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重組蛋白真核表達(dá)系統(tǒng)與原核表達(dá)系統(tǒng)的區(qū)別2023/03/20: 重組蛋白真核表達(dá)采用原核表達(dá)系統(tǒng)進(jìn)行研究，主要方法是將已克隆到目的基因DNA的片段的載體轉(zhuǎn)化到細(xì)菌中，通過IPTG誘導(dǎo)和終純化獲得所需的目的蛋白。其優(yōu)點(diǎn)是可以在短時(shí)間內(nèi)獲得基因表達(dá)產(chǎn)物，所需成本相對(duì)較低。目前的表達(dá)系統(tǒng)各有利弊，但一般理想的表達(dá)系統(tǒng)滿足以下幾點(diǎn)：一是特異性，不受其他內(nèi)源性因素影響，只能通過外源性無毒物激活。二是不干擾，不干擾細(xì)胞通路。以及誘導(dǎo)劑的誘導(dǎo)性、生物利用度、可塑性和劑量依賴性。因此，在選擇表達(dá)系統(tǒng)時(shí)，必須充分考慮各種因素，如蛋白質(zhì)性質(zhì)、實(shí)驗(yàn)條件、生產(chǎn)成本、表達(dá)水平和安全性

昆蟲細(xì)胞的保存培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)介紹2023/03/20: 實(shí)驗(yàn)材料昆蟲試劑、試劑盒胎牛血清臺(tái)盼藍(lán)乙醇儀器、耗材培養(yǎng)瓶培養(yǎng)箱細(xì)胞計(jì)數(shù)器攪拌臺(tái)轉(zhuǎn)子離心機(jī)實(shí)驗(yàn)步驟1.將4ml含10%胎牛血清的wan全昆蟲細(xì)胞培養(yǎng)基加入一個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶。取出一支凍存Sf9細(xì)胞的安瓿，迅速置于37℃水浴，用手前后劇烈搖動(dòng)融化之，當(dāng)安瓿的內(nèi)容物幾乎wan全融化時(shí)，將安瓿浸入70%乙醇，消毒外壁。2.打碎安瓿頸部，將內(nèi)容物轉(zhuǎn)移至25cm2培養(yǎng)瓶，用手輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)瓶，使細(xì)胞分散均勻，于27℃溫育2~3h直到細(xì)胞貼壁。3.除去舊培養(yǎng)液，換5ml含10%胎牛血清的新鮮wan全培養(yǎng)液。

蛋白質(zhì)組分離技術(shù)之雙向電泳技術(shù)2023/03/17: 蛋白質(zhì)雙向電泳（2-DE）技術(shù)是經(jīng)典的蛋白質(zhì)分離技術(shù)，包含在蛋白質(zhì)組學(xué)服務(wù)中。該項(xiàng)技術(shù)可以基于蛋白質(zhì)的2種不同特性即帶電荷和分子質(zhì)量來分離蛋白，廣泛用于生物學(xué)研究的各個(gè)方面。在新藥研發(fā)領(lǐng)域，利用雙向電泳技術(shù)可以篩選乳腺癌相關(guān)抗原及尋找藥物靶點(diǎn)和分析血清等研究。1、蛋白質(zhì)雙向電泳技術(shù)分離蛋白質(zhì)的原理蛋白質(zhì)組分析的首要要求是要將來自全細(xì)胞、組織或生物體中所包含的多達(dá)幾十種混合蛋白質(zhì)進(jìn)行分離、檢測(cè)和分析。2-DE技術(shù)是大多數(shù)蛋白質(zhì)組研究中分離復(fù)雜蛋白質(zhì)混合物的shou選技術(shù)。蛋白質(zhì)分離技術(shù)是蛋白質(zhì)組學(xué)

免疫組化染色之抗原的高壓修復(fù)法2023/03/17: 免疫組織化學(xué)染色是一項(xiàng)廣泛應(yīng)用于腫瘤病理診斷和神經(jīng)解剖學(xué)的技術(shù)，一些生物公司提供的免疫組化染色服務(wù)可以把免疫反應(yīng)的特異性、組織化學(xué)的可見性巧妙地結(jié)合起來，借助顯微鏡的顯像和放大作用，在組織、細(xì)胞甚至亞細(xì)胞水平檢測(cè)各種抗原物質(zhì)。免疫組化染色方法具有操作簡(jiǎn)單、靈敏度高、特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，在病理診斷和病理研究領(lǐng)域都起著十分重要的作用。免疫組化染色質(zhì)量受到多方面因素的影響，抗原修復(fù)是其影響因素之一，常見的抗原修復(fù)技術(shù)方法有高壓修復(fù)法和微波加熱修復(fù)法。在染色過程中，用甲醛固定后，在石蠟包埋過程中會(huì)使抗原性物

