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2018
08-08

紅外光譜儀的三個重要特征
（1）紅外光譜儀譜帶位置譜帶的位置是指示一定基團存在的有用的特征，由于若干不同的集團可能在相同的頻率區(qū)出現(xiàn)，做出判斷時要特別慎重。（2）形狀有時候從譜帶的形狀也可能得到相關基團的有關信息，這些對于堅定特殊基團的存在很有用。（3）相對強度由于分子中極性較強的集團產(chǎn)生強的吸收帶，有時我們可以根據(jù)相對強度進行分析。（4）同一基團振動峰任一官能團由于存在伸縮振動（某些官能團同時存在對稱和反對稱伸縮振動）和多種彎曲振動，會在紅外光譜儀譜圖的不同區(qū)域顯示出幾個相關吸收峰。所以，只有當幾處應該出現(xiàn)吸收峰的地方
2018
08-07

紅外光譜儀的注意事項
1、測定時實驗室的溫度應在15～30℃，相對濕度應在65%以下，所用電源應配備有穩(wěn)壓裝置和接地線。紅外實驗室的面積不要太大，能放得下必須的儀器設備即可，但室內一定要有除濕裝置。2、單光朿型傅里葉紅外分光光度計(目前應用多)，實驗室里的CO2含量不能太高，因此實驗室里的人數(shù)應盡量少，無關人員**不要進入，還要注意適當通風換氣。3、如供試品為鹽酸鹽，因在壓片過程中可能出現(xiàn)離子交換現(xiàn)象，標準規(guī)定用氯化鉀(也同溴化鉀一樣預處理后使用)代替溴化鉀進行壓片，但也可比較氯化鉀壓片和溴化鉀壓片后測得的光譜，如二
2018
08-02

紅外光譜儀需要怎樣的工作環(huán)境
近紅外光譜儀器從分光系統(tǒng)可分為固定波長濾光片、光柵色散、快速傅立葉變換、聲光可調濾光器和陣列檢測五種類型。濾光片型主要作分析儀器，如糧食水分測定儀。由于濾光片數(shù)量有限，很難分析復雜體系的樣品。光柵掃描式具有較高的信噪比和分辨率。由于儀器中的可動部件（如光柵軸）在連續(xù)高強度的運行中可能存在磨損問題，從而影響光譜采集的可靠性，不太適合于在線分析。紅外光譜儀是具有較高的分辨率和掃描速度，這類儀器的弱點同樣是干涉儀中存在移動性部件，且需要較嚴格的工作環(huán)境。聲光可調濾光器是采用雙折射晶體，通過改變射頻頻率
2018
08-01

siRNA表達載體的構建
siRNA表達載體的構建標簽：siRNA構建表達載體siRNA表達載體構建可以：（1）作為后基因組時代基因功能分析的有力工具；（2）應用于基因組學、細胞信號傳導通路分析；（3）用于藥物靶點篩選、疾病治療。實驗方法原理多數(shù)的siRNA表達載體依賴三種RNA聚合酶III啟動子(polIII)中的一種，操縱一段小的發(fā)夾RNA(shorthairpinRNA,shRNA)在哺乳動物細胞中的表達。這三類啟動子包括大家熟悉的人源和鼠源的U6啟動子和人H1啟動子。之所以采用RNApolIII啟動子是由于它可以
2018
07-27

紅外光譜儀的定義及應用
紅外光譜儀是利用物質對不同波長的紅外輻射的吸收特性，進行分子結構和化學組成分析的儀器。紅外光譜儀通常由光源，單色器，探測器和計算機處理信息系統(tǒng)組成。根據(jù)分光裝置的不同，分為色散型和干涉型。對色散型雙光路光學零位平衡紅外分光光度計而言，當樣品吸收了一定頻率的紅外輻射后，分子的振動能級發(fā)生躍遷，透過的光束中相應頻率的光被減弱，造成參比光路與樣品光路相應輻射的強度差，從而得到所測樣品的紅外光譜。應用于染織工業(yè)、環(huán)境科學、生物學、材料科學、高分子化學、催化、煤結構研究、石油工業(yè)、生物醫(yī)學、生物化學、藥學
2018
07-25

