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2018
06-04

如何維護(hù)原子吸收光譜儀
在分析實驗室中使儀器處于良好的狀態(tài)是很重要的。有規(guī)律的日常維護(hù)能夠確保儀器處于*的運行狀態(tài)。如何維護(hù)原子吸收光譜儀，維護(hù)應(yīng)包括以下四個重要方面：1．普通的儀器維護(hù)2．使用的氣體的維護(hù)3．火焰組件的維護(hù)4．石墨平臺組件的維護(hù)日常維護(hù)的優(yōu)點有以下幾點：l延長儀器壽命l減少停機時間l*儀器性能；增加分析人員對數(shù)據(jù)結(jié)果正確性的信心。如何維護(hù)原子吸收光譜儀普通的儀器維護(hù)灰塵和露水會在儀器表面積累，腐蝕性液體可能會濺到儀器上。為了降低危害，可以用蘸有水或中性洗滌劑的軟布擦拭儀器。嚴(yán)禁使用有機溶劑。樣品艙的光
2018
06-01

WB 或 IP 樣品制備的技術(shù)指導(dǎo)
在WB和IP實驗中，破碎細(xì)胞或組織與選擇和配制裂解液一樣重要。比起一些更軟的組織（如腦組織），在準(zhǔn)備WB或IP的樣品時，緊密的纖維組織（如肌肉組織）需要更劇烈的方法；對于培養(yǎng)的原代細(xì)胞或細(xì)胞系，在準(zhǔn)備WB和IP的樣品時需要一定的機械攪拌去提取蛋白。機械破碎樣品常規(guī)的方法和設(shè)備如下：組織高速勻漿儀通常破碎體積大的植物或者動物組織需要用可旋轉(zhuǎn)、帶有刀片的勻漿儀或者攪拌器.這些儀器通常通過一個電動的馬達(dá)帶動不銹鋼可旋轉(zhuǎn)切割刀片，可以從頂部或者底部啟動，這個過程中產(chǎn)生很少熱量，但是樣品需要置于冰上。勻漿
2018
06-01

多篇 SCI 發(fā)現(xiàn)用 RIPA 提蛋白存在問題，我們該如何應(yīng)對？
這篇綜述重點說明使用RIPA裂解液提取總蛋白以及下游實驗中可能存在的問題。RIPA裂解液常用于從脊椎動物細(xì)胞和組織中提取總蛋白[1]。但是由于蛋白質(zhì)間有較大的差異和非蛋白成份的干擾，所以從一個樣本中同時釋放和溶解所有蛋白質(zhì)是非常困難的。特別是一些整合到膜上的蛋白質(zhì)，或與其他蛋白質(zhì)/核酸形成復(fù)合物時，就大大阻礙了提取效率。因此可以推斷，蛋白質(zhì)在提取過程中或多或少的與在體內(nèi)時情況不盡相同。經(jīng)典RIPA裂解液中含有低濃度的十二烷基硫酸鈉（SDS變性劑），脫氧膽酸（干擾蛋白質(zhì)間相互作用）及其他成分。雖然
2018
05-31

RT-PCR的注意事項
一、防止RNA酶污染的措施1.所有的玻璃器皿均應(yīng)在使用前于180℃的高溫下干烤6hr或更長時間。2.塑料器皿可用0.1%DEPC水浸泡或用lv仿沖洗（注意：有機玻璃器具因可被lv仿腐蝕，故不能使用）。3.有機玻璃的電泳槽等，可先用去污劑洗滌，雙蒸水沖洗，乙醇干燥，再浸泡在3%H2O2室溫10min，然后用0.1%DEPC水沖洗，晾干。4.配制的溶液應(yīng)盡可能的用0.1%DEPC，在37℃處理12hr以上。然后用高壓滅菌除去殘留的DEPC。不能高壓滅菌的試劑，應(yīng)當(dāng)用DEPC處理過的無菌雙蒸水配制，然
2018
05-31

逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)實驗方法
逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(ReverseTranscription-PolymeraseChainReaction，RT-PCR)的原理是：提取組織或細(xì)胞中的總RNA，以其中的mRNA作為模板，采用Oligo（dT）或隨機引物利用逆轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄成cDNA。再以cDNA為模板進(jìn)行PCR擴增，而獲得目的基因或檢測基因表達(dá)。RT-PCR使RNA檢測的靈敏性提高了幾個數(shù)量級，使一些極為微量RNA樣品分析成為可能。該技術(shù)主要用于：分析基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物、獲取目的基因、合成cDNA探針、構(gòu)建RNA轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)。一、反轉(zhuǎn)
2018
05-30

