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2018
06-21

免疫復(fù)合物的純化
實(shí)驗(yàn)試劑裂解緩沖液抗體蛋白A或蛋白G微球(用含0.02％疊氮鈉裂解緩沖液配成10％(V／V)的混懸液，4℃保存)不含DTT的Laemmli樣品緩沖液(2％SDS、10％甘油、60mmol／LTris，pH6.8和0.02％溴酚藍(lán))1mol／LDTT(保存于-20℃)實(shí)驗(yàn)設(shè)備搖床、抽吸裝置(大多是通過(guò)導(dǎo)管與負(fù)壓瓶一室內(nèi)真空器連接)實(shí)驗(yàn)步驟1．準(zhǔn)備工作蛋白A或蛋白G微珠混懸液可在用前準(zhǔn)備，4℃保存于含疊氮鈉的溶液中。2．操作步驟1)將小量裂解物樣本分別置于適當(dāng)數(shù)量的1.5mlEP管中，加入裂解緩沖液
2018
06-21

如何選擇pH電極與ORP電極
一、pH電極選型：1、殼體材料的選擇：pH電極外殼一般采用PC塑料（聚碳酸脂）外殼和玻璃外殼二種，PC外殼耐碰撞和沖擊，但適用溫度2、液接界的選擇：液接界是溝通外參比溶液和被測(cè)溶液的連接部件，要求電勢(shì)穩(wěn)定及重現(xiàn)。一般液接界材料有纖維材質(zhì)，陶瓷芯，玻璃磨口等介質(zhì)，纖維材質(zhì)一般用于塑殼電極中，其溶液滲出速度較快，不易堵塞；陶瓷芯耐腐蝕性好，液接界電勢(shì)的穩(wěn)定性及重現(xiàn)性均較好，可用于高溫介質(zhì)中，是應(yīng)用廣泛的液接界材料；玻璃磨口接界與溶液接觸面積及滲出速度均較大，適用于離子強(qiáng)度較弱，高粘度，混濁液體或膠體
2018
06-20

操作近紅外光譜儀的注意事項(xiàng)
近紅外光譜儀主要廣泛應(yīng)用于對(duì)液體狀樣品的化學(xué)、物理性質(zhì)作定量分析，由于儀器在常規(guī)光纖中有良好的傳輸性，且儀器簡(jiǎn)單、分析速度快、對(duì)樣品不會(huì)造成破壞、測(cè)試時(shí)對(duì)樣品需求小等優(yōu)點(diǎn)，在在線分析中得到廣泛使用。在操作近紅外光譜儀的過(guò)程中要注意以下事項(xiàng)：1、近紅外光譜區(qū)范圍為780~2526nm，是介于可見(jiàn)光和中紅外光之間的電磁波，在檢測(cè)樣品前首先要了解測(cè)試光譜的范圍。2、在使用前還要對(duì)儀器進(jìn)行校正，近紅外光譜儀的校正相對(duì)比較麻煩，為了得出準(zhǔn)確的數(shù)值，一般需要80個(gè)以上的代表性樣品用來(lái)進(jìn)行校正，這一步驟通常稱(chēng)
2018
06-20

液相色譜儀常見(jiàn)故障處理
LC-10AT液相色譜儀是日本島津公司1996年的產(chǎn)品，檢測(cè)器為可變波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器，色譜柱為島津公司的ODS-C18，大連依利特的ODS-C18。八年的日常工作中遇到了幾種故障，如故障1經(jīng)咨詢(xún)島津公司的工程師后，得以解決；故障2、故障5是頻繁碰到的問(wèn)題等，特作總結(jié)如下：故障1流動(dòng)相內(nèi)有氣泡，關(guān)閉泵，打開(kāi)泄壓閥，打開(kāi)purge鍵，清洗脫氣，氣泡不斷從過(guò)濾器冒出，進(jìn)入流動(dòng)相，無(wú)論打開(kāi)purge鍵幾次，都無(wú)法清除不斷產(chǎn)生的氣泡。原因過(guò)濾器長(zhǎng)期沉浸于乙酸銨等緩沖液內(nèi)，過(guò)濾器內(nèi)部由于霉菌的生長(zhǎng)繁殖，形成菌
2018
06-20