病原微生物的蛋白質(zhì)組學(xué)研究的作用2023/03/17: 病原微生物常會(huì)引起一些感染性疾病，為了解這些病原微生物的毒性因子、抗原以及進(jìn)行疫苗制備，需要進(jìn)行病原微生物的蛋白質(zhì)組學(xué)研究，一些公司提供蛋白質(zhì)組學(xué)服務(wù)。因?yàn)榈鞍踪|(zhì)是生命活動(dòng)的執(zhí)行者，一切基因和轉(zhuǎn)錄層次的變化，最終都是要在蛋白質(zhì)的層次發(fā)生變化才能表現(xiàn)出其生命意義，因此蛋白質(zhì)組學(xué)備受生命科學(xué)研究者的關(guān)注。蛋白質(zhì)是生物功能的最終執(zhí)行者，不僅開放閱讀框ORF和基因的最后確定需要蛋白質(zhì)研究的參與，而且由于存在mRNA水平的加工和蛋白翻譯后修飾，基因拷貝數(shù)和蛋白質(zhì)最終數(shù)量之間并沒有線性的對(duì)應(yīng)關(guān)系。在后基因組

蛋白分離純化方法之免疫親和層析法2023/03/17: 親和層析法是重組蛋白純化的重要方法之一，被廣泛應(yīng)用蛋白質(zhì)的研究領(lǐng)域，是分離純化和分析生物大分子尤其是蛋白質(zhì)的有力工具。免疫親和層析是親和層析方法的一種，該方法利用抗體與其相應(yīng)抗原的作用具有高度的特異性和高度結(jié)合力的特點(diǎn)，用適當(dāng)?shù)姆椒▽⒖乖蚩贵w結(jié)合到層析載體上，便可有效的分離和純化各自互補(bǔ)的免疫物質(zhì)。目前在重組蛋白純化中已經(jīng)使用單克隆抗體作為親和配體的親和層析方法，利用抗體-抗原模式，有可能得到每一種目標(biāo)蛋白的單抗，然后以單抗為配基，通過親和層析技術(shù)分離純化重組蛋白。該種方法的純化配屬和活性回收

【細(xì)胞密度】影響細(xì)胞培養(yǎng)的關(guān)鍵點(diǎn)分析2023/03/16: 細(xì)胞培養(yǎng)是生物學(xué)研究中，一類重要的實(shí)驗(yàn)方法。細(xì)胞養(yǎng)不好，細(xì)胞生物學(xué)研究也就無從談起。影響細(xì)胞培養(yǎng)狀態(tài)的因素有很多，細(xì)胞的密度，就是其中重要的一項(xiàng)。通常，細(xì)胞密度是指每單位面積或體積的細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞培養(yǎng)的適宜細(xì)胞密度取決于特定的細(xì)胞類型和培養(yǎng)目的。不同的細(xì)胞由于來源不同，特性也會(huì)有所不同，有的細(xì)胞比較依賴于高密度才能生長(zhǎng)，所以在進(jìn)行復(fù)蘇、傳代等操作時(shí)需要注意。生長(zhǎng)速度慢的細(xì)胞，譬如內(nèi)皮細(xì)胞，初始細(xì)胞密度略高一些，生長(zhǎng)狀態(tài)會(huì)比較好；還有一些細(xì)胞生長(zhǎng)速度比較快，如巨噬細(xì)胞或某些腫瘤細(xì)胞，初始細(xì)胞密度較低