流式細(xì)胞術(shù)常見問題集錦
1、流式細(xì)胞儀上的FL2-WFL2-AFL2-H分別是做什么的？FL2-W是只檢測熒光的脈沖寬度，F(xiàn)L2-H是指脈沖高度。通常在做細(xì)胞周期分析時應(yīng)用，用于去除粘連細(xì)胞。2、流式同型對照怎樣選擇？同型對照（IsotypeControl）：使用與一抗相同種屬來源、相同亞型、相同劑量和相同的免疫球蛋白及亞型的免疫球蛋白，用于消除由于抗體非特異性結(jié)合到細(xì)胞表面而產(chǎn)生的背景染色。如果一抗是多抗，可以用annormalserum（與一抗相同的正常血清）（mustbethesamespeciesasprima
2018
05-30

流式細(xì)胞術(shù)的常用樣品制備方法
流式細(xì)胞術(shù)的實驗檢測對象是單細(xì)胞懸液，因此，在組織化學(xué)和免疫組織化學(xué)實驗中欲對待測樣品細(xì)胞進(jìn)行分類計數(shù)，也需把樣品制備成細(xì)胞懸液，并要求被檢細(xì)胞大小為0.2～80pm，每個樣品中至少有20000個細(xì)胞，細(xì)胞濃度為105～107個／ml。制備成的單細(xì)胞懸液經(jīng)熒光或免疫熒光標(biāo)記即可上機檢測。一．單層培養(yǎng)細(xì)胞單細(xì)胞懸液的制備1.棄去培養(yǎng)細(xì)胞(對數(shù)生長期)中的舊培養(yǎng)液，加入1～2ml0.25％胰蛋白酶，倒置顯微鏡下觀察，見細(xì)胞稍變圓時，停止胰蛋白酶作用。也可直接觀察培養(yǎng)瓶，靜置消化2～3分鐘，待細(xì)胞逐漸
2018
05-30

恒溫金屬浴的操作方法
恒溫金屬浴采用微電腦控制和半導(dǎo)體制冷技術(shù)制造的一款恒濕儀產(chǎn)品，控濕精度高，制樣平行性好,儀器可配置多種模塊，可廣泛各種分析儀器樣品的保存、各種酶的保存和反應(yīng)、核酸和蛋白質(zhì)的變性處理、PCR反應(yīng)、電泳的預(yù)變性和血清凝固，各種產(chǎn)品材料的老化等。行業(yè)行業(yè)遍及醫(yī)藥、化工、食品安全、質(zhì)檢、環(huán)境等。恒溫金屬浴如何操作：1、熱塊預(yù)熱：給熱塊加熱20分鐘，使熱塊溫度均勻，紅燈亮為加溫，綠燈亮為恒溫，溫度表指示的是熱塊的測量溫度。2、設(shè)定溫度：用旋鈕調(diào)節(jié)到需要的溫度值，面板上的示值為設(shè)定溫度值。3、接通電源：檢查
2018
05-29

流式細(xì)胞術(shù)數(shù)據(jù)處理與分析
數(shù)據(jù)的顯示通?？煞譃橐痪S單參數(shù)直方圖（histogramplot）、二維點圖（dotplot）、二維等高圖（contour）和假三維圖（pseudo3D）等。下面簡述zui常用的單參數(shù)直方圖和二維點圖。1.單參數(shù)直方圖單參數(shù)直方圖是一維數(shù)據(jù)用得zui多的圖形，可用來進(jìn)行定性分析和定量分析。橫坐標(biāo)表示熒光信號或散射光信號強度的相對值，其單位用“道數(shù)”（channel）表示，橫坐標(biāo)可以是線性的，也可以是對數(shù)的?？v坐標(biāo)通常代表細(xì)胞出現(xiàn)的頻率或相對細(xì)胞數(shù)。下面以研究細(xì)胞周期為例說明如何分析單參數(shù)直方圖所
2018
05-29

流式細(xì)胞儀和流式細(xì)胞術(shù)指南篇
JayHaronPh.D.jaydotharonatgmaildotcomBDBiosciences,SanDiego,UnitedStates引用實驗材料和方法從1968年zui早的商品化流式細(xì)胞術(shù)(FC)和熒光激活細(xì)胞分類術(shù)(FACS)誕生以來,它們已得到大大改進(jìn)。但要成為實驗室廣泛接受的技術(shù)，除成本因素外，還存在不少障礙。技術(shù)上的問題主要是細(xì)胞內(nèi)低豐度分子的檢測，缺少“通用”細(xì)胞通透物質(zhì)，細(xì)胞自發(fā)熒光的干擾效應(yīng)，熒光分子間發(fā)射光譜的重疊，以及缺少可識別目標(biāo)分子的試劑。特別是對于細(xì)胞分揀來說
2018
05-28