針頭式過(guò)濾器的泡點(diǎn)測(cè)試
微孔濾膜過(guò)濾法做為一種重要的除菌和除顆粒的方法，已經(jīng)在制藥，顆粒檢測(cè)及分析儀器的樣品處理中廣泛應(yīng)用。做為實(shí)驗(yàn)室為常見(jiàn)的針頭式過(guò)濾器除了需要做溶出檢測(cè)，化學(xué)兼容性的檢測(cè)之外，還應(yīng)做完整性測(cè)試。過(guò)濾器的完整性是過(guò)濾產(chǎn)品中很重要的一個(gè)指標(biāo)，一個(gè)過(guò)濾系統(tǒng)在過(guò)濾前后是否能保證其完整性，也是衡量一個(gè)過(guò)濾產(chǎn)品質(zhì)量?jī)?yōu)劣的重要參數(shù)。對(duì)于過(guò)濾工藝，尤其是除菌級(jí)的過(guò)濾而言，完整性測(cè)試是一種必要的手段，以確定過(guò)濾的安全可靠性，避免工作中不必要的浪費(fèi)，包括時(shí)間，精力，過(guò)濾樣品等。通過(guò)完整性測(cè)試，可以確定：1.過(guò)濾器自身的
2018
06-19

質(zhì)譜MRM技術(shù)定量分析與應(yīng)用
質(zhì)譜多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(multiplereactionmonitoring,MRM)技術(shù)作為一種質(zhì)譜檢測(cè)的分析方法，具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、準(zhǔn)確度高、重現(xiàn)性好、線性動(dòng)態(tài)范圍寬、自動(dòng)化高通量的突出優(yōu)點(diǎn)，這些特質(zhì)能夠滿(mǎn)足今天很多研究領(lǐng)域的迫切需要。通過(guò)MRM技術(shù)進(jìn)行實(shí)時(shí)的定量監(jiān)測(cè)可以進(jìn)行藥代動(dòng)力學(xué)研究、臨床診斷、違禁藥物檢查、食品化妝品等工業(yè)質(zhì)量控制、環(huán)境檢測(cè)、農(nóng)業(yè)植物學(xué)研究以及代謝組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)Biomarker的發(fā)現(xiàn)等相關(guān)研究。1.質(zhì)譜MRM技術(shù)的原理MRM技術(shù)是一種基于已知或假定的反應(yīng)離子信息，有
2018
06-19

質(zhì)譜鑒定常見(jiàn)問(wèn)題解答
1.一級(jí)質(zhì)譜和二級(jí)質(zhì)譜有什么區(qū)別？什么時(shí)候做一級(jí)，什么時(shí)候做二級(jí)？答：一級(jí)質(zhì)譜鑒定的方式主要指胎指紋圖譜（PMF），即利用質(zhì)譜儀測(cè)量酶解片段的分子量并搜庫(kù)比較實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)的鑒定，二級(jí)質(zhì)譜是在一級(jí)質(zhì)譜的基礎(chǔ)上再選擇部分肽段做進(jìn)一步的破碎并對(duì)碎片進(jìn)行深入分析和比較，鑒定出該肽段的序列并結(jié)合PMF的結(jié)果從而實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)的鑒定。二級(jí)質(zhì)譜能夠得到部分肽短的序列，具有更高的可靠性。隨著現(xiàn)在雜志對(duì)數(shù)據(jù)的要求越來(lái)越嚴(yán)格，二級(jí)質(zhì)譜鑒定是蛋白鑒定的大趨勢(shì)，而且即使目前做一級(jí)質(zhì)譜鑒定的結(jié)果，也需要挑選部分PMF結(jié)果做二級(jí)
2018
06-15

