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超抗原和佐劑2012/02/09: 超抗原SAg:指只需低濃度即可激活多克隆T細(xì)胞的抗原物質(zhì)。1.與T細(xì)胞結(jié)合的特征:超抗原主要與CD4+T細(xì)胞結(jié)合;既能與TCRVβ鏈結(jié)合,也能與APC細(xì)胞上MHC-II類分子非多態(tài)區(qū)外側(cè)結(jié)合,因此無(wú)MHC限制性。一種超抗原可活化多數(shù)T細(xì)胞。2.種類:內(nèi)源性超抗原(病毒性):小鼠乳腺腫瘤病毒,是一種逆轉(zhuǎn)錄病毒,以前病毒形式整合于細(xì)胞中,這種小鼠可終生病毒蛋白-即小鼠病毒性超抗原。人類免疫缺陷病毒-人類的病毒性超抗原。外源性超抗原(細(xì)菌外毒素):金黃色葡萄球菌腸毒素；鏈球菌產(chǎn)生的致熱性外毒素。3.生

電化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定原理2012/02/04: 一、概念電化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定(Electrochemiluminescenceimmunoassay,ECLI)。ECLI是繼放射免疫、酶免疫、熒光免疫、化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定以后的新一代標(biāo)記免疫測(cè)定技術(shù)。電化學(xué)發(fā)光法源于電化學(xué)法和化學(xué)發(fā)光法，而ECLI是電化學(xué)發(fā)光(ECL)和免疫測(cè)定相結(jié)合的產(chǎn)物，是一種在電極表面由電化學(xué)引發(fā)的特異性化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，包括了電化學(xué)和化學(xué)發(fā)光二個(gè)過(guò)程。ECL不僅可以應(yīng)用于所有的免疫測(cè)定，而且還可用于DNA／RNA探針檢測(cè)。二、反應(yīng)底物ECL反應(yīng)底物有兩種：·三氯聯(lián)吡啶釕[Ru

抗原抗體反應(yīng)的影響因素2012/01/12: 抗原與抗體發(fā)生特異性結(jié)合后，雖由親水膠體變?yōu)槭杷z體，若溶液中無(wú)電解質(zhì)參加，仍不出現(xiàn)可見(jiàn)反應(yīng)。為了促使沉淀物或凝集物的形成，常用0.85%氯化鈉或各種緩沖液作為抗原及抗體的稀釋液。由于氯化鈉在水溶液中解離成Na+和C1-，可分別中和膠體粒子上的電荷，使膠體粒子的電勢(shì)下降。當(dāng)電勢(shì)降至臨界電勢(shì)（12～15mV）以下時(shí)，則能促使抗原抗體復(fù)合物從溶液中析出，形成可見(jiàn)的沉淀物或凝集物。影響抗原抗體反應(yīng)的因素主要有以下兩點(diǎn)，另外，適當(dāng)振蕩也可促進(jìn)抗原抗體分子的接觸，加速反應(yīng)。（一）溫度在一定范圍內(nèi)，溫度升高

ALT谷丙轉(zhuǎn)氨酶標(biāo)準(zhǔn)范圍2012/01/10: 谷丙轉(zhuǎn)氨酶標(biāo)準(zhǔn)范圍（ALT）正常參考值：5-35U／L血生化檢查：肝功能：谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）正常時(shí)，谷丙轉(zhuǎn)氨酶主要存在于組織細(xì)胞內(nèi)，以肝細(xì)胞含量zui多，心肌細(xì)胞中含量其次，只有極少量釋放入血中。所以血清中此酶活力很低。當(dāng)肝臟、心肌病變、細(xì)胞壞死或通透性增加時(shí)，細(xì)胞內(nèi)各種酶釋放出來(lái)，使血清中此酶活性升高。所以測(cè)定血清中此酶的含量可作為診斷、鑒別診斷及預(yù)后觀察的依據(jù)。谷丙轉(zhuǎn)氨酶的增高意義較大，其增高程度可反映肝細(xì)胞損害和壞死的程度。肝膽疾病：急性病毒性肝炎，ALT是zui為敏感的指標(biāo)之一，會(huì)出現(xiàn)