【細(xì)胞培養(yǎng)】細(xì)胞培養(yǎng)板的選擇和使用2023/03/16: 細(xì)胞培養(yǎng)板作為培養(yǎng)細(xì)胞的一種常用和重要的工具，形狀、規(guī)格、用途多樣。你是否也為如何選擇適合的培養(yǎng)板而迷茫？你是否正為如何方便、正確使用培養(yǎng)板而苦惱？你對(duì)如何處理培養(yǎng)板是否也有困惑？對(duì)不同的培養(yǎng)板各有什么妙用你又有何體會(huì)？遠(yuǎn)慕一一為大家解惑。細(xì)胞培養(yǎng)板的選擇1）細(xì)胞培養(yǎng)板依底部形狀的不同可分為平底和圓底（U型和V型）；2）培養(yǎng)孔的孔數(shù)有6、12、24、48、96、384、1536孔等；3）根據(jù)材質(zhì)的不同有Terasaki板和普通細(xì)胞培養(yǎng)板。具體選擇時(shí)根據(jù)培養(yǎng)細(xì)胞的類型、所需培養(yǎng)體積及不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康?

【蛋白酶K小知識(shí)】蛋白酶K生產(chǎn)過程中的挑戰(zhàn)2023/03/16: 蛋白酶K(ProteinaseK)是一種廣譜絲氨酸蛋白酶,蛋白酶K于1974年在fungusEngyodontiumalbum的提取物中發(fā)現(xiàn)。能合成該種蛋白酶的微生物能在以角蛋白(Keratin)作為唯1碳源和氮源的環(huán)境中生長(zhǎng)，說明該酶可以消化角蛋白，因此被稱為“蛋白酶K”。蛋白酶K由一條肽鏈組成，含有277個(gè)氨基酸，該蛋白的相對(duì)分子量~28.9kDa，蛋白酶K是一種穩(wěn)定且具有高活性的絲氨酸蛋白酶。晶體和分子結(jié)構(gòu)研究證據(jù)表明該酶屬于枯草素家族，具有活性位點(diǎn)催化三聯(lián)體(Asp39-His69-Se

實(shí)驗(yàn)室試劑儲(chǔ)存保管的原則和注意事項(xiàng)2023/03/16: 試劑是我們實(shí)驗(yàn)室工作者的工具也是安全隱患所在點(diǎn)，如何正確保存是關(guān)鍵~！下面跟著遠(yuǎn)慕生物一起了解一下吧?；瘜W(xué)品的儲(chǔ)存保管1.所有化學(xué)藥品的容器都要貼上清晰永jiu標(biāo)簽，標(biāo)明內(nèi)容及其潛在危險(xiǎn)。2.所有化學(xué)藥品都應(yīng)具備物品安全數(shù)據(jù)清單。3.熟悉所使用的化學(xué)藥品的特性和潛在危害。4.對(duì)于在儲(chǔ)存過程中不穩(wěn)定或易形成過氧化物的化學(xué)藥品需加注特別標(biāo)記。5.化學(xué)藥品應(yīng)儲(chǔ)存在合適的高度，通風(fēng)櫥內(nèi)不得儲(chǔ)存化學(xué)藥品。6.裝有腐蝕性液體容器的儲(chǔ)存位置應(yīng)當(dāng)盡可能低，并加墊收集盤，以防傾灑引起安全事故。7.將不穩(wěn)定的化學(xué)品

標(biāo)準(zhǔn)品名詞解釋你不得不知道的那些知識(shí)2023/03/15: 1.標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)/標(biāo)準(zhǔn)樣品referencematerial（RM）具有一種或多種足夠均勻且穩(wěn)定規(guī)定特性的材料，已被確定其符合測(cè)量過程的預(yù)期用途。注1：RM是一個(gè)通用術(shù)語。注2：特性可以是定量的或定性的（例如：物質(zhì)或物種的屬性）。注3：用途可包括測(cè)量系統(tǒng)的校準(zhǔn)、測(cè)量程序的評(píng)估、給其他材料賦值和質(zhì)量控制。2.有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)/標(biāo)準(zhǔn)樣品certifiedreferencematerial（CRM）采用計(jì)量學(xué)上有效程序?qū)σ环N或多種規(guī)定特性進(jìn)行定值的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)/標(biāo)準(zhǔn)樣品，并附有標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)/標(biāo)準(zhǔn)樣品證書提供規(guī)定特性的