氣相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用（GC/MS）技術(shù)在輕工行業(yè)的一些應(yīng)用
1.煙草香味成分分析煙草香味成分分析對(duì)煙草的品質(zhì)影響極大，是目前煙草行業(yè)關(guān)注的技術(shù)問(wèn)題之一，我們采用同時(shí)蒸餾萃?。⊿DE），吹掃捕集、固相萃取（SPME）等樣品處理技術(shù)，與GC/MS技術(shù)相結(jié)合，對(duì)國(guó)內(nèi)外的香煙、煙葉原料作了大量的分析，鑒定出數(shù)個(gè)特殊的煙用香氣物質(zhì)，找出國(guó)內(nèi)外卷煙在配方、用料、加香各方面的一些不同的思路，對(duì)配方產(chǎn)生了較重要的指導(dǎo)作用。2.白酒香味成份分析各種白酒中香味成份的種類(lèi)相差很小，但是各種香味成份含量較大，構(gòu)成了不同品牌、不同地區(qū)白酒的香味的風(fēng)格各異。我們采用液/液萃?。↙/
2018
06-15

氣相色譜層析
（一）基本原理混合樣品的氣流通過(guò)固定相時(shí)，根據(jù)各組分對(duì)固定相的吸附強(qiáng)弱不同使不同成分得到分離。利用氣相色譜層析技術(shù)做為微生物診斷的工具已成功地用于微生物的分類(lèi)和鑒定。該法敏感性強(qiáng)，能夠分離和檢測(cè)到毫微克的水平。它具有快速的特點(diǎn)，常在數(shù)十分鐘甚至數(shù)小時(shí)就可以對(duì)傳染病做出早期診斷。其結(jié)果穩(wěn)定，重復(fù)性好，但不足之處是操作中各因素不易控制，方法不易標(biāo)化等。（二）氣相色譜儀的基本部件1．載氣常用的載氣主要有氮、氬、氫和二氧化碳等。這些氣體一般都由高壓氣瓶供給。2．進(jìn)樣器氣相色譜儀可以用于分離固相、氣相和液
2018
06-14

如何選擇過(guò)濾器
1、過(guò)濾器主要用于捕集0.3um以下的顆?；覊m及各種懸浮物。采用超細(xì)玻璃纖維紙作濾料，每臺(tái)均經(jīng)納焰法測(cè)試，具有過(guò)濾效率高、阻力低、容塵量大等特點(diǎn)。過(guò)濾器包括有隔板過(guò)濾器和無(wú)隔板過(guò)濾器，有隔板過(guò)濾器包括：有隔板過(guò)濾器，耐高溫過(guò)濾器，耐高濕過(guò)濾器，無(wú)隔板過(guò)濾器包括組合式組合式過(guò)濾器，無(wú)隔板過(guò)濾器，液槽無(wú)隔板過(guò)濾器，超低阻無(wú)隔板過(guò)濾器，刀架式無(wú)隔板過(guò)濾器，超過(guò)濾器0.1um過(guò)濾效率。2、過(guò)濾器是在末端送風(fēng)處，設(shè)計(jì)選用過(guò)濾器時(shí)，應(yīng)由低到高來(lái)選用，能起到保護(hù)各級(jí)過(guò)濾器的使用壽命。如：G級(jí)過(guò)濾→F級(jí)過(guò)濾→H
2018
06-14

氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀分類(lèi)
氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀分類(lèi)有多種。1、按分析規(guī)?？煞郑盒⌒蜌庀嗌V質(zhì)譜聯(lián)用儀和大型氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀。2、按分辨率可分：低分辨氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀、中分辨氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀和高分辨氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀。3、按質(zhì)量分析器的時(shí)空屬性可分：時(shí)間型氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀和空間型氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀。4、按質(zhì)量分析器的工作原理可分：氣相色譜四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀、氣相色譜離子阱質(zhì)譜聯(lián)用儀、氣相色譜飛行時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用儀和氣相色譜傅里葉變換質(zhì)譜聯(lián)用儀等。5、按用途可分：生物氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀、制藥氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀、化工氣相色譜質(zhì)
2018
06-14