各種顯色劑及其配制方法2012/01/09: 碘：不飽和或者芳香族化合物配制方法在100ml廣口瓶中，放入一張濾紙，少許碘粒。或者在瓶中，加入10g碘粒，30g硅膠紫外燈含共厄基團(tuán)的化合物，芳香化合物硫酸鈰：生物堿配制方法10%硫酸鈰（IV）+15%硫酸的水溶液氯化鐵苯酚類化合物配制方法1%FeCl3+50%乙醇水溶液.桑色素（羥基黃酮）廣譜,有熒光活性配制方法0.1%桑色素+甲醇茚三酮氨基酸配制方法1.5g茚三酮+100mLof正丁醇+3.0mL醋酸香草醛（香蘭素）廣譜配制方法15g香草醛+250mL乙醇+2.5mL濃硫酸高錳酸鉀含還原性

細(xì)菌中分離純化質(zhì)粒DNA2012/01/06: 1.細(xì)胞壁的消化，將細(xì)菌溫育在裂解液中去除細(xì)胞壁中的肽聚糖。通常在等滲的情況下進(jìn)行此步，以防止細(xì)胞漲破釋放出染色體DNA分子。注意，革蘭氏陽(yáng)性菌對(duì)裂解酶相對(duì)不敏感，需要額外的處理以使酶到達(dá)細(xì)胞壁層，例如，可采用滲透壓休克或保溫在螯合劑中，如EDTA。EDTA也能使一些細(xì)菌的脫氧核糖核酸酶失活，以防止在提取過(guò)程中，質(zhì)粒DNA降解。2.利用強(qiáng)堿（NaOH）和其他試劑，如十二烷基磺酸鈉溶解細(xì)胞膜并使蛋白質(zhì)部分變性。再中和此溶液使不溶性染色體DNA沉淀，質(zhì)粒DNA存于溶液中。3.移去其他的大分子物質(zhì)，特

細(xì)胞培養(yǎng)基本條件2012/01/05: 1合適的細(xì)胞培養(yǎng)基合適的細(xì)胞培養(yǎng)基是體外細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的zui重要的條件之一,培養(yǎng)基不僅提供細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)和促使細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的基礎(chǔ)物質(zhì),而且還提供培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)和繁殖的生存環(huán)境。2血清目前,大多數(shù)合成培養(yǎng)基都需要添加血清.血清是細(xì)胞培養(yǎng)液中zui重要的成分之一,含有細(xì)胞生長(zhǎng)所需的多種生長(zhǎng)因子及其它營(yíng)養(yǎng)成分。3無(wú)菌無(wú)毒細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境無(wú)菌無(wú)毒的操作環(huán)境和培養(yǎng)環(huán)境是保證細(xì)胞在體外培養(yǎng)成功的首要條件.在體外培養(yǎng)的細(xì)胞由于缺乏對(duì)微生物和有毒物的防御能力,一旦被微生物或有毒物質(zhì)污染,或者自身代謝物質(zhì)積累,可導(dǎo)致細(xì)胞中毒

溶解多肽的方法及多肽應(yīng)用的注意點(diǎn)2012/01/05: 多肽的溶解度取決元計(jì)算的物理特性。氨基酸可分類為酸性，堿性，極性，非極性，疏水性。多肽有高含量的非極性疏水性氨基酸或極性不帶電荷的氨基酸。建議溶解在有機(jī)溶液中（例如：DMF，甲醇，丙醇，異丙醇，DMSO）?？傊?，酸性多肽一般溶解于堿性溶液中，而堿性多肽溶解在酸性溶液中。氨基酸的屬性堿性：Arg,His（H）,Lys（K）非極性疏水性：Ala（A）,Ile（I），Len（L）,Met（M）,Phe（F）,Pro（P）,Trp（W）,Val（V）極性不帶電荷：Asn（N）,Cys（C）,Glg（G）