紅外光譜儀的保養(yǎng)及壓片的注意事項
1、測定時實驗室的溫度應在15～30℃，相對濕度應在65%以下，所用電源應配備有穩(wěn)壓裝置和接地線。室內一定要有除濕裝置，嚴格控制室內的相對濕度，因此紅外實驗室的面積不要太大，能放得下必須的儀器設備即可。2、如所用的是單光朿型傅里葉紅外分光光度計(目前應用多)，實驗室里的CO2含量不能太高，因此實驗室里的人數(shù)應盡量少，無關人員**不要進入，還要注意適當通風換氣。3、為防止儀器受潮而影響使用壽命，紅外實驗室應保持干燥，即使儀器經(jīng)常不用，也應每周開機至少兩次，每次半天，同時開除濕機除濕。特別是霉雨季節(jié)
2018
07-25

流式細胞儀檢測細胞凋亡：Heochst 33342/PI雙染色法
方法原理經(jīng)固定的凋亡細胞其染色體熒光染料的DNA可染性性下降。細胞一經(jīng)固定就不再是活細胞，而且細胞固定過程對細胞膜的通透性也有影響。因此發(fā)展了用“細胞活性”鑒定染料染色的流式細胞儀檢測方法。這些方法細胞不經(jīng)固定就直接用DNA染料染色，且染料的濃度要比固定細胞所用的濃度要低得多。流式細胞儀通常根據(jù)細胞膜完整性將細胞分為“活細胞”和“死細胞”，因此正常細胞和凋亡細胞歸為活細胞。活細胞染料如Hoechst33342能少許進入正常細胞膜而對細胞沒有太大得細胞毒作用。Hoechst33342在凋亡細胞中的
2018
07-25

流式細胞儀檢測細胞凋亡：PI單染色法
一、基本原理其原理主要是根據(jù)細胞凋亡時在細胞、亞細胞和分子水平上所發(fā)生的特征性改變。這些改變包括細胞核的改變、細胞器的改變、細胞膜成分的改變和細胞形態(tài)的改變等，其中細胞核的改變有特征性，主要包括以下幾個方面：1、細胞核的改變由于凋亡細胞核的改變，造成各種染色體熒光染料對凋亡細胞DNA可染性發(fā)生改變。研究表明，用各種染色體熒光染料對經(jīng)固定的凋亡細胞進行染色，其DNA可染性降低。許多學者把這種DNA可染性的降低認為是凋亡細胞的標志之一。2、光散射特性凋亡細胞形態(tài)上的改變影響它們的光散射特性。在流式細
2018
07-19

甲基化特異性PCR
甲基化特異性PCR標簽：甲基化特異性PCRDNA甲基化是一種表觀遺傳修飾，它是由DNA甲基轉移酶（DNAmethyl-transferase,Dnmt）催化S-腺苷甲硫氨酸作為甲基供體，將胞嘧啶轉變?yōu)?-甲基胞嘧啶（mC）的一種反應，在真核生物DNA中，5-甲基胞嘧啶是唯yi存在的化學性修飾堿基。亞硫酸氫鈉法實驗方法原理MSP是一種簡便、特異的、敏感的檢測單基因甲基化的方式。其基本原理是用亞硫酸氫鈉處理基因組DNA，未甲基化的胞嘧啶變成尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不變，然后用3對特異性的引物對所測基
2018
07-19

凝膠遷移實驗（EMSA）
凝膠遷移實驗（EMSA）標簽：凝膠遷移EMSA凝膠遷移或電泳遷移率實驗（EMSA）可以：（1）研究DNA結合蛋白和其相關的DNA結合序列相互作用；（2）可用于DNA定性和定量分析；（3）用于研究RNA結合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。凝膠遷移實驗方法原理凝膠遷移或電泳遷移率實驗（EMSA-electrophoreticmobilityshiftassay）是一種研究DNA結合蛋白和其相關的DNA結合序列相互作用的技術，可用于定性和定量分析。這一技術初用于研究DNA結合蛋白，目前已用于研究RN
2018
07-18