淺談四極桿氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀的操作維護(hù)及保養(yǎng)
年來(lái),隨著食品中農(nóng)藥殘留檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展,氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀被廣泛使用,大多數(shù)使用者都能夠熟練操作儀器,但對(duì)于使用中應(yīng)特別注意的一些問(wèn)題、儀器的日常維護(hù)及如何進(jìn)行期間核查,國(guó)內(nèi)外尚缺乏文章進(jìn)行詳細(xì)系統(tǒng)的介紹。而分析數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確可靠,儀器狀態(tài)是一個(gè)非常重要的影響因素,正確的使用及維護(hù)保養(yǎng)不僅可以確保儀器的良好狀態(tài),還可以延長(zhǎng)儀器和易耗件的使用壽命。本文作者根據(jù)多年儀器操作經(jīng)驗(yàn),以FinnigantraceGCUltra、traceDSQ四極桿氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀為例,從載氣系統(tǒng)、質(zhì)譜真空系統(tǒng)、進(jìn)樣系統(tǒng)、
2018
06-14

液相色譜之反相液相色譜
反相色譜（reversedphascchromatography,RPC）是基于溶質(zhì)、極性流動(dòng)相和非極性固定相表面間的疏水效應(yīng)建立的一種色譜模式，任何一種有機(jī)分子的結(jié)構(gòu)中都有非極性的疏水部分，這部分越大，一般保留值越高，在液相色譜中這是應(yīng)用面廣的一種分離模式，在生物大分子的反相液相色譜條件下，流動(dòng)相多采用酸性的、低離子強(qiáng)度的水溶液，并加一定比例的能與水互溶的異丙醇、乙腈或甲醇等有機(jī)改性劑，大量使用的填料為孔徑在30納米以上的硅膠烷基鍵合相，除此之外，也有少量高聚物微球。實(shí)驗(yàn)表明，烷基鏈長(zhǎng)對(duì)蛋白質(zhì)
2018
06-13

藥物靶點(diǎn)開(kāi)發(fā)與驗(yàn)證淺談
相對(duì)于未知的藥物靶點(diǎn)來(lái)說(shuō)，已知的藥物靶點(diǎn)只不過(guò)是冰山一角。如何能在眾多的未知里發(fā)現(xiàn)并找到有效的藥物靶點(diǎn)？靶點(diǎn)的選擇在整個(gè)藥物研發(fā)過(guò)程中起著至關(guān)重要的作用。現(xiàn)代藥物研究中，新靶點(diǎn)的建立往往是新藥創(chuàng)新的前提和保障。隨著現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展和人類(lèi)基因組計(jì)劃的完成，出現(xiàn)了大量可供治療干預(yù)的新型分子靶點(diǎn)，但并不是所有的靶點(diǎn)都能夠成為與疾病有關(guān)的有效靶點(diǎn)，因此對(duì)新型靶點(diǎn)進(jìn)行開(kāi)發(fā)和驗(yàn)證便成為非常重要的工作。據(jù)統(tǒng)計(jì)，除抗感染、抗病毒和抗寄生蟲(chóng)類(lèi)藥物以外，制藥工業(yè)用來(lái)作為藥物靶向篩選的靶標(biāo)已有417種，包括受
2018
06-13

中藥活性篩選與活性追蹤實(shí)驗(yàn)
DPPH法實(shí)驗(yàn)方法原理DPPH(2,2-二苯基-1-苦味基肼自由基，2,2-diphenyl-1-(2,4,6-trinitrophenyl)hydrazyl)是一種比較穩(wěn)定的脂性自由基，其N(xiāo)上有一個(gè)游離電子，其乙醇溶液呈紫色，在517nm處有大的吸收峰。加入抗氧化劑以后，DPPH捕捉一個(gè)電子與游離電子配對(duì)，紫色褪去，變?yōu)闊o(wú)色物質(zhì)，在517nm處的吸收消失，其褪色程度與其接受的電子數(shù)成定量關(guān)系。依此原理用分光光度計(jì)檢測(cè)DPPH自由基與試樣液反應(yīng)后吸光值的變化，可檢定試樣提供氫原子、清除自由基抗氧
2018
06-12