軟骨素的作用說(shuō)明2011/12/30: 軟骨素的作用說(shuō)明軟骨素（chondroitin）分子量一般為2-5萬(wàn)，白色粉末，具有較強(qiáng)吸水性、易溶于水并成為粘稠溶液，不溶于乙醇、乙醚、丙酮等有機(jī)溶劑。其化學(xué)組成是D－葡萄糖醛酸和乙酰氨基已糖（葡萄糖和半乳糖）通過(guò)1,3-b--苷鍵相連結(jié)的高聚物。用途：硫酸軟骨素，是一種酸性粘多糖，為臨床較常用的藥物，用于某些神經(jīng)性頭痛、神經(jīng)痛、關(guān)節(jié)痛、偏頭痛、動(dòng)脈硬化癥等；也可用于鏈霉素引起的聽(tīng)覺(jué)障礙及肝炎等的輔助治。軟骨素的主要作用如下：1、調(diào)整身體的功能――以膠原纖維和彈力纖維一起存在，具有調(diào)整身體各級(jí)

細(xì)胞因子的應(yīng)用？2011/12/27: 細(xì)胞因子的應(yīng)用？大多數(shù)細(xì)胞因子是免疫應(yīng)答的產(chǎn)物，在動(dòng)物和人體內(nèi)可發(fā)揮免疫學(xué)效應(yīng)，zui終通過(guò)上調(diào)免疫細(xì)胞對(duì)抗原物質(zhì)的免疫應(yīng)答，介導(dǎo)炎癥反應(yīng)而清除抗原物質(zhì)?？乖碳ず筒≡⑸锔腥揪烧T導(dǎo)體內(nèi)產(chǎn)生細(xì)胞因子，因此細(xì)胞因子與疾病的發(fā)生、發(fā)展有著密切的關(guān)系，它們可參與疾病的發(fā)生、發(fā)展。另一方面，體內(nèi)細(xì)胞因子生成過(guò)多，可引起一些病理性反應(yīng)。因此，細(xì)胞因子在疾病的診斷、治療、預(yù)防等細(xì)胞因子的應(yīng)用？

酶聯(lián)法檢測(cè)人類免疫缺陷病毒2011/12/27: 酶聯(lián)法檢測(cè)人類免疫缺陷病毒[測(cè)定方法]ELISA法[方法學(xué)原理]在微孔板上預(yù)包被高純度基因重組HIV（1型十Ⅱ型），與樣品中抗HIV抗體反應(yīng)，同時(shí)加入HRP標(biāo)記HIV（1型+Ⅱ型）抗原。然后用TMB底物作用顯色。通過(guò)酶標(biāo)儀檢測(cè)吸光度（OD值）從而判定樣品中HIV抗體的存在與否。[標(biāo)本準(zhǔn)備]靜脈抽血2ml，不抗凝[試劑]1．預(yù)包被微孔反應(yīng)板條2．酶標(biāo)試劑3．陰性對(duì)照4．陽(yáng)性對(duì)照5．洗滌液6．顯色劑A、B[儀器設(shè)備]酶標(biāo)儀或全自動(dòng)酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀。[測(cè)定步驟]1．將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)

細(xì)胞株的培養(yǎng)、凍存和復(fù)蘇2011/12/27: 細(xì)胞株的培養(yǎng)、凍存和復(fù)蘇1）細(xì)胞株的培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)：用于檢測(cè)細(xì)胞因子的細(xì)胞株通常培養(yǎng)于含10％小牛血清和抗生素的培養(yǎng)液中，培養(yǎng)細(xì)胞因子依賴細(xì)胞株還有加入適量細(xì)胞因子。在37℃5％CO2的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，3～4天傳代一次。懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞的傳代：直接直接吸去或離心后吸去培養(yǎng)上清液，用新鮮培養(yǎng)液懸浮細(xì)胞，1：3或1：5稀釋細(xì)胞后，分瓶繼續(xù)培養(yǎng)。帖壁生長(zhǎng)細(xì)胞的傳代：吸去培養(yǎng)液，用PBS洗滌細(xì)胞一次，加入消化液，在37℃中消化約3～10分鐘，待細(xì)胞開(kāi)始脫落時(shí)，倒去消化液，加入新鮮培養(yǎng)液，懸浮和

