驟
實驗開始前，各試劑均應平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試  劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。實驗前應預測樣品含量，如樣品濃度過高時，應對樣品進行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍，計算時再乘以相應的稀釋倍數(shù)。
1. 加樣：分別設(shè)空白孔、標準孔、待測樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?100μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應120分鐘。為保證實驗結(jié)果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。
2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加  檢測溶液A工作液 100μl（在使用前一小時內(nèi)配制），酶標板加上覆膜, 37℃反應60分鐘。
3. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板 3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。
4. 每孔加檢測溶液B工作液（同檢測A工作液） 100μl，酶標板加上覆膜37℃反應60分鐘。
5. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。
6. 依序每孔加底物溶液90μl，酶標板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。
7. 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應，此時藍色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結(jié)果的準確性，底物反應時間到后應盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。 在加終止液后立即進行檢測。

注：
1.  試劑準備：所有試劑都必須在使用前達到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存試劑。  實驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
2.   加樣：加樣或加試劑時，請注意在吸取標本 / 標準品，酶結(jié)合物或底物時，*個孔與zui后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導致不同的 “預孵育”時間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。一次加樣時間（包括標準品及所有樣品）控制在 10分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，*使用多道移液器加樣。
3.   孵育：為防止樣品蒸發(fā)，試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應盡快進行下步操作，任何時侯都應避免酶標板處于干燥狀態(tài);同時應嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。
4.   洗滌：洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響zui后的酶 標儀讀數(shù)。
5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配置使用，并使用相應的稀釋液配制，不能混淆。請精確配置標準品及工作液，盡量不要微量配置（如吸取檢測溶液A時，一次不要小于10μl），以避免由于不準確稀釋而造成的濃度誤差；請勿重復使用已稀釋過的標準品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
6.  反應時間的控制：加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化（比如，每隔10分鐘），如顏色較深，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應，避免反應過強從而影響酶標儀光密度讀數(shù)。
7.  底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強光直接照射。
    建議檢測樣品時均設(shè)雙孔測定，以保證檢測結(jié)果的準確性。
    如標本中待測物質(zhì)含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請zui后乘以稀釋倍數(shù)。

洗板方法
1.  手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標板內(nèi)的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將*的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘，根據(jù)需要，重復此過程數(shù)次。
2.  自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。

特異性
    本試劑盒可同時檢測重組或天然的人MBP，且與其它相關(guān)蛋白無交叉反應。

計算
  以標準物的濃度為縱坐標（對數(shù)坐標），OD值為橫坐標（對數(shù)坐標），在對數(shù)坐標紙上繪出標準曲線。*使用專業(yè)制作曲線軟件進行分析，如curve expert 1.3，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度，再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。

檢測范圍：0.156 ng/ml - 10 ng/ml

zui低檢測限：0.039 ng/ml

說明
1. 在儲存及孵育過程中避免將試劑暴露在強光中。所有試劑瓶蓋須蓋緊以防止蒸發(fā)和污染，試劑避免受到微生物的污染，因為蛋白水解酶的干擾將導致出現(xiàn)錯誤的結(jié)果。
2. 小心吸取試劑并嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。請注意在吸取標本 / 標準品，酶結(jié)合物或底物時，*個孔與zui后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導致不同的 “預孵育”時間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。而且，洗滌不充分將影響試驗結(jié)果。
3. 試劑盒保存：部分試劑保存于-20℃，部分試劑保存于2-8℃，具體以標簽上的標示為準。
4. 濃洗滌液會有鹽析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶。
5. 剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會含有少許水樣物質(zhì)，此為正?，F(xiàn)象，不會對實驗結(jié)果造成任何影響。
6. 中、英文說明書可能會有不*之處，請以英文說明書為準。
7. 所有的樣品都應管理好，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。
8. 有效期：6個月

相關(guān)產(chǎn)品：

LAIR1 重組人白細胞相關(guān)免疫球蛋白樣受體1 PRO-431 Recombinant Human Leukocyte-Associated Ig-Like Receptor 1
LALF  PRO-361 Recombinant Limulus Antilipopolysaccharide Factor
Lamin-A  PRO-690 Recombinant Lamin-A
LTF Holo 重組人乳鐵蛋白 PRO-592 Recombinant Human Lactoferrin Holo
LTF Apo 重組人乳鐵蛋白 PRO-593 Recombinant Human Lactoferrin Apo
LBP  PRO-538 Recombinant Human Lipopolysaccarid Binding Protein
mLBP  PRO-539 Recombinant Mouse Lipopolysaccarid Binding Protein
LDL 低密度脂蛋白 PRO-562 Low Density Lipoprotein
LLC  PRO-561 Human Lambda Light Chain
LLO  PRO-320 Recombinant Listeriolysin-O
LLO-pest  PRO-373 Recombinant Listeriolysin-O PEST-free
L-Selectin 重組人L-選擇素 PRO-381 Recombinant Human L-Selectin
MAGE1  PRO-311 Recombinant Human MAGE-1
Mammaglobin 重組人乳球蛋白 PRO-515 Recombinant Human Mammaglobin
MBP  PRO-616 Recombinant Human Matlose Binding Protein
Melanoma  PRO-509 Recombinant Human Melanoma （gp100）
MICA  PRO-367 Recombinant Human MHC class I chain-related gene A
MICB  PRO-368 Recombinant Human MHC class I chain-related gene B
MITF  PRO-516 Recombinant Human Microphtalmia
MLH1  PRO-526 Recombinant Human MutL Homolog-1
MOG 髓鞘少突膠質(zhì)細胞糖蛋白 PRO-371 Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein
MOG 重組人髓鞘少突膠質(zhì)細胞糖蛋白 PRO-466 Recombinant Human Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein
Myoglobin 重組人肌紅蛋白 PRO-336 Recombinant Human Myoglobin
Myoglobin 人類肌紅蛋白 PRO-565 Human Myoglobin
Myoglobin heme free 重組人肌紅蛋白 無血紅素 PRO-374 Recombinant Human Myoglobin Heme free
NKp46   PRO-432 Recombinant Human Natural Cytotoxicity Receptor NKp46
NEFM  PRO-523 Bovine Neurofilament Medium Polypeptide  
NME1  PRO-715 Recombinant Human Non-Metastatic Cells 1
NMM  PRO-366 Recombinant Human Non-Muscle Myosin-II Regulatory Light Chain
mNUCB2  PRO-605 Recombinant Mouse Nucleobindin-2
NusA  PRO-623 Recombinant E.Coli Transcription Termination/Antitermination L Factor
NY-ESO-1  PRO-531 Recombinant Human New York Esophageal Squamous Cell Carcinoma
OmpA  PRO-571 Recombinant Bacterial Outer Membrane Protein-A
Osteocrin  PRO-420 Recombinant Human Osteocrin
OTUB1  PRO-711 Recombinant Human Ubiquitin Aldehyde Binding 1
p21-WAF1  PRO-300 Recombinant Human P21-WAF1
P504s  PRO-310 Recombinant Human P504/alpha Methylacyl CoA Racemase
p53  PRO-302 Recombinant Human p53
p53 Mutant  PRO-301 Recombinant Human p53 Mutant
p63  PRO-533 Recombinant Human p63
REG3A 重組人胰腺炎相關(guān)蛋白1 PRO-421 Recombinant Human Pancreatitis-Associated Protein-1
Rat Parvalbumin 重組大鼠小白蛋白 PRO-398 Recombinant Rat Parvalbumin
PCNA, Sf9 重組人增殖細胞核抗原 PRO-303 Recombinant Human Proliferating Cell Antigen, Sf9