電化學發(fā)光免疫測定
電化學發(fā)光免疫測定(electrochemiluminescenceimmunoassay，ECLl)是電化學發(fā)光(ECL)和免疫測定相結合的產(chǎn)物。ECLI中標記物的發(fā)光原理與一般的化學發(fā)光(CL)不同，是一種在電極表面由電化學引發(fā)的特異性化學發(fā)光反應，實際上包括了電化學和化學發(fā)光2個過程。ECL與CL的差異在于ECL是電啟動發(fā)光反應，而CL是通過化合物混合啟動發(fā)光反應。在電化學發(fā)光免疫測定中應用的標記物為電化學發(fā)光反應的底物三聯(lián)吡啶釕，其衍生物N—羥基琥珀酰胺(NHS)酯可通過化學反應與抗體或
2018
07-16

葡聚糖凝膠柱使用及注意事項
葡聚糖凝膠柱使用及注意事項1SephadexG型葡聚糖凝膠只適合在水中使用，SephadexG-25羥丙化后就是SephadexLH-20。其既有分子篩作用，在由極性與非極性溶劑組成的溶劑中還有反相層析效果。雖然價位很高，但由于性能頗佳，可再生利用，所以倍受親睞。此外上柱樣品損失很少，對處理小樣品較好，這也是我們實驗室常用的原因之一。2SephadexLH20的原理。SephadexLH20的分離原理主要有兩方面：以凝膠過濾作用為主，兼具反相分配的作用（在反相溶劑中）。因為凝膠過濾作用，所以大分
2018
07-16

超濾膜
超濾技術的關鍵是膜。膜有各種不同的類型和規(guī)格，可根據(jù)工作的需要來選用。早期的膜是各向同性的均勻膜，即現(xiàn)在常用的微孔薄膜，其孔徑通常是0.05mm～1.0mm。近幾年來生產(chǎn)了一些各向異性的不對稱超濾膜，其中一種各向異性擴散膜是由一層非常薄的、具有一定孔徑的多孔“皮膚層”（厚約0.1m和0.025mm），和一層相對厚得多的（約1m）更易通滲的、作為支撐用的“海綿層”組成。皮膚層決定了膜的選擇性，而海綿層增加了機械強度。由于皮膚層非常薄，因此、通透性好、流量大，且不易被溶質阻塞而導致流速下降。常用的膜
2018
07-10

氧傳感器類型
目前，市場上存在多種類型的氧傳感器。工業(yè)的發(fā)展需要氧傳感器具有高度，高重復性，并且使用簡單，少維護和校準等特點。基于這一目的，對于使用者來說，就需要應用的需要來考慮各種不同傳感器的優(yōu)點，選擇合適的傳感器。沒有一種傳感器是的。1.環(huán)境溫度電化學氧傳感器2.順磁性傳感器3.極譜氧傳感器4.氧化狂鋯傳感器環(huán)境溫度電化學傳感器環(huán)境溫度電化學傳感器是一種電流傳感器。常見是電化學傳感器是比較小的，局部密封，圓柱形的1-1/4英寸直徑，高0.75英寸左右，傳感器包含兩個不同的電極，浸泡在電解質溶液中，常規(guī)的電
2018
07-10

酶標儀原理
酶標儀：即酶聯(lián)免疫檢測儀（ELISAReader）是酶聯(lián)免疫吸附試驗的儀器?？珊唵蔚胤譃榘胱詣雍腿詣?大類，但其工作原理基本上都是一致的，其核心都是一個比色計，即用比色法來分析抗原或抗體的含量。ELISA測定一般要求測試液的終體積在250ul以下，用一般光電比色計無法完成測試，因此對酶標儀中的光電比色計有特殊要求。酶聯(lián)免疫吸附試驗方法酶標朕免疫吸附試驗方法簡稱酶標法，是標記技術中的一種，是從熒光抗體技術，同位素免疫技術發(fā)展而來的一種敏感，特異，快速并且能自動化的現(xiàn)代技術。酶標法的基本原理是將抗
2018
07-09