干擾素的作用機(jī)理以及干擾素的分類和產(chǎn)生的細(xì)胞??！2011/12/27: 干擾素的作用機(jī)理以及干擾素的分類和產(chǎn)生的細(xì)胞！！干擾素是人體受到病毒感染時(shí)產(chǎn)生的一種多功能蛋白質(zhì)（生物學(xué)上叫細(xì)胞因子）。我們都得過(guò)流行性感冒，當(dāng)你發(fā)熱、全身肌肉、關(guān)節(jié)酸痛、全身無(wú)力時(shí)，你就感受到了干擾素的存在。當(dāng)然也還有其它細(xì)胞因子的參與，但干擾素是病毒感染時(shí)產(chǎn)生的zui主要的細(xì)胞因子之一。如果您曾經(jīng)注射過(guò)干擾素，醫(yī)生會(huì)告訴你打干擾素后會(huì)出現(xiàn)“流感樣癥狀”，這是因?yàn)榱鞲袝r(shí)的癥狀其實(shí)也是干擾素引起的。干擾素是個(gè)多功能的蛋白質(zhì)，屬于人體天然免疫的重要組成部分?？偟膩?lái)說(shuō)，干擾素具有以下幾個(gè)重要作用：1

人組織因子（TF）Elisa試劑盒說(shuō)明書(shū)2011/12/17: 人組織因子（TF）Elisa試劑盒說(shuō)明書(shū)本試劑盒僅供研究使用檢測(cè)范圍：96T3ng/L-160ng/L使用目的：本試劑盒用于測(cè)定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中組織因子（TF）含量。實(shí)驗(yàn)原理：本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人組織因子（TF）水平。用純化的人組織因子（TF）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入組織因子（TF），再與HRP標(biāo)記的組織因子（TF）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下

細(xì)胞因子的檢測(cè)方法2011/12/16: 細(xì)胞因子的檢測(cè)方法一：細(xì)胞因子（cytokine）是由細(xì)胞分泌的具有生物活性的小分子蛋白物質(zhì)的統(tǒng)稱。在免疫應(yīng)答過(guò)程中，細(xì)胞因子在免疫調(diào)節(jié)、炎癥應(yīng)答、腫瘤轉(zhuǎn)移等生理和病理過(guò)程中起重要作用。細(xì)胞因子的檢測(cè)不僅是基礎(chǔ)免疫研究的有較手段，同時(shí)在臨床疾病診斷、病程觀察、療效判斷及細(xì)胞因子治療監(jiān)測(cè)方面具有重要價(jià)值。但是，由于細(xì)胞因子在體內(nèi)的含量甚微，給細(xì)胞因子的檢測(cè)帶來(lái)困維，細(xì)胞因子的檢4．細(xì)胞病變抑制法病毒可造成靶細(xì)胞的損傷，干擾素等則可抑制病毒所導(dǎo)致的細(xì)胞病變，因此可利用細(xì)胞病變抑制法檢測(cè)這類因子。二、

培養(yǎng)基的制備2011/12/13: 培養(yǎng)基的制備目的要求：1．掌握一般培養(yǎng)基制備的原則和要求。2．熟悉一般培養(yǎng)基制備的過(guò)程。操作步驟：一、培養(yǎng)基的制備原則和要求培養(yǎng)基是根據(jù)各類微生物生長(zhǎng)繁殖的需要，用人工方法把多種物質(zhì)混合而成的營(yíng)養(yǎng)物。一般用來(lái)分離、培養(yǎng)菌類。常用的培養(yǎng)基有基礎(chǔ)培養(yǎng)基、增菌培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基和厭氧培養(yǎng)基。在制備培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)掌握如下原則和要求：（一）培養(yǎng)基必須含有細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖所需要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。所用的化學(xué)藥品必須純凈，稱取的份量務(wù)必準(zhǔn)確。（二）培養(yǎng)基的酸堿度應(yīng)符合細(xì)菌生長(zhǎng)要求。按各種培養(yǎng)基要求準(zhǔn)確測(cè)定調(diào)節(jié)p

蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的推測(cè)與測(cè)定2011/12/10: 蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的推測(cè)與測(cè)定1、一級(jí)結(jié)構(gòu)測(cè)定蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)的測(cè)定又稱蛋白質(zhì)順序分析，其基本方法是：①應(yīng)用化學(xué)裂解法和蛋白酶水解法將多肽鏈專一性裂解。②逐一測(cè)定每個(gè)純化的小肽段的順序。③根據(jù)肽段氨基酸順序中的重疊區(qū)確定小肽段的排列次序。④完成整條多肽鏈的順序分析。盡管蛋白質(zhì)順序分析已經(jīng)自動(dòng)化，但仍然耗時(shí)、復(fù)雜并且昂貴。重組DNA技術(shù)出現(xiàn)后，人們可以從cDNA或基因序列直接推導(dǎo)出蛋白質(zhì)的氨基酸順序，速度快且經(jīng)濟(jì)，已成為zui常用的測(cè)定蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)的方法。2、蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)很大程度上決定了蛋

細(xì)胞培養(yǎng)方法2011/12/09: 細(xì)胞培養(yǎng)方法一、準(zhǔn)備工作準(zhǔn)備工作對(duì)開(kāi)展細(xì)胞培養(yǎng)異常重要，工作量也較大，應(yīng)給予足夠的重視，推備工作中某一環(huán)節(jié)的疏忽可導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗或無(wú)法進(jìn)行。準(zhǔn)備工作的內(nèi)容包括器皿的清洗、干燥與消毒，培養(yǎng)基與其他試劑的配制、分裝及滅菌，無(wú)菌室或超凈臺(tái)的清潔與消毒，培養(yǎng)箱及其他儀器的檢查與調(diào)試，具體內(nèi)容可參閱有關(guān)文獻(xiàn)。二、取材在無(wú)菌環(huán)境下從機(jī)體取出某種組織細(xì)胞（視實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩ǎ?，?jīng)過(guò)一定的處理（如消化分散細(xì)胞、分離等）后接入培養(yǎng)器血中，這一過(guò)程稱為取材。如是細(xì)胞株的擴(kuò)大培養(yǎng)則無(wú)取材這一過(guò)程。機(jī)體取出的組織細(xì)胞的培養(yǎng)稱

ELISA結(jié)果判定的方法2011/12/06: ELISA結(jié)果判定的方法1．定性測(cè)定（1）陽(yáng)性判定值法（cut-offvalue，CO值）：一般為陰性對(duì)照的平均A值加一個(gè)常數(shù)，試劑制備嚴(yán)格標(biāo)準(zhǔn)化，要先計(jì)算出陽(yáng)性對(duì)照A值平均數(shù)和陰性對(duì)照A值平均數(shù)。標(biāo)本A值≥CO值即為陽(yáng)性。（2）抑制率法：在競(jìng)爭(zhēng)抑制法中結(jié)果可用抑制率表示。抑制率（％）＝（A陰性對(duì)照A-A待測(cè)）／陰性對(duì)照X100％,一般以抑制率≥50％為陽(yáng)性2。半定量測(cè)定結(jié)果一般以滴度表示。將標(biāo)本連續(xù)稀釋后，進(jìn)行ELISA檢測(cè)，在陽(yáng)性臨界值以上的zui高稀釋度即為該標(biāo)本的“滴度”。3。定量測(cè)定即

組胺酸實(shí)驗(yàn)室測(cè)定法2011/12/03: 方法名稱：組胺酸的測(cè)定—電位滴定法應(yīng)用范圍：本方法采用滴定法測(cè)定組胺酸的含量。本方法適用于組胺酸。方法原理：供試品加無(wú)水甲酸溶解，再加冰醋酸，照電位滴定法，用高氯酸滴定液滴定。讀出高氯酸滴定液使用量，計(jì)算組胺酸的量。試劑：1.水（新沸放置至室溫）2.高氯酸滴定液（0.1mol/L）3.無(wú)水甲酸4.冰醋酸5.醋酐6.結(jié)晶紫指示液7.基準(zhǔn)鄰苯二甲酸氫鉀儀器設(shè)備：試樣制備：1.高氯酸滴定液（0.1mol/L）配制：取無(wú)水冰醋酸（按含水量計(jì)算，每1g水加醋酐5.22mL）750mL，加入高氯酸（70%-

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