細(xì)胞培養(yǎng)過程中有哪些污染
細(xì)胞培養(yǎng)中的污染分為兩類，化學(xué)污染和生物污染?；瘜W(xué)污染化學(xué)污染是一些對細(xì)胞有毒性的或?qū)?xì)胞產(chǎn)生刺激的化學(xué)物質(zhì)。這些污染一般來自于沒有洗凈的器皿、不純的化學(xué)試劑和質(zhì)量較差的蒸餾水等。化學(xué)污染中比較引人注意的是細(xì)菌內(nèi)毒素。它是革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞死亡后解體釋放出的疏水性的細(xì)胞壁組成物質(zhì)，對塑料等疏水性強的物質(zhì)有很強的吸附能力。細(xì)菌內(nèi)毒素可刺激部分細(xì)胞產(chǎn)生一些激素或細(xì)胞因子，對細(xì)胞生長和實驗結(jié)果產(chǎn)生影響。細(xì)菌內(nèi)毒素是臨床上的zui主要的熱原（即注射到動物體內(nèi)會導(dǎo)致動物發(fā)熱），所以通過細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)的疫苗、
2018
05-28

凝膠遷移實驗（EMSA）常見問答
1.什么是凝膠遷移或電泳遷移率實驗？凝膠遷移或電泳遷移率實驗（EMSA）是一種研究DNA結(jié)合蛋白和其相關(guān)的DNA結(jié)合序列相互作用的技術(shù)，可用于定性和定量分析。這一技術(shù)zui初用于研究DNA結(jié)合蛋白，目前已用于研究RNA結(jié)合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。通常將純化的蛋白和細(xì)胞粗提液和32P同位素標(biāo)記的DNA或RNA探針一同保溫，在非變性的聚丙烯凝膠電泳上，分離復(fù)合物和非結(jié)合的探針。DNA復(fù)合物或RNA復(fù)合物比非結(jié)合的探針移動得慢。同位素標(biāo)記的探針依研究的結(jié)合蛋白的不同，可是雙鏈或者是單鏈。當(dāng)檢
2018
05-24

原代細(xì)胞培養(yǎng)中存在的六個錯誤做法
原代細(xì)胞培養(yǎng)與細(xì)胞株不同，兩者在培養(yǎng)過程中的操作方法也不一樣。下面是原代細(xì)胞操作過程中容易出現(xiàn)的6個錯誤及對應(yīng)方法1.長時間水浴解凍因為原代細(xì)胞非常容易受到解凍過程的影響，所以在37℃水浴鍋中解凍時，要在水中擺動溶解。在細(xì)胞半溶后（不要等到全部溶解），迅速拿到生物安全柜或超凈臺中，用1ml的槍，抽出事先準(zhǔn)備好的*培養(yǎng)基打入凍存管中，然后抽到培養(yǎng)瓶中，反復(fù)進(jìn)行，直至*溶解2.把凍存管的細(xì)胞溶解后迅速離心如果原代細(xì)胞溶解后馬上離心，細(xì)胞所受的打擊可能比DMSO的毒性還要大，不建議采用這個方法。用帶有
2018
05-24

菌落 PCR 分析克隆的重組體實驗
菌落PCR分析克隆的重組體實驗試劑、試劑盒溴化乙錠Taq延伸PCR添加劑Tween2010%溶液dNTP溶液PCR緩沖液熱穩(wěn)定DNA聚合酶引物儀器、耗材無菌槍頭瓊脂糖凝膠電泳設(shè)備和試劑實驗步驟一、材料1.緩沖液、溶液和試劑溴化乙錠Taq延伸PCR添加劑（Stratagene)Tween20，10%溶液2.酶和酶緩沖液dNTP溶液（包含所有的4種dNTP，每種都是25mmol/L)PCR緩沖液，10X,用戶買熱穩(wěn)定聚合酶時公司一并提供，或者PCR優(yōu)化緩沖液，比如，Opti-PrimePCR優(yōu)化試劑
2018
05-22

Strep-tag II磁珠技術(shù)問答
Strep-tagII磁珠海貍Strep-tagII磁珠可以在生理條件下純化得到使Strep-tag融合蛋白。與其他tag相比，這些溫和的純化參數(shù)能保存蛋白質(zhì)的生物活性，并僅經(jīng)一步層析后即可產(chǎn)出超過99%的純度。1.Strep-tagII磁珠純化的技術(shù)原理是什么呢？答：主要基于Strep–tagII多肽與Strep-Tactin（一種經(jīng)過特殊工藝改造的鏈酶親和素）的相互作用，在生理緩沖液或是含有其他添加劑的環(huán)境下，帶有標(biāo)簽的蛋白與固定化的StrepTactin親和純化，經(jīng)過加有2.5mM脫硫生物
2018
05-22