蛋白質純化親和層析法
若表達蛋白質上含有一段六個His的片段，而親和吸附膠上接有鎳離子，此蛋白質會特異性地結合到吸著膠體；洗去雜質后可imidazole洗脫目標蛋白質。（Pharmacia操作手冊，AffinityChromatography）。儀器設備：親和層析管柱（Bio-Rad731-1550Poly-Prepcolumn,0.8×4cm）部分收集器（另需準備干凈試管約25支）藥品試劑：金屬螯合親和層析膠體（Ni-NTAagarose,QIAGEN30210）1mL◆在交聯(lián)瓊脂糖凝膠上接有nitrilotria
2018
07-09

抗體的純化：鹽析法
精制抗體的方法很多。一般采用綜合技術，避免蛋白變性。如分離IgG時，多結合使用鹽析法與離子交換法，以求純化。提取IgM的方法也很多，如應用凝膠過濾與制備電泳法，或離子交換與凝膠過濾等。一、原理蛋白質在水溶液中的溶解度是由蛋白質周圍親水基團與水形成水化膜的程度，以及蛋白質分子帶有電荷的情況決定的。當用中性鹽加入蛋白質溶液，中性鹽對水分子的親和力大于蛋白質，于是蛋白質分子周圍的水化膜層減弱乃至消失。同時，中性鹽加入蛋白質溶液后，由于離子強度發(fā)生改變，蛋白質表面電荷大量被中和，更加導致蛋白溶解度降低，
2018
07-06

親和吸附劑的選擇和制備
選擇并制備合適的親和吸附劑是親和層析的關鍵步驟之一。它包括基質和配體的選擇、基質的活化、配體與基質的偶聯(lián)等等。基質基質的性質基質構成固定相的骨架，親和層析的基質應該具有以下一些性質：1.具有較好的物理化學穩(wěn)定性。在與配體偶聯(lián)、層析過程中配體與待分離物結合、以及洗脫時的pH、離子強度等條件下，基質的性質都沒有明顯的改變。2.能夠和配體穩(wěn)定的結合。親和層析的基質應具有較多的化學活性基團，通過一定的化學處理能夠與配體穩(wěn)定的共價結合，并且結合后不改變基質和配體的基本性質。3.基質的結構應是均勻的多孔網(wǎng)狀
2018
07-06

離子交換劑的選擇、處理和保存
1.離子交換劑的選擇離子交換劑的種類很多，離子交換層析要取得較好的效果首先要選擇合適的離子交換劑。首先是對離子交換劑電荷基團的選擇，確定是選擇陽離子交換劑還是選擇陰離子交換劑。這要取決于被分離的物質在其穩(wěn)定的pH下所帶的電荷，如果帶正電，則選擇陽離子交換劑;如帶負電，則選擇陰離子交換劑。例如待分離的蛋白等電點為4，穩(wěn)定的pH范圍為6-9，由于這時蛋白帶負電，故應選擇陰離子交換劑進行分離。強酸或強堿型離子交換劑適用的pH范圍廣，常用于分離一些小分子物質或在pH下的分離。由于弱酸型或弱堿型離子交換劑
2018
07-05

原子吸收光譜的基本原理
原子吸收光譜的產(chǎn)生*，任何元素的原子都是由原子核和繞核運動的電子組成，原子核外電子按其能量的高低分層分布而形成不同的能級，因此，一個原子核可以具有多種能級狀態(tài)。能量低的能級狀態(tài)稱為基態(tài)能級（E0=0），其余能級稱為激發(fā)態(tài)能級，而能低的激發(fā)態(tài)則稱為激發(fā)態(tài)。正常情況下，原子處于基態(tài)，核外電子在各自能量低的軌道上運動。如果將一定外界能量如光能提供給該基態(tài)原子，當外界光能量E恰好等于該基態(tài)原子中基態(tài)和某一較高能級之間的能級差?E時，該原子將吸收這一特征波長的光，外層電子由基態(tài)躍遷到相應的激發(fā)態(tài)，而產(chǎn)生原

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