指示劑分類、原理用量以及配制介紹2023/03/15: 指示劑是化學(xué)試劑中的一類。在一定介質(zhì)條件下，其顏色能發(fā)生變化、能產(chǎn)生渾濁或沉淀，以及有熒光現(xiàn)象等。常用它檢驗(yàn)溶液的酸堿性；滴定分析中用來指示滴定終點(diǎn)；環(huán)境檢測(cè)中檢驗(yàn)有害物。一般分為酸堿指示劑、氧化還原指示劑、金屬指示劑、吸附指示劑等。指示劑分類1、酸堿指示劑指示溶液中H+濃度的變化，是一種有機(jī)弱酸或有機(jī)弱堿，其酸性和堿性具有不同的顏色。指示劑酸HIn在溶液中的離解常數(shù)Ka=[H+][In-]/[HIn]，即溶液的顏色決定于[In-]/[HIn]，而[In-]/[HIn]又決定于[H+]。以甲基橙

【化學(xué)試劑分類】實(shí)驗(yàn)人不可不知的化學(xué)試劑知識(shí)！2023/03/15: 早期的化學(xué)試劑只是指“化學(xué)分析和化學(xué)試驗(yàn)中為測(cè)定物質(zhì)的組分或組成而使用的純粹化學(xué)藥品”。后來又被擴(kuò)展為“為實(shí)現(xiàn)化學(xué)反應(yīng)而使用的化學(xué)藥品”，而今的“化學(xué)試劑”所指的化學(xué)藥品早已超出了這一范疇。有人認(rèn)為“在科學(xué)實(shí)驗(yàn)中使用的化學(xué)藥品”都可稱為“化學(xué)試劑”。對(duì)化學(xué)試劑更全面的定義可以是：在化學(xué)試驗(yàn)、化學(xué)分析、化學(xué)研究及其它試驗(yàn)中使用的各種純度等級(jí)的化合物或單質(zhì)。1、HPLC級(jí)高純液相色譜溶劑HPLC試劑具有以下優(yōu)點(diǎn)：①低紫外吸收；②非揮發(fā)性物質(zhì)、游離酸、游離堿和水份含量低；③可用于熒光檢測(cè)。用途：用于液

核酸檢測(cè)的原理原來是這樣的！2023/03/14: 你知道核酸檢測(cè)是怎么發(fā)現(xiàn)病毒的嗎？這種黑科技是怎么讓看不見的病毒“顯形”的？核酸是什么？從生物誕生開始，核酸就承擔(dān)著記錄和傳遞遺傳信息的功能。我們熟悉的DNA就是核酸的一種，全稱“脫氧核糖核酸”，呈雙螺旋結(jié)構(gòu)，是人類遺傳物質(zhì)的載體。另一種核酸大家可能比較陌生，它叫RNA，又被稱作“核糖核酸”，新型guan狀病毒遺傳物質(zhì)的載體便是單鏈RNA。從本質(zhì)上說，核酸是病毒最基礎(chǔ)的結(jié)構(gòu)。病毒由DNA或RNA其中一種組成，就像DNA會(huì)賦予每個(gè)人獨(dú)1無2的外表，病毒長(zhǎng)成什么樣子，有怎么樣的作用效應(yīng)，在人體對(duì)應(yīng)出

你是怎么分辨各種RNA酶的？2023/03/14: RNA酶RNA酶，是一種將RNA水解成小分子核苷酸的核糖核酸酶。不同的RNase其專一性不同，因此作用的底物及切割位點(diǎn)也不一樣。今天遠(yuǎn)慕生物就給大家扒一扒各種特色RNA酶的作用及應(yīng)用場(chǎng)景。RNaseRRNaseR是一種Mg2+依賴性的3’→5’核糖核酸外切酶，基本能消化所有線性RNA，但不消化套索或環(huán)狀RNA，或者短于7個(gè)核苷酸的具有3’突出端的雙鏈RNA。即是除了tRNAs，5SRNA和內(nèi)含子套索外，大多數(shù)細(xì)胞RNAs都將被RNaseR完quan消化。應(yīng)用：circRNA富集、cDNA文庫的內(nèi)