GST融合蛋白純化磁珠技術(shù)問答
GST融合蛋白純化篇1.如何純化GST融合蛋白？2.可純化蛋白種類3.磁珠掛不上目的蛋白以下的處理方案的前提是樣本里面有目的蛋白，如果是包涵體需要變性?？赡芤唬航Y(jié)合條件不對理想的結(jié)合條件為pH6.5-8.0，純化之前確認(rèn)磁珠是否采用緩沖液平衡以及蛋白樣本的pH值，低于pH6.5或高于pH8時，融合蛋白與磁珠結(jié)合不充分導(dǎo)致結(jié)合效率低?？赡芏簶颖局心康牡鞍椎臐舛绕湍康牡鞍椎臐舛冗^低，會嚴(yán)重影響磁珠與蛋白的結(jié)合。兩種方法可供選擇：a)濃縮蛋白樣本；b)增加磁珠的濃度可能三：檢查目的蛋白是否聚集沉淀
2018
05-22

His-tag蛋白純化磁珠技術(shù)說明
His-tag蛋白純化篇1.蛋白不吸附或親和力低首先確認(rèn)純化前的樣品中是否有目標(biāo)蛋白。（1）有目標(biāo)蛋白，但大量穿透：a、蛋白不含有標(biāo)簽或未能正確表達(dá)解決措施：WesternBlot鑒定目標(biāo)蛋白是否有His-Tag。若沒有，需要重新構(gòu)建載體，添加組氨酸標(biāo)簽，并確認(rèn)標(biāo)簽正確表達(dá)。b、蛋白折疊導(dǎo)致組氨酸標(biāo)簽未*暴露解決措施：在不變性條件下純化蛋白，在樣品和平衡緩沖緩沖液中加1-2M尿素，這樣蛋白結(jié)構(gòu)相對松散，而蛋白不會變性。在變性條件下純化蛋白，加入4~8M尿素或4~6M鹽酸胍使蛋白變性。如果蛋白有二
2018
05-22

如何選擇細(xì)胞培養(yǎng)板
細(xì)胞培養(yǎng)板的選擇：細(xì)胞培養(yǎng)板依底部形狀的不同可分為平底和圓底（U型和V型）；培養(yǎng)孔的孔數(shù)有6、12、24、48、96、384孔等；根據(jù)材質(zhì)的不同有Terasaki板和普通細(xì)胞培養(yǎng)板。具體選擇時根據(jù)培養(yǎng)細(xì)胞的類型、所需培養(yǎng)體積及不同的實驗?zāi)康亩āＦ降缀蛨A底（U型和V型）培養(yǎng)板的區(qū)別和選擇：貼壁細(xì)胞一般用平底培養(yǎng)板懸浮型細(xì)胞的培養(yǎng)一般用V型U型培養(yǎng)板亦多用于培養(yǎng)懸浮型細(xì)胞不同型狀的板子自然有不同用途。平底的什么類型的細(xì)胞都可用﹐但當(dāng)細(xì)胞數(shù)目較少﹐如做克隆時﹐就用96孔平底板﹐另外﹐做MTT等實驗時
2018
05-21

流式檢測 T 細(xì)胞增殖的技巧
集中于T細(xì)胞的許多基礎(chǔ)和臨床免疫研究包括增殖測定，都是為了確定T細(xì)胞是否能夠在不同的體外或體內(nèi)條件下增殖。流式細(xì)胞儀術(shù)是測量T細(xì)胞增殖的理想方法，現(xiàn)在有一套染色產(chǎn)品，可以在現(xiàn)有的流式細(xì)胞儀染色板中加入增殖染料。與所有流式細(xì)胞術(shù)染色步驟一樣，一定要做一個預(yù)實驗確定染色試劑的用量和確定采集的細(xì)胞數(shù)，在下一個T細(xì)胞實驗確定使用其中的一個染色方案來檢測細(xì)胞的增殖。胞內(nèi)熒光染色：羧基熒光素二乙酸酯琥珀酰亞胺酯（CFSE）或類似的熒光染料是可以進(jìn)入活細(xì)胞內(nèi)的。在增殖期間，隨著細(xì)胞分裂熒光染料的濃度也隨之稀釋
2018
05-17

重組蛋白分離純化的基本原則
不管黑貓白貓，抓到老鼠就是好貓，對純化來講亦如此，能拿到純度好的蛋白，符合純化要求就是硬道理。不同蛋白純化工藝不同，即使相同的原料也有不同的純化方案。蛋白質(zhì)純化方法的選擇主要是利用不同蛋白質(zhì)之間的相似性與差異，依據(jù)蛋白之間的相似性可以去除非蛋白物質(zhì)，在根據(jù)蛋白的差異性將目的蛋白分離出來，所以要取得好的純化結(jié)果所可以采用的策略及原則卻是共通的。1.針對不同的產(chǎn)物表達(dá)形式采用不同的策略：a)融合型表達(dá)重組蛋白，一般胞內(nèi)可溶性的，擬選用親和層析進(jìn)行純化；b)分泌型表達(dá)的重組蛋白，通常體積大、濃度低，因

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