探究磁珠法蛋白純化失敗的真相
磁珠法蛋白純化越來(lái)越受到很多科研小伙伴的青睞，使用磁珠純化方法比填料柱方法操作更加便捷、磁珠的載量更高、獲取的蛋白純度更高。在磁珠法蛋白純化被逐漸接受的同時(shí)，有的用戶(hù)由于剛接觸磁珠法蛋白純化，對(duì)于磁珠法的原理、性能不熟悉，導(dǎo)致純化過(guò)程中遇到些問(wèn)題，今天小編就用戶(hù)使用磁珠過(guò)程中經(jīng)常遇到的問(wèn)題，科普一番，開(kāi)啟我們探究磁珠法蛋白純化失敗的真相之旅！His-tag蛋白純化磁珠原理His-tag蛋白純化磁珠是在瓊脂糖微球的內(nèi)部填充磁性?xún)?nèi)核，在表面固定金屬離子Ni2+或Co2+，Ni2+或Co2+可以和蛋白
2018
06-12

PCR標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)體系及反應(yīng)條件
標(biāo)準(zhǔn)的PCR反應(yīng)體系：10×擴(kuò)增緩沖液10ul4種dNTP混合物各200umol/L引物各10～100pmol模板DNA0.1～2ugTaqDNA聚合酶2.5uMg2+1.5mmol/L加雙或三蒸水至100ulPCR反應(yīng)五要素：參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。
2018
06-11

關(guān)于加熱型磁力攪拌器加熱問(wèn)題的探討
加熱型磁力攪拌器主要應(yīng)用于化學(xué)合成、分析化學(xué)和生命科學(xué)領(lǐng)域。對(duì)于加熱功能，客戶(hù)往往比較關(guān)注的加熱速度、控制溫度過(guò)沖和維持溫度穩(wěn)定性的能力，但加熱速度和控制溫度過(guò)沖是一對(duì)不可調(diào)和的矛盾，尤其是在開(kāi)放的環(huán)境中針對(duì)不同介質(zhì)、不同體積的應(yīng)用，這對(duì)矛盾顯得更加難以平衡。為了能夠適應(yīng)更多客戶(hù)不同應(yīng)用的需求，的該類(lèi)產(chǎn)品生產(chǎn)商都采用了類(lèi)似的折中的控制方法------允許*次達(dá)到目標(biāo)溫度時(shí)有一定程度的溫度過(guò)沖，之后不再允許有任何大幅度溫度過(guò)沖，并且盡快形成只在目標(biāo)溫度附近非常小的震蕩（如圖1所示），這也必然導(dǎo)致了
2018
06-11

移液器使用小常識(shí)
1．使用合適的吸頭為確保更好的準(zhǔn)確性和精度，建議移液量在吸頭的35％-100％量程范圍內(nèi)。2．吸頭的安裝對(duì)于大多數(shù)移液器，特別是多道移液器，安裝吸頭并非易事：為追求良好的密封性，需要將移液套柄插入吸頭后，左右轉(zhuǎn)動(dòng)或前后搖動(dòng)用力上緊。也有人會(huì)用移液器反復(fù)撞擊吸頭來(lái)上緊，但這樣操作會(huì)導(dǎo)致吸頭變形而影響精度，嚴(yán)重的則會(huì)損壞移液器，所以應(yīng)當(dāng)避免出現(xiàn)這樣的操作。3．吸頭浸入角度和深度吸頭浸入角度控制在傾斜20度之內(nèi)，保持豎直為佳；吸頭浸入深度建議如下所示：移液器規(guī)格吸頭浸入深度2µL和10µL1mm20µ
2018
06-07

PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路
目的：通過(guò)特異性阻斷PI3K和mTOR，觀察HepG2和Hep3B細(xì)胞株P(guān)I3K/Akt/mTOR信號(hào)通路活性及生物學(xué)行為的改變，探討相關(guān)的分子機(jī)制。方法：在培養(yǎng)的HepG2、Hep3B人肝癌細(xì)胞株和人正常肝細(xì)胞株QSG-7701上，以免疫印跡方法（Westernblot）檢測(cè)各細(xì)胞株中PI3K（p110α亞單位）、PTEN、pAkt（S473，T308）和p-mTOR（S2448）的表達(dá)情況；分別用PI3K抑制劑LY294002（50μmol/ml）和mTOR抑制劑Rapamycin（RAPA

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