你不得不知的RNA磷酸酶/外切酶/激酶知識(shí)2023/03/14: RNA核酸外切酶Terminator5'-Phosphate-DependentExonucleaseTerminatorExonuclease是一種5’→3’進(jìn)行性核酸外切酶，可降解帶有5’單磷酸的RNA。它不會(huì)降解具有5’三磷酸、5’-帽結(jié)構(gòu)(例如大多數(shù)真核mRNA帶有的5’-帽結(jié)構(gòu))或5’OH的RNA。它也消化帶有5’單磷酸的DNA。該酶不受蛋白形式的RNase抑制劑的抑制。應(yīng)用：●鑒定RNA轉(zhuǎn)錄本的5’末端；●富集mRNA樣品，無需使用oligo(dT)、樹脂或磁珠去除rRNA；RNA磷

RNA聚合酶的種類和功能介紹2023/03/14: RNA聚合酶RNA聚合酶（RNApolymerase）是以一條DNA鏈或RNA為模板催化由核苷-5′-三磷酸合成RNA的酶。常見的RNA聚合酶是催化以DNA為模板、三磷酸核糖核苷為底物、通過磷酸二酯鍵而聚合的合成RNA的酶。另外，RNA復(fù)制也需要RNA聚合酶催化。因?yàn)樵诩?xì)胞內(nèi)與基因DNA的遺傳信息轉(zhuǎn)錄為RNA有關(guān)，所以也稱轉(zhuǎn)錄酶。原核生物的RNA聚合酶組成和功能原核生物大腸桿菌RNA聚合酶的研究得比較透徹的，全酶由五種亞基組成，去掉δ亞基的部分稱為核心酶，核心酶本身就能催化苷酸間磷酸二酸鍵形成。

遠(yuǎn)慕簡(jiǎn)述抗體lgM,lgE,lgM,lgA,lgD2023/03/13: 1、IgM抗體：一般為保護(hù)性抗體，具有免疫性。IgM是個(gè)體發(fā)育過程中最早合成和分泌的抗體，在胚胎發(fā)育晚期的胎兒即能產(chǎn)生IgM，故臍帶血lgM升高提示胎兒有宮內(nèi)感染。IgM也是初次體液免疫應(yīng)答中最早出現(xiàn)的抗體，是機(jī)體抗感染免疫的“先頭部隊(duì)”；血清中IgM升高，提示新近發(fā)生感染，可用于感染的早期診斷。2、IgE抗體：IgE是正常人血清中含量最少的抗體，主要由黏膜下淋巴組織中的漿細(xì)胞分泌。IgE抗體尾部與嗜堿細(xì)胞、肥大細(xì)胞的細(xì)胞膜結(jié)合。當(dāng)抗體與抗原結(jié)合后，嗜堿細(xì)胞與肥大細(xì)胞釋放組織胺一類的物質(zhì)促進(jìn)炎癥

遠(yuǎn)慕簡(jiǎn)述特異性IgG抗體的四種技術(shù)2023/03/13: 特異性IgG抗體技術(shù)都有什么？1.鹽析法多采用硫酸銨鹽析法或硫酸鈉鹽析法。2.凝膠過濾法蛋白質(zhì)分子量不同，通過凝膠介質(zhì)時(shí)的洗脫速度不同。血清蛋白的分級(jí)分離常用該法。按分子大小可分為3組：第1組：IgM和一些脂蛋白；第2組：IgG和較少量的IgA、IgD、IgE等；第3組：白蛋白、血清黏蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白等。該法過濾條件溫和，不影響IgG活性。常結(jié)合鹽析法提取IgG。3.離子交換層析法常用的離子交換劑是DEAE纖維素。該法可獲得較純的IgG，且不影響抗體活性。4.親和層析法將純化抗原制成親和層析柱，抗

離子交換柱層析法（層析實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)介）概略2023/03/13: 一、原理：有些高分子物質(zhì)含有一些可以分離的基因，例如-SO3H，-COOH等，因此可以和溶液中的離子產(chǎn)生交換反應(yīng)。如：R-SO3H＋M+————R-S3M＋H+或R-NH3OH＋CL－—————R-NH3CL＋OH－這類高分子物質(zhì)通稱離子交換劑，其中使用最pu遍的是離子交換樹脂。由于一定的離子交換劑對(duì)不同離子的親和力不同，因此在洗提過程中，不同的離子在離子交換柱上的遷移速度也不同，最后得到分離。二、目的與要求：本實(shí)驗(yàn)是采用Zerolit225型陽離子交換樹脂所裝的柱，選以特定的PH緩沖洗脫液來分

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